Baba Yanıtları Nörobiyoloji incelenmesi Karşılaştırmalı Türlerin Yaklaşım

1. Hayvan Modeli Tanıtımı California Deer Fare (Peromyscus californicus) baba yanıtları keşfetmek için ideal bir model. Gördüğünüz gibi, bu fare, anneler gibi yavrular mamülleri – hatta bu yüzden yavrular bakım gibi görünüyor üzerlerine Crouch. California farelerin davranışlarını sık sık kaçmak ya da onlara saldırmak için çalışırken, yavrular az ilgi gösteren ortak geyik fare (Peromyscus maniculatus) aynı cins, bir tür karşılaştırılır. (Yavrular ile etkileşim bu türlerin resimler için Bkz: Şekil 1). Tür modeli tespit edildiğinde, daha sonra çeşitli gruplar oluşturulması gerekmektedir. Bu çalışmada, biyolojik babalar, anne-babalık deneyimi olmayan bakireler, ve her iki türün sınırlı yavru maruz kalma (yavru maruz kalan veya teşvik babalar) ile bakireler yatkın ve edinsel hem de baba özellikleri değerlendirilir, böylece kullanılır. Bu özel çalışmada da sosyal etkileşimler kafes yerleştirilir şey bir yavru ve temsili bir yanıt olduğunu sağlamak için yavru bir oyuncak fare tüm grupların maruz (Bakınız Şekil 2) Nörobiyolojik faktörler soruşturma başlamadan önce, seçilen türün ilgi davranış belirgin farklılıklar sergilerler doğrulamak için önemlidir. Bu çalışmada, erkek ile temas yavru harcanan zamanı ve miktarı yaklaşım böyle bir gecikme olarak puan davranışları için kullanılır, beş dakika ve bir baba davranış ethogram (ethogram, örneğin bkz. Tablo 1) bir yavru ile bir kafes yerleştirilir yavru. Agresif tepkiler gözlenmesi halinde, yavru derhal kaldırılır. Bu seanslar genellikle dikkatli bir davranış analizi, daha sonra yapılan böylece videoya. 2. Beyin Dokusu hazırlanması Her fare standart perfüzyon (protokol) bağlı, beyinleri özel ilgi alanı (gösteri beyin) kesitli böylece kaldırılır. Vazopressin (AVP) – Standart bir farenin beyin atlas (atlas gösterin) hipotalamus paraventriküler çekirdeği, bu çalışmada ilgi nöropeptid üreten hücrelerin zengin olduğu bilinen bir alan bulmak için kullanılır. Mikrotom ile kesitli önce doku dondurma böylece beyin daha sonra bloke olur ve donma mandreni monte edilir. Beyin trim modu kesitli sonra, analiz için kullanılan beyin bölümler için belirli beyin kalınlığı, 30 mikron, bu durumda, özel simge tanımlanır kadar. Beynin bölümleri dikkatlice fosfat buffer salin (PBS) ile dolu iyi plakaları yerleştirilir; (ekli PBS için protokol, bu sadece bir örnek, standart bir immünsitokimya protokol olduğunu lütfen unutmayın). 3. İmmünositokimya (Bkz. ekli protokol), bu sürecin çeşitli adımlar boyunca bu tekniği (öğrenci pipetleme gösterir), kimyasallar ve önemli diğer maddeler hassas ölçümler sağlamak için doğru pipetleme becerilere sahip önemlidir. Bu süreçte ilk adım iyi plakaları 3-5 kez PBS yerine içerir beyinleri yıkama; her yıkama arasında iyi bir tabak, 10 dakika boyunca bir rocker yerleştirilen (göstermek yerine öğrenci PBS ve rockçılar iyi plakaları yerleştirerek) . Beyin dilimleri sonra primer antikor çözümü maruz kalan ve 4 ° C rocker (gösteri süreci) gece boyunca saklanır. Başka bir yıkama sonrasında, beyin dilimleri daha sonra tekrar yıkanır, bir saat boyunca oda sıcaklığında rocker ikincil bir antikor maruz kalmaktadır. Sonraki beyin nörokimyasal-pozitif hücrelerin görselleştirme hazırlamak için bir Avitin Biotin Kompleks çözüm maruz kalmaktadır. Son görselleştirme adım için, beyinleri DAB maruz kalmaktadır. Bu tehlikeli bir üründür ve her zaman dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Burada görüldüğü gibi, beyin dilimleri (süreç göstermek) gözleri önünde koyu almak için başlar. DAB maruz kalma ardından, beyinlerini yıkar son serisi üzerinden gitmek ve sonra dikkatle Altyazılı mikroskop lamı üzerine yerleştirilen ve bir gecede (slayt üzerinde bir beyin dilim yerleştirme gösterisi; Altyazılı slaytlar protokol için eke bakınız) kurutmak için izin verilir. Slaytlar sonra, distile su ve alkol yıkar bir dizi temizlenir, nihayet güvenli tutmak için (bu sürecin çeşitli yönlerini göstermek; temizleme süreci için eke bakınız) slidebox dakika muamele ve depolanan önce Citrosolv batmış. 