进行阴道灌洗，结晶紫染色法和阴道细胞学评价小鼠发情周期分期鉴定

1。准备试剂对于无菌阴道灌洗，高压灭菌双蒸水（DDH 2 O），并存储在一个密封的容器中，室温，直到需要。 对于细胞学评估，结晶紫粉0.1克至100毫升DDH 2 O拌匀。结晶紫染色（0.1％）可被存储在一个密封的容器中，在室温下，直到需要。 2。收集阴道细胞（阴道灌洗） 胶乳灯泡放置在无菌的200μl的尖端的端部和绘制最多约100微升无菌DDH 2 O的前端中使用的灰度作为准则的体积。 鼠标抬起她的笼子笼斗（盖），并把她与她的后腿/后端向您。 紧紧抓住尾巴和提升的后端。鼠标现在只有她的前爪抓料斗。在这一点上，鼠标可能会排尿。如果是这样的，等到排尿站。如果有尿留在阴道的入口，你可能想使用一个单独的尖端（ 即 ，不是你的样品采集头）冲洗开幕多余的DDH 2 O。 将在开幕式的阴道，注意不要穿透孔，阴道和宫颈的刺激能诱发假孕大鼠1,2的DDH 2 O填充尖。最近的报告表明，老鼠是不容易受到这种影响仍然应注意的侵袭程度，以尽量减少重复分析3。 轻轻地踏下灯泡，驱逐一季度的一半量的水（约25-50微升）在开幕阴道管。无尖插入液体会自发地吸进运河。缓慢地释放在灯泡上的压力。流体将撤回到尖。避免释放压力的速度太快，以防止误吸液到灯泡。过滤的尖头可能是有用的用于此目的。 重复前面的步骤使用相同的尖端，灯泡，和流体的4-5倍，在一个单一的样品，以获得足够数量的细胞。 流体放置在玻璃片上，并允许涂抹标本在室温下完全干燥。发情涂片干燥后，可立即染色或存储，并在以后的日子染色。 3。细胞学染色结晶紫* 4 将在科普林氏jar文件（或其他可比较的染色容器）中含有的结晶紫染色1分钟干滑动。 删除科普林氏的第二个罐子DDH 2 O洗净幻灯片DDH 2 O为1分钟。重复以上步骤。 删除多余的DDH 2 O幻灯片中一个轻型的组织，雨刮器的边缘，避免接触涂片染色。 移液器约15微升的顶部的涂片和盖的甘油打滑。或者，其他组织学安装试剂可以利用，以获得一个更永久的，非扩散染色。 *这里描述的染色方法是最简单的程序，可以在任何实验室进行。其他的方法可以提供更多的细节。例如，采用巴氏染色法，有核上皮细胞的成熟度来区分不太成熟的细胞染色的粉红色或橙染色的绿松石和更成熟的细胞。这些差异可以被用来举办提前或延迟发情前期。 4。阴道细胞学检查检查涂片，光镜下观察，以确定细胞类型。结晶紫从细胞中扩散，随着时间的推移使用甘油时，盖片染色后镜检应立即做。在分析时，应采取显微照片记录细胞学检查。 通过检查的entir开始Ë涂抹在较低的放大倍率。选择有代表性的区域并移动到一个更高的放大倍率。您将看到角化鳞状上皮细胞，白细胞，和/或有核上皮细胞（ 具有代表性的结果 ， 图1A-C）。细胞存在的比例将允许你确定你的鼠标动情期，在取样时（ 具有代表性的结果 ， 图1D-G）和她的激素水平（ 讨论 ， 图2）。 5。代表性的成果 细胞学检查：三种主要的类型的细胞中可检测到阴道涂片样品：（1）有核上皮细胞（ 图1A），（2）角化鳞状上皮细胞（ 图1B），和（3）白细胞（ 图1C）。有核上皮细胞胞浆淡染，较暗的彩色质膜，以及一个椭圆形的核（ <strONG>图1A）。角化鳞状上皮细胞是均匀地染色，更多边形的形状比他们的有核上皮前辈，和没有细胞核（ 图1B）。多形核白细胞，上皮细胞可区别于其形状不规则，深染多态性核，和小尺寸（ 图1C中 ，黑色箭头所示）。如果尿污染本在涂片，尿酸结晶很容易检测到由异种的任何预期类型的细胞（ 图3）的结晶结构体。如果发生这种情况，并不起眼的检测主要的细胞类型，涂抹应该被丢弃，而不是用于举办目的。 分段：涂片中观察到的细胞类型的相对比率上的一天的样品收集（ 图1D-G），可以用来识别你的鼠标的动情周期的阶段。在发情前期，细胞几乎完全集群的圆形，形成有核上皮细胞（ 图1D，代表细胞由白色箭头指示）。在发情期，细胞主要是角化鳞状上皮细胞，存在在密密麻麻的集群（ 图1E，代表细胞的箭头指示）。在发情后期，小深染白细胞占主导地位（ 图1F，代表电池用黑色箭头表示）。角化鳞状上皮细胞中可以观察到，往往在片段，（ 图1F，代表性的细胞用黑箭头表示）。在动情，罕见角化鳞状上皮细胞仍可能存在（ 图1G，代表性的细胞用黑色箭头表示），白细胞仍然占主导地位（ 图1G，代表性的细胞用黑色箭头表示）。发情后期可区别于发情间期核上皮细胞的外观在发情间期（ <stron G>图1G，代表细胞的白色箭头指示）。 图1。阴道涂片的细胞学评估可以用于识别动情期，三个主要类型的细胞中检测到阴道涂片样品的：（A）的有核上皮细胞，（B）的角化鳞状上皮细胞，和（C）的白细胞。涂片这些类型的细胞中存在的比率，可以使用（D）的动情前期，（E）的发情期，（F）的发情后期，或（G）的发情间期中描述的有代表性的结果 ，以确定小鼠。黑色箭头代表角化鳞状上皮细胞E，F和G点。黑色箭头C，F和G点代表leykocytes。在D和G的亮点代表的白色箭头核上皮细胞。 文件，“ALT =”图2“/> 图2。阴道涂片细胞学检查反映潜在的内分泌活动。还提供了详细讨论。 点击此处查看大图 。 图3。尿酸结晶可能会出现下面的结晶紫染色尿污染的样本 （A）的晶体是透明的，可以是各种尺寸（箭头和盒装（B）中放大的区域）。没有在这一领域存在的细胞。如果字段内的污染进行细胞学染色尿酸结晶存在，它可能难以准确地确定细胞类型，涂抹应该被丢弃。比例尺= 50微米。