El cateterismo femoral arterial y venosa para muestras de sangre, la Administración de Drogas y la presión arterial consciente y mediciones del ritmo cardíaco

1. Antes de iniciar procedimiento quirúrgico Nota: Antes de iniciar cualquier procedimiento de animales asegurarse de que usted ha obtenido el permiso correspondiente a través de su institución / organización. Al igual que con todas las cirugías de la supervivencia, asegúrese de que la cirugía se realiza bajo condiciones estériles, y la medicación para el dolor y antibióticos apropiados necesarios se utilizan para un resultado exitoso. Antes de comenzar el procedimiento de cateterismo evaluar los catéteres mediante el lavado con solución salina estéril para asegurar que son patentes. Anestesiar la rata. Prepare la rata para el procedimiento quirúrgico. Afeitarse la piel de las regiones quirúrgicas, que incluyen la parte posterior del cuello (entre los omóplatos) y la región de la pierna interior. Utilizando Betadine y un lavado de etanol al 70%, respectivamente, matorrales de las regiones afeitado quirúrgico de partida en el centro y hacer un barrido hacia fuera circular. Repetiresto 3 veces para cada región, terminando con una limpieza final con etanol al 70%. Colocar el animal sobre una superficie estéril y cubra el lugar estéril sobre las áreas quirúrgicas. (El uso de Press-n-Seal es un drapeado quirúrgica ideal que permite al investigador para controlar el animal durante todo el procedimiento.) Asegurar que todos los instrumentos quirúrgicos para el procedimiento quirúrgico han sido esterilizadas. 2. Preparación de las áreas quirúrgicas para la colocación del catéter Con la rata por la que se boca abajo (sobre su estómago), que aproximadamente de ½ pulgada (12 mm) incisión horizontal en la parte posterior del cuello a nivel de los hombros con unas tijeras o un bisturí, y luego contundente disección de una inyección subcutánea "bolsillo" en la parte de atrás de aproximadamente el tamaño de una moneda. Este será utilizado como un área para colocar una pequeña cantidad de tubería que compense el crecimiento del animal y / o movimiento, es decir, para que el catéter no se puso y se elimina así de la arteria que era el lugard pulgadas (Como alternativa, este paso puede ser realizado inmediatamente antes de la tunelización del catéter.) Coloque el ratón sobre su espalda (posición supina) y hacer una incisión en la zona inguinal [aproximado de ½ pulgada (12 mm) a lo largo de la incisión el ángulo natural de la pata trasera. Blunt disección para separar el tejido conectivo (Figura 1) (puede usar tijeras con puntas romas, pinzas hemostáticas, hisopos de algodón, etc) (por lo general mediante la celebración de las tijeras de punta roma y / o hisopos de algodón en un ángulo de 45 grados, lo que garantiza la localización más fácil de la región de interés) hasta que la arteria y la vena femoral se exponen. La vena es de color rojo oscuro y la arteria es más clara y más brillante que la vena. El nervio que corre a lo largo de la arteria es de color blanquecino en el tono. Blunt disección en la región de la pierna para hacer una región pequeña y abierta por debajo de la piel (de bolsillo, es decir, aproximadamente del tamaño de un cuarto) a lo largo del interior de la pierna para la colocación de una pequeña sección de la catheter (una vez más a tener en cuenta el movimiento de los animales y el crecimiento de los animales si la colocación crónica). Coloque los separadores en el área de la incisión para que usted pueda ver completamente la arteria y la vena. Utilizando unas pinzas de punta fina con cuidado separar el nervio (de color blanquecino) que es a lo largo de la arteria femoral de la arteria y la vena. (Figura 2) Tenga cuidado de no cortar o dañar el nervio. Separar la arteria y la vena como una unidad, tratando de exponer una sección de aproximadamente ¼ de pulgadas de largo (5-7 mm) de la arteria / vena. Repita el proceso en la separación de la vena de la arteria. Mantenga sus instrumentos quirúrgicos (pinzas de punta fina, es decir) perpendicular a los vasos y los vasos separados en paralelo. Esto ayuda a evitar desgarros, pinchazos o daños en los vasos. Mediante la colocación de las pinzas de punta fina con cuidado entre la arteria y la vena desde abajo y poco a poco la apertura de las pinzas y la repetición de este, que separará poco a poco los vasos. Nota: si se rasgan u observar algunossangrado use un hisopo de algodón estéril y / o 2 x 2 de gasa y ejercer presión sobre el área hasta que el sangrado se ha detenido, y luego continuar con la cirugía. 