جرذ الاهتمام لأمور ظاهرية مساريق: نموذج للتحقيق في حيوية الخلوي شارك في الأوعية الدموية
Summary
توضح هذه المقالة نموذج بسيط لتحفيز الأوعية الدموية في مساريق الفئران. نموذج تنتج زيادات هائلة في مجال الشعرية، التي تنتشر الأوعية الدموية والأوعية الدموية أكثر كثافة دورة زمنية قصيرة نسبيا في الأنسجة التي تسمح EN تصور وجه من شبكات الاوعية الدموية الدقيقة كله وصولا الى مستوى خلية واحدة.
Abstract
Microvacular نمو الشبكة وإعادة عرض من الجوانب الحاسمة لالتئام الجروح، والالتهابات، واعتلال الشبكية السكري، ونمو الورم والحالات المرضية الأخرى 1 و 2. ويعزى عادة إلى نمو شبكة الأوعية الدموية، الذي يعرف بأنه نمو أوعية جديدة من السفن الموجودة من قبل. كما عائية عملية مرتبطة مباشرة تخلق الشرايين، الذي يعرف بأنه اكتساب الشعرية من طلاء خلية حول الأوعية وتوسيع الوعاء. وغني عن القول الأوعية الدموية معقد وينطوي على عدة لاعبين على مستوى الخلوية والجزيئية 3. فهم كيف يمكن لشبكة الاوعية الدموية الدقيقة ينمو يتطلب التعرف على ديناميات المكانية والزمانية على طول التسلسل الهرمي للشبكة على مدار الساعة من الأوعية الدموية. هذه المعلومات هو أمر حاسم لتطوير علاجات تستهدف التلاعب نمو الأوعية.
نموذج الاهتمام لأمور ظاهرية الموضحة في هذه المقالة يمثل بسيط، نموذج يمكن استنساخه لstimulating الأوعية الدموية في مساريق الفئران. تم تكييفه من التئام الجروح في الفئران نماذج مساريق 4-7، و هو بديل لتحفيز الأوعية الدموية في مساريق عن طريق الحقن الملكية الفكرية المؤيدة للعائية وكلاء 8 و 9. نموذج الاهتمام لأمور ظاهرية غير جذابة لأنها تتطلب الحد الأدنى من التدخل الجراحي وتنتج دراماتيكي، ويزيد من استنساخه في براعم الشعرية، مجال الأوعية الدموية والأوعية الدموية أكثر كثافة دورة زمنية قصيرة نسبيا في الأنسجة التي تسمح لتصور ثنائية الأبعاد من شبكات الاوعية الدموية الدقيقة كله وصولا الى واحد خلية مستوى. حفز النمو يعكس ردود عائية الطبيعية في بيئة الفسيولوجية دون تدخل من الجزيئات عائية الأجنبية. باستخدام طرق وضع العلامات المناعى، وقد ثبت هذا النموذج مفيدا للغاية في تحديد أحداث رواية الخلوية العاملة في الأوعية الدموية. ويمكن ربط المحققون بسهولة المقاييس عائية أثناء وقت من اعادة عرض مع الوقت ليرة سوريةديناميات ecific، مثل التغيرات المظهرية الخلوية أو التفاعلات الخلوية 4، 5، 7، 10، 11.
Protocol
Discussion
وذكرت ونموذج الاهتمام لأمور ظاهرية في عام 2006 ويتم تكييف سابقة الميكانيكية نماذج إصابة مساريق الفئران من الأوعية الدموية 4-7 وتعطي نتائج مماثلة لنماذج راسخة حقن الملكية الفكرية التي تستفيد من الفئران مساريق 9. تم تحديد تجريبيا في الوقت الاهتمام لأمور ظاهرية 20 دقيقة على إنتاج رد فعل قوي عائية. في حين يمكن أن تختلف هذه الفترة الزمنية، فإنه لا يسمح للتطبيق المحلي لمثبطات عائية (4) لدراسات الآلية والتطبيق المباشر للخلايا الخارجية للدراسات نسب الخلية. ويدعم جدوى دمج الخلية إلى إعادة عرض الأنسجة المساريقي بواسطة الدراسات الأولية في مختبرنا باستخدام مسبقا المسماة خلايا نخاع العظم والخلايا الجذعية الوسيطة (الشكل 7)، ونجاح التحقيق في مصير الدهنية المشتقة من انسجة بشرية الملكية الفكرية حقن الخلايا 14 . في مختبرنا، وقد استخدمنا هذا النموذج لتحديد خلية حوطية كايسيotypic التغييرات على مدار الساعة للاستجابة عائية (10) وإلى تقييم إمكانات عائية خلال الحالات المرضية، مثل ارتفاع ضغط الدم 12. ويمكن أيضا للاستجابة عائية وتغيرات النمط الظاهري الخلية المرتبطة بهذا النموذج يمكن ملاحظته في الموديلات الأخرى المساريقي الفئران عائية بما في ذلك التعرض للنقص الأكسجة المزمن 10 و 11.
