Isolatie van Vetweefsel immuuncellen

Historisch gezien, heeft het vetweefsel (AT) is bekeken als een inerte orgaan van lipide opslag, die uit en krimpt in reactie op de energiebalans. We begrijpen nu dat AT staat voor een dynamische endocrien orgaan dat actief scheidt een aantal hormonen, die rechtstreeks van invloed eetgedrag en systemische glucose-homeostase. Bovendien, de afgelopen tien jaar is er een toenemende appreciatie voor vele populaties van immuuncellen die in de AT stromale vasculaire fractie (SVF), en hun bijdrage aan AT homeostase.

De mogelijkheid om het scheiden AT adipocyten en SVF met een collagenase digestie gevolgd door differentiële centrifugatie werd eerst beschreven door Rodbell in 1964 ^1. Collagenase II wordt het meest gebruikt voor adipocyten en SVF scheiding vanwege onderhoud van adipocyten insulinereceptoren ^1. Vroeg op, enzymatische fractionering van AT werd voornamelijk gebruikt om adipo studerenCyte metabolisme en preadipocytes isoleren. Meer recent is deze techniek, in combinatie met de ruime beschikbaarheid van flowcytometers en de steeds toenemende aantal commercieel beschikbare fluorofoor-geconjugeerde antilichamen, vergemakkelijkt de karakterisering van AT immuuncellen.

Hoewel de aanwezigheid van immuuncellen in ontstoken AT eerder beschreven ^2, de rudimentaire papers door Weisberg et al.. en Xu et al.. gepubliceerd in 2003 waren de eerste om de accumulatie van AT macrofagen (ATM) in obesitas, waarbij inflammatoire cytokines uitscheiden en correleren met AT-specifieke en systemische insulineresistentie ^3,4 documenteren. Deze waarnemingen diende als basis van een nieuw gebied van onderzoek onlangs bedacht, "immunometabolism," ⁵ en werden opgevolgd door studies wat impliceert diverse immuuncelpopulaties, waaronder dendritische cellen ^6, mestcellen ^7, T-cellen ^{8 –}10, B-cellen ^11, NKT cellen ^{12, 13} eosinofielen en neutrofielen ^14,15 in de ontwikkeling van obesitas geassocieerd insulineresistentie.

Het doel van dit artikel is een gedetailleerde beschrijving van de collagenase digestie techniek om cellen van het AT SVF isoleren en karakteriseren geldautomaten en AT T cellen via flowcytometrie verschaffen. Dit protocol is geoptimaliseerd voor muis AT, maar kunnen kijkers genieten van het lezen van een uitstekend artikel verstrekken van uitgebreide informatie over optimalisatie van deze techniek voor menselijke AT ^16. De doelgroep van dit artikel bevat de onderzoekers met een beperkte ervaring in het werken met de muis AT en het uitvoeren van flowcytometrie. Een aantal praktische overwegingen voor het balanceren van cellulaire opbrengst en rentabiliteit, tijd en middelen worden verstrekt, alsmede een optimale flowcytometrie controles gepresenteerd voor het karakteriseren van AT immuuncelpopulaties. In aanvulling op ons protocol, lezers zijn referred een recent artikel van Jupiter Basu et al.. een goede bespreking van enkele van de technische aspecten van flowcytometrie passende controles en vergoedingen ¹⁷ omvatten.