3. Túnel del catéter De solución salina estéril empapada lugar de 2 x 2 gasa sobre la incisión y gire el animal a su estómago. Coloque el Rochester Pean fórceps (pinzas rectas largas) en la incisión en la espalda que se hizo anteriormente y guía de los fórceps por vía subcutánea en la parte posterior al nivel de las caderas [garantizar las puntas de las pinzas hemostáticas están apuntando hacia arriba, no (hacia la columna ) para evitar lesiones en la médula espinal]. Aproximadamente a la región de la cadera a su vez la punta de la pinza hemostática hacia la incisión que se hizo en la región de la pierna y empujar la punta de los hemostáticos de la incisión de la pierna preparada. Pellizque suavemente el extremo del catéter (no es el fin que se insertará en la arteria / vena) con las pinzas y tire suavemente los catéteres a través de la cavidad que se hizoy, finalmente, la incisión en el cuello. Coloque la punta roma apropiada aguja de la jeringa llena con 20 U / ml de heparina / solución salina en el extremo de las sondas correspondientes y llenar los catéteres (asegurarse de que no hay burbujas de aire) con la heparina / solución salina. Una vez más, comprobar que los catéteres son patentes y no el daño ha llegado a los catéteres. Deje las jeringas adjunta al final de las líneas de catéter para asegurar el aire no es capaz de entrar en las vías del catéter y gire a la rata en la espalda una vez más. 4. La inserción de los catéteres en la vena femoral y la arteria (Figura 3) Coloque una hoja doblada estéril 4,0 de seda / hilo por debajo de la vena femoral y luego se corta la seda en el extremo doblado. Ahora habrá dos piezas de seda en la vena. O bien, colocar 2 piezas de 4,0 seda en la vena de forma individual. Separada de la seda que ha colocado en la vena, una pieza hacia la pierna (extremo distal) y el otro hacia el cuerpo. Tes decir, una ligadura suelta en la parte más cercana al cuerpo, a continuación, utilizando pinzas hemostáticas pequeñas, sujete y tire de la seda enseñado, pero no apretar el nudo. Tire de la otra pieza de seda en lo posible hacia la pierna (extremo distal) y este empate en un nudo triple, captar la seda con pinzas hemostáticas pequeñas y tirar enseñado. Este método permite que las venas se llenan de sangre, por lo que es más fácil hacer la incisión de la que se requiere para la inserción del catéter (paso 4). Colocar 1-2 gotas de lidocaína en la vena. Utilizando el micro-disección Vanna tijeras, hacer una pequeña incisión en la vena a través de aproximadamente ¼ y en un ángulo de 45 grados. Coloque unas pinzas de punta fina (45 pinzas) en la incisión y con otro par de pinzas, con cuidado de alimentación en el catéter de la vena. Abra con cuidado las pinzas que se colocan en la vena, ya que esto permitirá a los investigadores colocar suavemente el catéter venoso en las pinzas y en la vena. Cuando el catéter está completamente insertado (aprox. 6-7 cm) (la hora de hacer el catéter se coloca una marca en la sonda para asistir al cirujano en la identificación cuando el catéter está completamente insertado) (esto coloca el catéter venoso en la vena cava abdominal), apretar la ligadura anterior alrededor de la vena y el catéter, un nudo triple (asegurarse de que no es la oclusión de la vena). Utilice la sutura de seda cerca de la pierna (ligadura posterior) para asegurar de nuevo el catéter (nudo triple) y asegurar la colocación. Poco a poco marcha atrás de la jeringa hasta que haya un poco de sangre visible en el catéter, el cual ayuda a asegurar que los nudos de sutura no estén demasiado apretadas y que el catéter es funcional. Después de comprobar, presione el émbolo hasta que la sangre ya no es visible en el catéter. Nota: es posible insertar dos catéteres en la vena femoral si es necesario. Repita los pasos 9-13 para colocar un catéter en la arteria femoral con las siguientes excepciones: Lazo más cercano a la pierna de seda (posterior), con un nudo triple y tirar de tauGHT antes de atar la ligadura suelta cerca del cuerpo (anterior) antes de hacer la incisión para la colocación del catéter. Esto permitirá que la arteria se llene de sangre por lo que es más fácil de cortar. Asegúrese de que la sutura proximal es jalada para ocluir la arteria antes de cortar la arteria. Esto evitará la pérdida de sangre cuando se hace el corte. Insertar el catéter arterial unos 5 cm de la arteria femoral (esto coloca el catéter en la aorta abdominal). Al asegurar que el catéter con la sutura, asegúrese de que la sutura no es demasiado apretado y la oclusión del catéter. 