وجود قيود على نموذج الاهتمام لأمور ظاهرية هو أن الآليات الدقيقة اثار من الأوعية الدموية غير معروفة. وقد تم ربط الاهتمام لأمور ظاهرية للمساريق إلى تحبب الخلايا البدينة ومستويات الهيستامين زيادة 6، بعد إجراء مزيد من التحقيق مطلوب لكسب مزيد من التبصر. الحافز عائية مما لا شك فيه متعدد مضروب، مما ينتج عنه استجابة إعادة عرض قوي عبر التسلسل الهرمي لشبكة الاوعية الدموية الدقيقة. في حين أن آليات غير معروف يبقى نقد الرئيسية لهذا النموذج، واستنساخ وبساطته جعلها جذابة للتعرف على ديناميات الخلوية involفيد في العملية الشعرية المعقدة بطبيعتها تنتشر. يتم اعتماد استنساخ هذا النموذج من قبل مقاييس عائية مماثلة على مدار الساعة للنمو الاوعية الدموية الدقيقة عبر شبكة سلالات الفئران متعددة (ويستار الذكور والإناث، سبراغ داولي) في الدراسات التي نشرت سابقا من مختبرنا 10 و 12. منذ ذلك الحين، أن غالبية البالغين الأنسجة المساريقي الفئران هي أوعية دموية، ونموذج يسمح أيضا لأنسجة متعددة للفحص لكل حيوان. للأسف، وهذا النموذج لا ينطبق بالطبع على نماذج الماوس الوراثية ويندوز المساريقي الماوس على الأوعية الدموية أقل الأم، وفي تجربتنا، وتفتقر عادة ملاحظتها الشبكات المتفرعة. التطبيقات المستقبلية تشمل التحقيق في وظائف سفينة خلال الأوعية الدموية داخل حيوي باستخدام المجهر في نقطة زمنية محددة، والتحقيق في ديناميات الخلوية ذات الصلة المشاركة في lymphangiogenesis وتكوين الخلايا العصبية. على الرغم من أن حجم الأوعية الدموية الأصلي في نافذة المساريقي يبدو أن ROUالنسبي ghly مع تقدم العمر، وقد لاحظنا المتفرعة شبكات الاوعية الدموية الدقيقة في فئران ويستار الذكور في سن 4-5 أسابيع من العمر. هذه الملاحظات تشير إلى أنه يمكن أيضا نموذج الاهتمام لأمور ظاهرية يمكن تطبيقها على مقارنة الاختلافات عائية عبر العصور.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل مجلس الحكام في دولة LEQSF لويزيانا (2009-12)-RD-A-19 (PI: WL Murfee) وارتفاع ضغط الدم تولان ومركز الكلى للتميز التي تمولها منحة المعاهد الوطنية للصحة P20RR017659-08 (PI : L. غابرييل نافار).
Materials
| Name | Company | Catalogue Number | Additional Comments |
| Drape | Cardinal Health | 4012 | 12″x12″ Bio-Shield Regular Sterilization Wraps |
| Noyes Micro Scissor | Roboz Surgical Instrument | RS-5677 | Noyes Micro Dissecting Spring Scissors; Straight, Sharp-Blunt Points; 13mm Cutting Edge;0.25mm Tip Width, 4 1/2″ Overall Length |
| Graefe Forcep | Roboz Surgical Instrument | RS-5135 | Micro Dissecting Forceps; Serrated; Slight Curve; 0.8mm Tip Width; 4″ Length |
| Graefe Forcep | Roboz Surgical Instrument | RS-5130 | Micro Dissecting Forceps; Serrated, Straight; 0.8mm Tip Width; 4″ Length |
| 4-0 suture | ETHICON | 699G | (1.5 metric) ETHILON Nylon Suture Black Monofilament |
| 5-0 suture | ETHICON | 8556 | (1.0 metric) PROLENE Polyprolene Suture Blue Monofilament |
| 7-0 suture | ETHICON | 1647G | (0.5 metric) ETHILON Nylon Suture Black Monofilament |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-02 | Tip Width:0.6mm Clamping Length:5mm Length:9cm Straight tip |
| Castroviejo Needle Holder | Fine Science Tools | 12565-14 | Tip Shape:Straight Tip Width:1.5mm Clamping Length:10mm Scissors:No Lock:Yes Length:14cm Serrated:Yes |
| Scalpel Handle | Roboz Surgical Instrument | RS-9843 | Scalpel Handle, #3; Solid; 4″ Length |
| Sterile Surgical Blade | Cincinnati Surgical | 0110 | Stainless Steel; Size 10 |
| Petri Dish | Fisher Scientific | 08-757-13 | Beveled Ridge, Slippable |
Table of Specific Surgical Materials and Tools.
