Этот протокол описывает регулярного технического обслуживания и ухода для поддержания оптимальных условий для рыбок данио хозяйства. На видео показан протокол для обслуживания системы, регулярное жилья, питания, размножения и повышения рыбок данио личинки.
Этот протокол описывает регулярного ухода и обслуживания лаборатории рыбок данио. Данио рерио в настоящее время приобретает все большую популярность в области генетики, фармакологических и поведенческих исследований. В позвоночных, у рыбок данио долю значительное генетическое сходство последовательностей с людьми и используются в качестве животной модели для различных человеческих условиях болезни. Преимущества рыбок данио по сравнению с другими распространенными моделями позвоночных включает высокую плодовитость, низкие затраты на техническое обслуживание, прозрачные эмбрионы, и быстрого развития. В связи с влиянием интереса у рыбок данио исследования, необходимость установления и поддержания продуктивного объекта жилья рыбок данио также растет. Хотя литература доступна для содержания лабораторных рыбок данио, кратким протоколом видео отсутствует. Это видео иллюстрирует протокол для регулярного содержания, кормления, разведения и выращивания личинок рыбок данио. Этот процесс поможет исследователям понять естественное поведение и оптимальные условия zebrafisч хозяйства и, следовательно, устранения экспериментальных вопросов, которые исходят из условий рыбного хозяйства. Этот протокол будет огромной помощью для исследователей планирует создать лабораторию данио рерио, а также для аспирантов, которые намерены использовать рыбок данио качестве животной модели.
Данио рерио происходит из реки Ганг на севере Индии и становятся популярными в исследование как в их взрослой и личиночной стадии 2, рассмотрены Спенс и др.. 3. Данио рерио обладают рядом преимуществ по сравнению с другими моделями животных, таких как высокая плодовитость, легкость обслуживания, оптический оформления эмбрионов, быстрое эмбриональное развитие, и низкая стоимость обслуживания. Они поддаются генетическим манипуляциям 6 и подходит для высокой пропускной способностью 4,5 скрининга лекарственных средств. Их оплодотворение наружное что является преимуществом для их использования онтогенетики. В связи с этими благоприятными характеристиками, рыбок данио набирают популярность в генетике 7, фармакологические 8, и поведенческие исследования 9,10. Есть ряд проблем, для поддержания объекта рыбок данио и рыбок данио животноводства для получения эмбрионов. Здесь мы описываем наш опыт и рекомендации в решении этих проблем и оutline протокол для обслуживания системы, кормления, разведения и выращивания личинок.
Система технического обслуживания
Для поддержания данио рерио в здоровом состоянии, важно обеспечить их чистой среде, в нормально функционирующей системе аквариума. Важной частью этого меняется система фильтров регулярно, так что все танки получают надлежащего потока воды и чистой воды. Очень важно, чтобы избежать провала водоснабжения езды на велосипеде на каждом танке в связи с их трубами системы. Трубы можно очистить с помощью выше нормального давления и расхода воды, если блокирование имеет место. В идеале, около 10% воды в системе должно быть заменено в день, чтобы поддерживать хорошее качество воды. Кроме того, вода может быть заменена при изменении канистра или угольный фильтр. Это гарантирует, что грязь на хранение в трубах, соединяющих эти фильтры удаляют. Качество воды должна быть проверена на регулярной основе. Такие параметры, как щелочность, рН, температЮр, жесткость, аммиак, растворенный кислород, соленость и проводимости должны рассматриваться как важные факторы в представлении качества воды в системе (см. таблицу 2 подробнее). По крайней мере, нитратов, рН и температуры должны быть проверены на регулярной основе в целях обеспечения хорошего качества воды на жилье рыбок данио. Идеально нитратов (NO 3 -) уровней <50 мг / л 11; если высокий этих уровней может быть уменьшена заменой воды в циркуляционной системе с пресной водой системы. Иногда, фильтры не подходят хорошо, и утечка, поэтому рекомендуется проверить на герметичность после замены фильтра. Если поток воды из основного водохранилища заблокирован либо после замены водяного насоса или изменения фильтра, поток воды может быть восстановлен либо ослабления или удаления фильтра в течение нескольких секунд, чтобы освободить любой вакуум генерируется в трубах. Время, необходимое для изменения фильтра может меняться в зависимости от различных факторов, таких как общая биологическая нагрузка Oп система, чистота другие фильтры, и грязь на хранение в трубах. Таким образом, фильтры должны быть немедленно изменены, если они появляются грязные или если все танки не получают правильного водоснабжения. Рекомендуется также, что рыба чистая быть очищены с 70% этанола и промывается в воде для обеззараживания, и дают высохнуть, прежде чем использовать повторно. Сушка обеспечивает испарение этанола, который в противном случае является токсичным для рыб.