5. Quirúrgica Wrap-up Hacer una moneda de diez centavos de bucle trimestre de tamaño en los catéteres y el lugar en el interior de la pierna (el bucle debe caber en el área que fue contundente disección anterior). Después de colocar los catéteres, los seguros, con 2.1 puntos de 5.0 sutura quirúrgica en la capa muscular. Cerrar la incisión con 4,0 Ethilon con no continua sutures. A su vez la rata en su estómago y hacer que otro lazo en los catéteres sobre el tamaño de una moneda y el lugar en el bolsillo disecado en la espalda. Cerrar la incisión con una sutura. Con una gota de vetbond, seguro de los catéteres en la espalda. Fije el catéter cerca de la incisión de vuelta con pinzas hemostáticas acolchado y eliminar las jeringas de los extremos. Ajustar la rata con una chaqueta de tipo correa, tapa de los catéteres (para mantener el bloqueo de heparina), y quitar el relleno pinzas hemostáticas. – Por mantenimiento a largo plazo reemplazar la solución salina del catéter con 20 U / ml de heparina / solución salina. 6. Mantenimiento de catéter (guantes estériles deben ser usados ​​durante el procedimiento) Sujete el catéter con pinzas acolchada. Retire el tapón del catéter. Coloque una jeringa con punta roma solución de bloqueo en el catéter. Quite las pinzas fórceps. Llenar el catéter con la solución de bloqueo (el volumen es pre-determined-por lo general 0,3 ml). Fije el catéter durante la descarga para evitar cualquier reflujo de sangre hacia la punta del catéter y retire la jeringa. Vuelva a colocar el tapón del catéter. Quite las pinzas las pinzas y empuje suavemente el enchufe en un poco para asegurar que no hay sangre en la punta del catéter. 7. De muestra de sangre (guantes estériles deben ser usados ​​durante el procedimiento) Sujete el catéter con pinzas acolchada. Retire el tapón del catéter. Retire lentamente la solución de bloqueo con una jeringa de punta roma y desechar. Conecte la jeringa a la sonda de muestreo y retirar lentamente la muestra. Sujete el catéter con pinzas acolchada y el lugar de una jeringa con una solución de bloqueo en el catéter y volver a llenar el catéter con la solución de bloqueo. Fije el catéter mientras que re-llenar el catéter con la solución. Vuelva a insertar el conector del catéter. Retire la pinza y empuje suavemente acolchados t que conecte un poco más. 8. De infusión de fármacos Sujete el catéter con pinzas acolchada. Retire el tapón del catéter. Retire lentamente la solución de bloqueo con una jeringa de punta roma y desechar. Coloque la jeringa llena de drogas con el catéter e inyectar la sustancia en el animal. se puede usar una llave de 3 vías, así como un intermedio, si se requieren múltiples inyecciones, por lo que requiere menor cantidad de líquido de infusión en el animal. también se puede conectar una bomba de infusión constante de la jeringa con un filtro estéril para infusión continua. Abrazadera con unas pinzas acolchadas y el lugar de una jeringa con una solución de bloqueo en el catéter y volver a llenar el catéter con la solución de bloqueo. Fije el catéter mientras que re-llenar el catéter con la solución. Vuelva a insertar el conector del catéter. Retire las pinzas acolchadas y empuje suavemente el enchufe de un poco más. e "Sangre> 9. presión y frecuencia de muestreo del Corazón Fije el catéter arterial con pinzas acolchada y quitar el tapón del catéter. Conecte la línea arterial para el transductor de presión. Siga las instrucciones del fabricante para el uso del software para la recopilación de la presión arterial. Al finalizar el período de control de la presión arterial, el uso de fórceps acolchado pinza del catéter y se desconecta del transductor. Enjuague el catéter con la solución de bloqueo y coloque el tapón del catéter como se describió anteriormente. 10. Resultados representante Una medida de la presión arterial representante fue tomado de un animal consciente se mueve libremente y se presenta en la Figura 4. Fenilefrina (3 ug / kg, iv), un agonista de los receptores alfa-1 adrenérgicos, se administró en la línea de la vena femoral para aumentar la presión arterial, al mismo tiempo que la medición de la presión arterial de la línea arterial femoral. Fentolamina (4 mg / kg, iv),un selectivo antagonista de los alfa-adrenérgicos, se administró después a disminuir la presión arterial. Figura 1. Disección roma de los tejidos. Con la rata en su espalda, se le han hecho alrededor de ½ pulgada (12 mm) incisión en el ángulo de las patas traseras y el uso de tijeras de punta roma o pinzas hemostáticas se romo disecar el tejido conectivo para exponer la arteria y la vena femoral. Figura 2. Separación de la arteria femoral y la vena del tejido conectivo. Figura 3. Colocación de catéter. Vanna utilizando micro-disección tijeras lugar de una pequeña incisión de aproximadamente ¼ de la manera a través de la nave en un ángulo de 45 grados (arriba) y el lugar unas pinzas de punta fina en the incisión y con otro par de pinzas de alimentación del catéter en el vaso (medio). Por último, una vez finalizada la colocación del catéter de sutura el catéter en su lugar (abajo). Figura 4. Representante medida de presión arterial tomadas de un animal consciente se mueve libremente.