역 형성 갑상선 암의 동소 마우스 모델

1. 세포의 준비 주 : 2) 장소 리겔 1) 전체 RPMI 1640 기반 문화 미디어 레시피 (500 ML) 435 ML RPMI 1640, 50 ML 열 비활성화 된 FBS 5 ML 비 필수 아미노산, 5 ML 나트륨 피루 베이트, 5 ML 항생제 항진균를 포함 4 ° C에서 세포 수확 하루 전에. 인간 ATC 세포주 THJ-11T 8 6 잘 배양 접시에서 자란 80 ~ 90 %의 합류 후 수확하고 있습니다. 실온에서 4 분 200 XG에서 원심 분리하여 펠렛 세포. RPMI 1640 미디어 [2 ㎖ / 6 잘 플레이트]에서 미디어를 Resuspend 세포를 대기음. 0.4 % 판 블루 염색 하나의 볼륨에 추가하고 TC10 자동 셀 카운터를 사용하여 세포 밀도를 결정, 세포 현탁액의 작은 양을 가지고. 주입 5 × 10 5 세포 / 마우스 횟수에 마우스를 얻기 위해 필요한 세포 현탁액의 볼륨을 계산합니다. 참고 : 광고를 보장하기 위해 당신이 마우스의 더블 번호 (예 : 5 마우스를 주입하는 경우 10 쥐를 주입하는 것처럼, 그 세포 현탁액을 준비) 주입하는 것처럼 주입 세포 현탁액을 동일시 세포를 준비합니다. 15 ML 원뿔 튜브에 세포 현탁액의 필요한 양을 전송합니다. 실온에서 4 분 200 XG에서 원심 분리하여 펠렛 세포. 전체 RPMI 1640 미디어 매체를 Resuspend 세포를 대기음. 1.6 ML 튜브에 세포를 전송, 마트 리젤의 1 볼륨을 추가하고 천천히에 피펫 스에 의해 부드럽게 섞는다. 참고 : 각 마우스 세포 현탁액 / 마트 리젤 칵테일의 10 μl를 받게됩니다. 10 μL 주사 양에 떠있는 5 × 10 5 세포가 성공적으로 이전 ATC 동소 연구 9-10에서 사용하고 있기 때문에, 우리는이 보고서에서 이러한 매개 변수를 사용했습니다. 사용할 준비가 될 때까지 얼음에 세포 현탁액을 놓습니다. _title "> 2. 마우스 제조 70 % 에탄올로 모든 표면을 닦아 해부 범위와 주변 지역을 포함하는 외과 영역을 청소합니다. 동물이 수술에서 회복 될 가열 램프 / 패드의 전원을 켭니다. 1 ML, 27G ½ "투베르쿨린 주사기를 사용하여 10g의 체중 복강 당 0.1 ML 케타민을 / xylazine (케타민 9 MG / ML 및 xylazine 1mg/ml의 구성된 약물 칵테일)를 관리합니다. 수술 준비 마우스 : 1) 베타 딘 적신 거즈, 4를 수행 최종 스크럽) chorhexadine 젖은 거즈 사각형, 3으로 수술 영역을 세 번 문질러 마우스의 목 영역 (턱 선에서 흉골과 팔을 밖으로의 상단까지), 2) 면도 ) 부드럽게 건조 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. 마우스가 적절하게 침착되어 있는지 확인하기 위해 반사 페달을 확인합니다. 해부 범위에 처분 할 수있는 메마른 필드 장벽 지느러미 드러 누움에 동물을 배치하고 피복 테이프와 장소에서 동물을 고정합니다. 스크럽 손과 Fingernails는 불임 수술 장갑에 넣어. 멸균 방식으로, 개복 수술을 포장하고 악기를 정렬합니다. 단지 수술 부위가 노출 떠나, 동물에 무균 드레이프를 놓습니다. 3. 갑상선 세포 주입 수술 액세스 멸균 일회용 메스를 사용하여 목의 정중선을 따라 1에 1.5 cm 세로 절개를합니다. 참고 : 정중선에서 편차가 기관에 액세스 할 깊은 절단 복잡. 매우 정확한 중간 선 절개는 당신이 함께 왼쪽과 오른쪽 침샘을 들고 막 조직을 애타게 절단 할 수 있으며 큰 동맥을 새김 눈 또는 단절의 가능성을 줄일 수 있습니다. 기관을 둘러싼 스트랩 근육에 두 번째 절개를 다음 오른쪽 갑상선을 노출 옆에 절개 근육의 오른쪽을 당깁니다. Hemostats는 근육 층을 보유하는이 시점에서 사용할 수 있습니다갑상선에 쉽게 접근 할 수있다 (그림 1)에 대한 부분입니다. 참고 : 절차는 두 가지 수술 직원에 의해 수행하는 경우 준비 주사 주사기 지원 직원 외과 의사 전달되는 동안 또는, 근육 층이 단순히 집게로 다시 개최 할 수있다. 천천히 조심스럽게 바늘을 제거 31G 5 / 16 "인슐린 주사기를 사용하여 오른쪽 갑상선에 세포 현탁액의 10 μl를 주입. 4. 외과 사이트 및 마우스 복구 폐쇄 하나를 연속 또는 단속 봉합 스타일을 사용하여 6.0 봉합 재료와 봉합 근육 층. 같은 방식으로 스티치 피부. 직접 절개 사이트를 통해 트리플 항생제 연고의 레이어를 적용합니다. 따뜻한 가열 패드에 지느러미 드러 누움에 복구하는 동물을 허용합니다. 동물의 도움없이 흉골 드러 누움를 얻을 수 있습니다되면, 다른 마우스와 함께 다시 배치 할 수 있습니다. <P 클래스 = "jove_title"> 5. 수술 후 모니터링 및 조직 컬렉션 수술 후 일주일 동안 매일 절개 사이트와 동물의 전반적인 건강을 확인 후, 일주일에 한 번 확인합니다. 봉합이 14 일 후에 그대로 있다면, 그들은 제거됩니다. 참고 : 감소 상태 (예를 들어, 상당한 체중 감소, 초라한 머리, 숨소리)의 흔적을 전시 동물은 안락사해야하며, 조직을 수집. 일단 마우스는 xylazine / 케타민 진정으로 위의 설명과 같이 관리, 소정의 수술 시간이 지점에 도달했습니다. intracardially 동물을 붓는다 수확 갑상선 / 기관과 관심의 다른 조직 (여기에서는 자세히 설명하지 않음).