| Name | Company | Catalogue Number | Additional Comments |
| Beuthanasia | Schering-Plough Animal Health Corp. Union (Ordered from MWI Veterinary Supply) | MWI #: 011168 | Active Ingredient: Per 100mL, 390 mg pentobarbital sodium, 50mg phenytoin sodium |
| Ketamine | Fort Dodge Animal Health (Ordered from MWI Veterinary Supply) | MWI #: 000680 | Kateset 100 mg/ml |
| Xylazine | LLOYD. Inc. (Ordered from MWI Veterinary Supply) |
MWI #: 009307 | Anased 100 mg/ml |
| Saline | Hospira Inc. | 94-217-JT | |
| PBS | SIGMA | 011M8207 | |
| Saponin | Sigma | BCBB4080 | |
| PECAM (CD31) | BD Pharmingen | 553371 | |
| Streptavidin-CY3 | Jackson ImmunoResearch | 016-160-084 | |
| BSA | Jackson ImmunoResearch | 096555 | |
| VECTASTAIN Elite ABC | Vector Laboratories | PK-6100 | |
| Vector Nova Red | Vector Laboratories | SK-4800 | |
| VectaMount | Vector Laboratories | H-500 |
Table of Specific Reagents
References
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Angiogenesis in cancer and other diseases. Nature. 407, 249-257 (2000).
- le Noble, F. A., Stassen, F. R., Hacking, W. J., Struijker Boudier, H. A. Angiogenesis and hypertension. J. Hypertens. 16, 1563-1572 (1998).
- Peirce, S. M., Skalak, T. C. Microvascular remodeling: a complex continuum spanning angiogenesis to arteriogenesis. Microcirculation. 10, 99-111 (2003).
- Anderson, C. R., Ponce, A. M., Price, R. J. Immunohistochemical identification of an extracellular matrix scaffold that microguides capillary sprouting in vivo. J. Histochem. Cytochem. 52, 1063-1072 (2004).
- Ponce, A. M., Price, R. J. Angiogenic stimulus determines the positioning of pericytes within capillary sprouts in vivo. Microvasc. Res. 65, 45-48 (2003).
- Franzen, L., Ghassemifar, R., Malcherek, P. Experimental mast cell activation improves connective tissue repair in the perforated rat mesentery. Agents Actions. 33, 371-377 (1991).
- Anderson, C. R., Hastings, N. E., Blackman, B. R., Price, R. J. Capillary sprout endothelial cells exhibit a CD36 low phenotype: regulation by shear stress and vascular endothelial growth factor-induced mechanism for attenuating anti-proliferative thrombospondin-1 signaling. Am. J. Pathol. 173, 1220-1228 (2008).
- Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
- Norrby, K. C. Rat Mesentery Angiogenesis Assay. J. Vis. Exp. (52), e3078 (2011).
- Murfee, W. L., Rehorn, M. R., Peirce, S. M., Skalak, T. C. Perivascular cells along venules upregulate NG2 expression during microvascular remodeling. Microcirculation. 13, 261-273 (2006).
- Stapor, C. P., Murfee, L. W. Identification of class III β-tubulin as a marker of angiogenic perivascular cells. Microvascular Research. , (2011).
- Yang, M., Aragon, M., Murfee, W. L. Angiogenesis in Mesenteric Microvascular Networks from Spontaneously Hypertensive Versus Normotensive Rats. Microcirculation. , (2011).
- Robichaux, J. L. Lymphatic/Blood endothelial cell connections at the capillary level in adult rat mesentery. Anat. Rec. (Hoboken). 293, 1629-1638 (2010).
- Amos, P. J. IFATS collection: The role of human adipose-derived stromal cells in inflammatory microvascular remodeling and evidence of a perivascular phenotype. Stem Cells. 26, 2682-2690 (2008).