4. Neuroquantification Slaytlar kuruduktan sonra, bu özel neuroquantification yazılım ile değerlendirilebilir. Burada Bioquant yazılım (show ekranda yazılım … ve mikroskop) fare beyinleri paraventriküler çekirdeğinde vazopressin-pozitif hücre ve lifler ölçmek için kullanılır. Ilgi belirli bir alan ölçüm seçenekleri kullanılarak tanımlanıryazılım neuroquantification için görme alanı kurmak için. Tutarlı bir görsel alan boyutu (gösterisi öğrenci Bunu yaparken), her bir hayvan için sayısal olduğunu önemlidir. Burada koyu lekeli vazopressin immunoreaktif hücre gövdeleri ve liflerinin açıktır. Bu doku saymak ya da izlemek için zor olduğundan, bu yazılımın bir özelliği belirtilen ilgi alanı içinde olumlu boyanan doku toplam miktarını belirlemek için ışık eşiklendirme kullanır. Bu eşikleme vazopressin pozitif doku (bilgisayar ekranında veri değeri göstermek) içerdiği belirtilen alanın ne kadar söyler. 5. Davranış Analizi Birden fazla gözlemci video kasetleri puanlama olacaksa, gözlemciler, tutarlı bir şekilde davranış puanlama olduğunu sağlamak için hakemlerarası güvenilirlik kurmak için önemlidir. Gerçek puanlama oturumu için, bir davranış puanlama formunda (bkz. Tablo 2 tablolama puanlama örneğin) kolay davranış puanlama gözlem oturumları sırasında izin vermek için hazırlıklı olmalısınız. Hızlı epizodik yanıtları olmayan davranışlar, bir microsequencing analiz belirli yanıtlar ilerlemesi hakkında inceliklerini ortaya çıkarabilir. Örneğin bakım, davranış, çok hızlı yanıtlar bir zincir oluşur. Bir seçenek damat varlığı ve süresi sadece kayıt olmasına rağmen, başka bir bu yanıtı eşlik eden olaylar zinciri belge. Bu microsequencing yazılımı kullanarak, gözlemciler yazılım (yazılım ve video gösterisi) tarafından istendiğinde belirli bir davranışı, her saniye, varlığı puan. Veri toplama, faiz parametreler tespit edilir ve uygun davranış puanları analiz edilmektedir. Örnekler damat dizisi kesintileri (her bir hayvan için girilen verileri tablolama bilgisayar) yavru, ya da numara ile temas halinde harcanan zamanın toplam süresi olabilir. Davranış atılırsa sonra bu iki tür için farklı tepki stratejilerinin çalışmaya ilgi davranışı sergiledi onaylamak için önemlidir. Bu durumda California geyik fareler ortak geyik farelere göre daha baba davranışları göstermelidir. Ayrıca, ilgili etkilerin daha bilinçli bir görünüm elde etmek için çeşitli davranış önlemler beyin önlemler ile ilişkili olabilir. 6. Temsilcisi Sonuçlar: Modeli doğrulamak için, iki tür faiz davranış bakımından farklı gerçekleştirilen veri açıkça belirtmelidir. Burada gördüğünüz P. californicus erkek yavrular, baba tepkileri iki işaretlerinden (Bakınız Şekil 4) üzerinde bakım ve çömelme daha fazla zaman harcadı. Görüleceği gibi, baba P., faiz neurobiologial değişken, baba tepkileri önemlidir vazopressin (AVP) miktarını olumlu doku birkaç ilgili beyin alanları için sayısal belirlemek için californicus hayvanlar, bu beyin bölgelerinin çeşitli daha immün pozitif doku vardı . (Bkz. Şekil 5). Microsequencing analizi ile ilgili bir çalışmada, baba Kaliforniya fareler, bakire muadillerine göre daha az anksiyete sergi olacağını hipotezi; buna göre, yırtıcı bir hayvan koku maruz kaldığında, babaları (Şekil damat dizisi bakire hayvanlardan daha az kesinti sergiledi 6). Şekil 1: (A) conspecific yabancı yavru doğru baba yanıtları sergileyen Bay Kaliforniya fareler. (B) Erkek geyik fare ihtiyatlı bir yaklaşım (esneme katılmak) ve yavru bir conspecific yabancı varlığı kaçınma yanıtını sergiliyor. Not: Bu sosyal etkileşim değerlendirmelerde, bir erkek yavru karşı saldırgan tepkiler sergilemektedir, deneyciler erkek hemen dikkatini dağıtmak için kafesin üstüne vurdu. Şu anda oturum sonlandırılır ve yavru çıkarılır, herhangi bir yaralar için teftiş ve anne geri döndü. Laboratuvarımızda, bu P. ile nadiren görülmektedir californicus erkek ama bazen P. görülmektedir maniculatus yakın gözlem ve acil müdahale, ancak, hayvanların meydana gelen zarar görmesini engellemek. Şekil 2: oyuncak fare ile etkileşim California fare; en çok bu uyaranlara çiğnemek çalıştı . Şekil 3: Deneysel çalışma tasarımı; her grupta yaklaşık 6 hayvanlar her tür vardı. Şekil 4: immünsitokimya süreci Grafik. Incirure 5 Kaliforniya ve geyik fareler Baba cevaplar; baba tepkileri (damat, çömelme, hızlı bir yaklaşım) Kaliforniya farelerde gözlendi. Streç katılır (stres tepkisi) geyik farelerde gözlendi. Şekil 6, her iki türün çeşitli beyin bölgelerindeki vazopressin immünoreaktivite. Kaliforniya fareler PVN hücreleri ve elyaf boyama vardı. Şekil 7: Baba Kaliforniya fareler yavru maruz kalan ve bakir gruplarına göre daha yırtıcı bir hayvan koku varlığında onların tımar dizileri daha az kesintileri sergilenmektedir .