Summary

から卵を使用して、<em>マンソン住血吸虫</em>として<emインビボ></em蠕虫によって誘発される肺の炎症の>モデル

Published: June 05, 2012
doi:

Summary

マンソン住血吸虫の卵は、Tヘルパー2型(Th2型)免疫応答、寄生虫感染症、喘息とアレルギー性炎症の特性の強力な刺激剤である。このプロトコルはS.を利用卵の周りの肺肉芽腫形成、好酸球とマクロファージの代替活性化により特徴付けられる肺のCD4 Th2サイトカインによって誘導される炎症反応を生成するために、 マンソンの卵注入。

Abstract

住血吸虫の寄生虫は1世界中で推定200万人に感染する血液吸虫です。 住血吸虫 、肝線維症と脾腫を含む重篤な病態、慢性感染症ではなく、寄生虫自体は2よりも寄生虫の卵に対する免疫応答によって引き起こされます。寄生虫の卵IL-4の産生によって特徴づけTh2応答を誘導し、IL-5およびIL-13、マクロファージおよび好酸球の動員の代替活性化。ここでは、寄生虫に固有の肺におけるTh2サイトカイン応答および所属リンパ節、卵を周囲の肺肉芽腫の形成、気道の炎症を調べるためのモデルとしてマンソン住血吸虫卵の注入を説明します。

腹腔内感作および静脈内チャレンジ、S.以下マンソンの卵は、それらが肺実質内に閉じ込められている肺動脈を経由して肺に運ばれる肉芽腫でリンパ球、好酸球と交互に活性化マクロファージ3-6の構成。気管支肺胞スペースで肉芽腫形成、炎症に関連付けられている、所属リンパ節およびCD4の拡大は、T細胞の活性化を観察することができる。ここでは詳細は、感染した肝臓(7から変更された)から、 マンソン住血吸虫卵を分離したマウスを感作し、挑戦し、分析のための臓器(気管支肺胞洗浄(BAL)、肺と所属リンパ節)を回復するためのプロトコルです。我々はまた、追加の免疫学的分析のための代表的な組織学的および免疫学的データとの提案が含まれています。

全体的に、このメソッドは、in vivoモデル寄生虫感染症、線維症、アレルギー性炎症や喘息を含むTh2の炎症性疾患の研究に広く適用可能である肺に寄生虫によって誘発される免疫応答を調査するために用意されています。標準の研究のためのこのモデルの利点肺のE 2炎症が肺の中の強力なTh2の炎症反応の再現性と所属リンパ節、卵を周囲の肉芽腫の組織学的検査によって炎症の評価の容易さ、および寄生虫の長期貯蔵の可能性を含む卵。

Protocol

1。 マンソン住血吸虫卵を浄化する 住血吸虫のライフサイクル8の感染段階である住血吸虫セルカリア、とスイス-Websterマウスに感染します。また、NIAID住血吸虫症リソースセンター(から住血吸虫感染マウスを得るhttp://www.schisto-resource.org/~~V )。その時点で、卵は肝臓内に存在し、後述するように( 図を</stron…

Discussion

ここでは、2型肺の炎症を誘導するマンソン住血吸虫卵を採用したモデルが記載されています。このモデルの特徴は、強力なTh2免疫応答は、気道の炎症や肺の肉芽腫形成が含まれています。これらのパラメータはCD4 Th2細胞応答を11に依存しているので、これはTh2細胞応答に関するタンパク質固有または系統特異的欠失の影響を調べるために有用なモデルである。ここでは読み出?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この仕事は健康(NIH)AI091759とクローン病とアメリカのウィリアム·アンド·シェルビーModellファミリー財団研究賞(MNまで)の大腸炎財団の国民の協会によってサポートされていました。住血吸虫感染マウスは、NIAID住血吸虫リソースセンター(NIAID契約N01 A130026)によって供給された。

Materials

Reagent Size/Description Company Catalog #
Collagenase/Dispase 500 mg Roche Applied Science 11 097 113 001
Diff Quik Hema 3 Stain Pack Fisher Scientific Co. LLC 122-911
DMEM Liquid Gibco 11965
Falcon 50mL Pack Falcon 352070
Intramedic PE Tubing 0.58 mm Becton Dickinson and Co. 427410
Isoflurane 250 mL Abbot Animal Health 52600405
Ketamine 100 mg/mL Fort Dodge, Animal Health N/A
Mannose receptor antibody Biotin AbD Serotec MCA2235B
Metallic Strainer Standard kitchen strainer Target Laurentiis
Paraformaldehyde 16% Electron Microsc. Sciences 15710
Penicillin/ Streptomycin 100x Gibco 15070
Percoll 1 Liter GE Healthcare Biosciences 17 0891 01
RELMα antibody 50 μg Peprotech 500-P214
Surgical Thread 2.0 USP 100 yds Surgical Specialties Corp. SP118
Syringe Needle 23g, 3/4 inch BD Vacutainer Lab. Med. 305143
USA Standard Testing Sieve 150 μm, 0.0059″ W.S. Tyler, Inc. ASTME-11, Spec. No. 100
Xylazine 20 mg/mL Butler N/A

References

  1. World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
  2. Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
  3. Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
  4. Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
  5. Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
  6. Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
  7. Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
  8. Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
  9. Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
  10. Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
  11. Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
  12. Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
  13. Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).

Play Video

Cite This Article
Joyce, K. L., Morgan, W., Greenberg, R., Nair, M. G. Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation. J. Vis. Exp. (64), e3905, doi:10.3791/3905 (2012).

View Video