Förderung von Überleben und die Differenzierung neuraler Stammzellen mit Fibrin und Growth Factor Cocktails nach schweren Rückenmarksverletzungen

Rückenmarksverletzung (SCI) oft Schäden, die nicht nur der weißen Substanz, die Signale vom und zum Gehirn führen, sondern auch die zentrale graue Substanz, was Segmentverlust von Inter und Motor-Neuronen. Die Folge ist der Verlust der SCI sowohl motorische und sensorische Funktion unterhalb der Läsion. Leider hat der erwachsenen Zentralnervensystem (ZNS) nicht spontan regenerieren, was zu einer dauerhaften Funktionsdefizite ^ein. Daher ist der Wiederaufbau des verletzten Rückenmarks und Erwachsenen Verbesserung der motorischen, sensorischen und vegetativen Funktion ein wichtiges Ziel der SCI Forschung. Neuronale Stammzellen (NSCs), auch direkt aus embryonalen oder adulten ZNS isoliert, sind überzeugende Kandidatenzellen, um verlorene Neuronen und Glia zu ersetzen. Darüber hinaus sind diese Zellen haben das Potenzial, neue Funktionsrelais bilden axonalen Leitung über eine Läsion ^2,3 wiederherzustellen.

Bisher hat es nicht eine detaillierte Erläuterung der anatomischen, electrophysiologische und Verhaltenseffekte von neuronalen Relais Bildung durch transplantierte NSCs nach schweren SCI. Es gibt mehrere Gründe dafür: Erstens, NSCs oder transplantierten fetalen ZNS-Gewebe überleben schlecht, wenn sie in großen Läsion Hohlräume gepfropft. Frühere Studien zeigen erhebliche frühen Zellverlust, so dass große, leere zystische Läsion Hohlräume ^4,5. In einigen Studien die transplantierten Zellen anschließend aufteilen würde und füllen die Läsion Hohlraum ^4,5, aber dies könnte nach einer Verzögerung von Tagen bis Wochen auftreten, und anschließende Befüllung Läsion möglicherweise nicht vollständig oder konsistent sein. Zweitens, ein effizientes Tracking-System, das Sound-Daten auf das Überleben der Zellen, Differenzierung / Reifung und Auswuchs von transplantierten NSCs bietet fehlte. Die meisten frühen Studien genutzt antegrade und retrograde Markierung zu axonalen Projektionen aus Transplantationen ^2,3 verfolgen. Nur teilweise und oft undeutlich markierten axonale Projektionen aus transplantierten Zellen und Tracerverfahren Diese Techniken sind jedoch subjektivt, um Artefakte durch Farbstoff Leckage über den implantierten Zellen. Andere Gruppen verwendet menschlichen spezifischen neuronalen Marker zur axonalen Projektionen nach Transplantation von humanen fötalen NSCs in Rückenmark verletzt Nagetier ^5,6 kennzeichnen. Doch in jenen Studien, die Heterotransplantate nicht durchweg gut überleben. Kürzlich, virale Lieferung der GFP-Reporter-Gen wurde verwendet, um kultiviert NSCs ^7,8 kennzeichnen. Allerdings war die GFP-Expression oft widersprüchlich und kann nach unten reguliert werden ^7. Kürzlich wurde die Verwendung von transgenen Mäusen oder Ratten Spender des Reportergens GFP oder die menschliche plazentale alkalische Phosphatase stabil exprimieren, dramatisch verbessert die Verfolgung von transplantierten neuralen Stammzellen / Vorläuferzellen in vivo ^9,11. Drittens, einige Studien zeigen, dass in vitro kultivierten Ratten NSCs entweder aus embryonalen oder adulten ZNS, ausschließlich in Gliazellen Linien differenzieren, wenn in das Milieu des intakten oder verletzten Erwachsenen Rückenmark transplantiertd ^7,12,13, trotz der Tatsache, dass diese neuronalen Stammzellen zur Differenzierung zu Neuronen und Gliazellen sowohl in vitro, was anzeigt, dass die lokalen Umgebungen kann das Schicksal von Stammzellen zu diktieren. Alternativ können kultiviert NSCs, vor allem aus adulten ZNS abgeleitet, intrinsische Eigenschaft defaulty müssen in Gliazellen Linien in vivo ¹³ unterscheiden.

Aufgrund der oben diskutierten Einschränkungen unserer Gruppe vor kurzem ein neues Protokoll entwickelt, um embryonale NSC-Tracking, das Überleben und die Differenzierung / Reifung in der schwer verletzten Erwachsenen Rückenmark zu verbessern. Kurz gesagt, begannen wir mit einer stabilen transgenen Fischer 344 Ratten-Inzuchtlinie einen GFP-Reporter-Gen, das die GFP-Expression in vivo nach Transplantation erhält ¹⁴ abzugeben. Weiter haben wir frisch getrennt NSCs aus embryonalen Tag 14 Fischer 344 Rückenmark, eine Stufe der Entwicklung, die das Potenzial, beide Neuronen und Gliazellen zu generieren behält. Schließlich haben wir eingebettetfrisch gewonnenen NSCs in eine Fibrin-Matrix Wachstumsfaktoren enthält, ^15-17, um die Zellen zu halten und verteilen sie in einem großen Hohlraum Läsion, mit dem Ziel, Transplantat Überleben der Zelle, Differenzierung und Integration. Die Transplantate wurden in Websites von T3 komplette Durchtrennung, zwei Wochen nach Verletzungen des Rückenmarks platziert. Diese transplantierten Zellen konsequent gefüllt vollständige Durchtrennung Standorten und in reichlich Neuronen, die eine große Anzahl von Axonen in Wirtsrückenmark über lange Distanzen ¹⁸ verlängert differenziert. Ähnliche Ergebnisse wurden mit kultivierten humanen neuralen Stammzelltransplantate zur Immun-Mangelratten ¹⁸ erhalten.