Большинство систем рыбок данио использовать де-хлорированной водопроводной воды, однако некоторые системы используют деионизированной воды. Это важно, чтобы проводимость воды в системе от 300 до ~ 1500 мкс, так как это уменьшает энергию рыб необходимо поддерживать тело солями. Таким образом, у рыбок данио не могут быть сохранены в деионизированной воде, если соли добавляют для поддержания оптимального уровня проводимости. Существует риск возможной высокой концентрации меди в системе воды, если водопроводная вода используется потому, что угольный фильтр не удаляет медь. Таким образом, иГКР должны проверить концентрации меди и медных трубопроводов избежать где это возможно.
Кормление
Данио рерио никогда не должно быть перекорм, так как это может увеличить уровень нитратов в воде, возможно, влияющих на их разведении 11, или жизнеспособность, так как некоторые рыбы могут умереть из-за переедания. Мы рекомендуем обеспечить не более еды в течение одного кормления, чем бак рыб можно закончить в течение 10 мин. Это очень важно для удаления соли из рассола креветки перед подачей их на рыбках данио, как избыточная концентрация солей приводит к смерти. Если больше яиц рыбок данио требуются, рыбу можно кормить три раза в день. Очистка танков заводчик рыбы ежедневно также повышает уровни производства яиц.
При подаче на водной системы среды обитания мы обычно выключить водяной насос и воздушный насос, чтобы рыбку съесть пищу в течение 10 мин. Это уменьшает количество пищи, которая смывается в фильтрах. Тем не менее, пользователи должны быть осторожны, чтобы бэрEmber, чтобы включить эти насосы потом снова.
Разведение
Данио рерио, как правило, при оптимальных условий размножения между ~ 3 и 18 месяцев. Парные разведения не должна быть выполнена в течение двух последовательных дней 11, однако в резервуаре разведения можно проводить ежедневно, как танк может содержать много рыбы, которая снижает вероятность той же пары рыб разводят в течение двух дней подряд. Разведение следует проводить на регулярной основе, даже если яйца не требуется. Этот процесс обеспечит цикл размножения рыб сохраняется. Рекомендуется есть больше женщин, чем мужчин в разведении настройки. Мужской рыбок данио менять своих партнерш на ежедневное 12 базисных что еще поддерживает эту рекомендацию. Кроме того, в нашей лаборатории мы изначально испытывал проблемы с размножением, однако, используя больше женщин, чем мужчин в разведении настройки помогли решить проблему. Кроме того, кормление с высоким содержанием белка КонтеNT диеты и креветки в два-три раза в день, смешивая рыб из разных танки (от разных родителей), поддерживая температуру разведения настройка между 27 и 28 ° C, и сжимая живот самок с их использованием труб яичников Нежный массаж дальнейшее совершенствование производства яиц. Мы рекомендуем вести учет рыбы линий / Истоки, чтобы избежать в животноводстве между братьями и сестрами. Это еще больше повышает эмбриона производства. Вести учет количества эмбрионов заложены рыб из каждого танка также рекомендуется. Это помогает при сохранении трека из лучших танков разведения рыбы и принятия мер по улучшению племенного дела в рыбе не откладывают яйца.
Повышение личинок
Кормление личинок должно начаться с 5 DPF (дней после оплодотворения). Молодые личинки могут питаться сухим кормом ~ 100 мкм (например, ZM100) или живого корма, такие как Paramecium и коловратки (который стимулирует рост). Еда размер может быть увеличен медленнодо 200 микрон (например ZM200) или 300/400 мкм (например, Zm300). Население взрослая рыба должна быть около 6-7 рыб на литр воды. Эта практика рекомендуется для лучшего обслуживания БПК (биологическое потребление кислорода) к танкам.
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Tammy Esmaili за ее помощь в управлении лабораторных расходных материалов. А.А. является получателем стипендии кандидат от Центра передового опыта для исследования заболеваний Альцгеймера и уход, школа медицинских наук, Университет Эдит Коуэн. MC получает PhD финансовой поддержке Ротари-клуба, Perth. М., GV, KT, и RNM финансируется за счет Фонда исследований Маккаскер Альцгеймера.
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |