1. מבוא מקינטוש המעבדה כבר משתמשת הכנת שרירי הגסטרוקנמיוס המדיאלי במשך כמה שנים, ולפני זה, כל הכנת שרירי הגסטרוקנמיוס, כפי שפותחה עם ד"ר פיל גרדינר. 1 2. הרדמה חולדות בוגרות ספראג-Dawley (200-300 ז) משמשות בדרך כלל במעבדה שלנו ללימוד תכונות התכווצות באתרם. העכברוש יכול להיות מוגבל במכשיר פלקסיגלס, זמין מסחרי, או על ידי כיסוי במגבת, ומחזיק. אנו משתמשים בקטמין / xylazine, (100 מ"ג · מ"ל -1, כל אחד) מעורב ב85:15, ולנהל 0.1 מ"ל לכל 100 גרם של משקל עכבר intramuscularly 2,3. נתרן פנטוברביטל (50-60 מ"ג · קילו -1, intraperiteneal) או isoflurane (2-3.5%, בשאיפה) עשוי לשמש גם 4. בעוד ההרדמה היא לוקחת השפעה, משקל מדויק ניתן לקבל ו- הגפה השמאלית האחורית מגולחת. זה גם טוב timדואר כדי להיות בטוח שכל האלקטרוניקה מופעלת ומוכן. זה כולל מחשבים, מגבר מד לחץ שמן, דוד ואחרים. בדוק להחזרת תגובת רפלקס מעת לעת ולהשלים את ההרדמה כנדרשת (0.05-0.1 מ"ל לכל 100 גר '). 3. ייזום כירורגיה אנו משתמשים בפלטפורמת פרספקס עליו כדי לשתק את החולדה לניתוח. סרט דביק פשוט עושה את העבודה. הקפד החיה השתרעה מהשמאל לhindlimb forelimb הנכון. הוסף טיפה של חומר סיכה לעיניים. אנו משתמשים בשמן פרפין. אחרת, את העיניים תתייבשנה בהרדמת קטאמין. אור כירורגית קטן שימושי. זה אחד פולט מספיק חום כדי לסייע לשמור על בעלי החיים חמים. לחלופין, שמיכת חימום מים ניתן להשתמש. בדוק כדי להיות בטוח רפלקסים בקרנית או בוהן קמצוץ נעדרים לפני שימשיכו. טכניקה סטרילית אינה הכרחית, משום שהליך זה הוא אקוטי. החיה לא תתאושש מההרדמה. אנו להרדים את העכברוש בהרדמהמנת יתר (0.2 מ"ל, intracardiac) כאשר כל ההליכים הושלמו. החתך הראשון הוא דרך העור מהעקב לעמוד השדרה. אנו משתמשים במספריים, כי העומק של החתך ניתן לשלוט ואת המספריים משמשים להפרדת עור מהרקמות הבסיסיות. חולדות יש haemostasis מצוין, ולכן כל עוד אתה נמנע כלי דם גדולים, דימום יהיה מוגבל. שמור על משטחים חשופים מכוסים בגזה ספוגה סליין איזוטוני, במידת ההאפשר. אחרי שהעור מופרד מרקמות החיבור הבסיסיות, שכבת השרירים השטחית היא לחתוך. הקפד לא להיכנס עמוק מדי, אתה לא רוצה לגרום ניזק לעצב ירך או כלי דם, או שרירים של עניין. בגין על שרירי הגסטרוקנמיוס ולחתוך proximally, לאורך אותו הקו כמו חתך בעור. מתחת Peek כדי לאתר ולמנוע את גיד הנשה. ברגע שאתה רואה את העצב, אתה יכול ללכת בדרך שלו עם החתך שלך, אבל תישאר הרבה מעל העצב. יש תפר ברור בין muscles. אתר זה, ולחתוך לאורך תפר שכיוון הברך. לשים לב ולהימנע כלי דם. 4. הכן את חור טייס בירך לעצם סיכה חותך דרך השכבה הדקה של שרירים על היבט הזנב של עצם הירך, וחושף את העצם החשוף. שימוש בכלי כף יד סיבובי, קודח, או סגן סיכה, (0.9 מ"מ פלדת פחמן ספחת), לעשות חור טייס קטן דרך קליפת המוח, ורק אל הלשד. לא לקדוח עמוק מדי, או דימום מוגזם יגרום. חור זה ישמש מאוחר יותר למקום סיכת עצם כדי לשתק את עצם הירך בבסיס myograph. 5. מבודד את העצבוב של שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי השלב הבא דורש מיקרוסקופ לנתח. אתר את המקום שבו עצב popliteal נעלם מאחורי שריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי. התפשט בעדינות את הענפים השונים, ולחתוך את כל מה שלא מעצבבים שרירי הגסטרוקנמיוס המדיאלי. עצבוב ניתן לקבוע על ידי microstimulation. בthiשלב זה, גם לוודא הענפים השטחיים של עצב הירך נחתכים. עכשיו לנקות את רקמת חיבור מעצב הירך, כך שזה יכול להיות החליק לתוך שרוול העצב (מאוחר יותר). הקפד לטפל בעצב בעדינות. כל מתיחה של העצב יכול להוביל לinexcitability, ולסיים את הניסוי שלך בטרם עת. 6. לבודד את גיד אכילס ושרירי הגסטרוקנמיוס נתיחה בוטה, עם עזרה מזדמנת ממספריים, ניתן להשתמש כדי להפריד את שריר הגסטרוקנמיוס מרקמות אחרות. הגיד של plantaris ניתן הוציא מתחת גיד אכילס, קשור ולחתוך. העניבה משמשת רק כדי לעזור להחזיק את הגיד וניתן לחתוך מייד אחרי הגיד נחתך וplantaris מופרד משרירי הגסטרוקנמיוס לאורך משמעותי. הנח קשירת # 1 משי סביב גיד אכילס, ועניבה בקשר מרובע. אל תמשכו חזק מדי, או הגיד יהיה פגום. אנו משתמשים rongeurs עצם לחתוך calcan EUS, להשאיר חתיכה קטנה של עצם עדיין מחוברת לגיד אכילס. שמור על המשטחים האופקיים כדי להיות בטוח שהעצם הוא לחתוך, לא רק גיד החיתוך. זה מבטיח את גיד אכילס יכול להיות מוצמד לmyograph מאוחר יותר. לאורך חלקו התחתון של הגסטרוקנמיוס, את soleus ניתן לראות. שוב, נתיחה בוטה ניתן להשתמש כדי להפריד את שרירי soleus משרירי הגסטרוקנמיוס. אנחנו רוצים לבודד את הגסטרוקנמיוס המדיאלי, כך שזה רק השרירים עדיין מחוברים לגיד אכילס. חותך את גיד soleus, קרוב לסוף דיסטלי. ואז אתה יכול להפריד את שרירי הגסטרוקנמיוס המדיאלי ורוחב, ולחתוך את הגיד לרוחב, והשארת רק את שרירי הגסטרוקנמיוס המדיאלי מצורפים לגיד אכילס. משוך את שרירי הגסטרוקנמיוס רוחב מהמדיאלי, יחד כ 50% מאורכו. מעבר לאורך הזה, הסיבים מצטלבים ויגרום ניזק ממושך עוד יותר. בדוק כדי להיות בטוח שהשרירים הם חופשיים של רקמת חיבור. דואר "> 7. חותך את השוקה הנח קשירה סביב השוק, ממש מעל לאמצע. זו צריכה להיות חזק, בלי לחתוך את הרקמות. לולאה שנייה לפני הקשירה מסייעת במניעת החלקה. אשתמש שוב בקשר מרובע כדי לאבטח. שימוש במסור קטן, לחתוך את החלק התחתון של רגל משם. לחתוך זה צריך להיות בערך באמצע הדרך בשוקה. הכנס בדיקה חד אל הלשד של השוקה. חללית זו תשמש כדי לשתק שוקה על בסיס myograph. הצרף 2 גומיות לעור, תוך שימוש בפריטי מישל. גומיות אלה ונוספים תהיינה בשימוש כדי להחזיק את העור סביב השריר בצורת מכל שיהיה מלא בשמן פרפין מחומם. [אופציונלי] 8. הכנס גבישי sonometric (שלב אופציונלי) 5 מניח את החיה על כרית חימום בעצמה נמוכה. בדיקה רקטלית, אם לא הוכנסה כבר יכולה להיות מוכנסת בשלב זה. השתמש בטיפה קטנה של שמן פרפין כדי לשמן. שימוש microstimulation, לזהות את הקצוות של צרור בתוך השריר. נקוב מחט מד 21 לאתר של שניהם במקור וההחדרה של השריר. הסט גביש sonometric לתוך החור שהמחט, והחותם עם דבק רפואי וטרינר אג"ח. השתמש בטיפה קטנה של דבק; כדי לוודא שהוא ממוקם בדיוק מעל לגביש. מרחתי את הדבק על פיסת נייר חתוך עם זווית חריפה מסייע במרח את הדבק במדויק. אנו הצבת גביש אחד נוסף בכניסה של הצרור, שזוהה על ידי microstimulation. [להמשיך] 9. הר במכשיר (ראה איור 1) מקם את העכבר על בסיס myograph, עם הבדיקה המכוונת למנוף השוקה. הנח את החללית בבעל, כדי לשתק את הרגל. משוך את העור בצדדים, כדי ליצור מכל ולאבטח עם גומיות. הגדר מקדח (סנטימטר 1/16 ה) לעצם הירך, באמצעות הפיילוטחור שנוצר במהלך הכנה כירורגית. ודא שאתה תומך את עצם הירך בחלק הקדמי כמו שאתה למקם את המקדח (בסגן סיכה) כשבירה של עצם הירך עלול לגרום, וסיום הניסוי בטרם עת. להצמיד סגן הסיכה לברת צלב כדי לשתק את עצם הירך. הנח את הגדם הדיסטלי של גיד הנשה דרך שרוול עצב המגרה (קתודה לכיוון שרירים) וקפל בחזרה הקרוב למקורו של השריר. חבר הממריץ לחוטים האלה. צרף גיד אכילס למנוף, שבה יש חיישני מד מתח עליו. לקשור מתרפק, אבל תשאיר קצת מקום להתאמה מאוחר יותר. הקפד היישור של השריר הוא ניצב עם המנוף. מלא את המכל נוצר בעור עם שמן פרפין מחומם. תדליק את המנורה ומגן החום עשוי מנייר עמדה מעל ראשו של בעל החיים, ומתמר הכח. מגיני רדיד נוספים עשויים להיות נחוצים כדי להבטיח את טמפרטורת הליבה של החיה לא exceed 38 ° C. האורך של השריר יכול להיות מותאם עד רפוי של המחרוזת הוא להסיר את החיבור בין הגסטרוקנמיוס המדיאלי ומתמר הכח. 10. קבע מתח מקסימאלי ואורך התייחסות בעוד השרירים מתחממים, להגדיר הממריץ ולבדוק את מתח הגירוי. חשוב להיות בטוח הגירוי מוגדר במשך פעימה קצר מאוד. אנו משתמשים ב50 μs. מתח מקסימאלי צריך להיות פחות מ 1 V. החל ברמה של 0.5 וולט, להגדיל את המתח עד משרעת עווית לא תגדל. מתח מקסימאלי הוא המתח הנמוך ביותר שמפעיל את כל היחידות המוטוריות. אנחנו בדרך כלל לעורר בכפולים מתח המקסימאלי, או 3 וולט גבוה מבין שניים. בדרך כלל, ניסויים יתחילו עם השריר באורך שנותן התכווצות העווית הגדולה ביותר. עווית מתקבלת עם דופק מגרה אחת. אורך השריר גדל בכ 1 מ"מ לעווית אחרת. זה חוזר על עצמו כל עוד המשרעת עוויתהולך וגוברת. ברגע שיפרפר ירידות משרעת, האורך יוחזר לאחד שנתן עווית המשרעת הגדולה ביותר. לאחר ההגדרה הראשונית של אורך, אנו בוחנים מערכת במה שאנו מכנים "התכווצות tetanic מיזוג". הממריץ מוגדר לספק פולסים ב200 רץ ל500 מילים. המסירה של גירוי זה יגרום להתכווצות tetanic התמזגה לחלוטין. הכח שנוצר על ידי השריר יהיה להדק את כל החיבורים, כולל חבלות על השריר. לאחר מנוחה מתאימה לפיזור ההגברה 4, אורך ההפניה של השריר הוא איפוס (ראה מסגרת 9.2). בדרך כלל, התכווצות tetanic המיזוג תהיה מותר קצת קיצור אורך צרור, כך השריר יהיה חייב להיות קצת לחזור לאורך שנותן את ההתכווצות הגדולה ביותר עווית המשרעת נמתחת. 11. ליזום ניסוי ניסוי טיפוסי יכלול adjustm אורךאף אוזן גרון ו / או גירוי עם מגוון רחב של דפוסים של גירוי. איסוף נתונים עשוי להיות כרוך רק בכוח, או בכוח, עם אורך אורך, וצרור electromyogram. [אופציונלי] 12. יחסי כוח בתדר 2 הגדר את משך זמן הרכבת מספיק זמן כדי להגיע לרמה של כוח, בכל תדר של עניין. כוח איזומטרי מרבי מושגת בשריר הגסטרוקנמיוס המדיאלי ב 200 הרץ. משך רכבת חייב להיות לפחות 200 אלפיות שני; יותר הוא טוב יותר לתדרים נמוכים יותר, אבל יגרום לעייפות מסוימת אם כמה צירים משמשים כדי לקבוע את הטווח המלא של יחסי כוח בתדר. אנו משתמשים בדרך כלל בהתכווצויות 0, 20, 40, 60, 80, 100 ו 200 רץ. טווח זה של תדירויות יאפשר מגוון הרחב של יחסי כוח בתדירות שתאר. מנוחה מתאימה בין צירים יש לאפשר למנוע עייפות (1-10 דק '). 13. relationsh חיל באורךip 6 עם האורך האופטימלי המשוער הוקם בעבר, יחסי כוח באורך שייקבעו על ידי התאמת אופן שיטתי את האורך של השריר מהמ"מ -4 ל4 מ"מ באמצעות מנגנון סרוו מנוע. זה צריך להיעשות באמצעות גירוי מקסימאלי (200 הרץ) אבל אנחנו מצאנו שהתכווצויות קצרות מאוד תנבנה באותו האורך אופטימלי אמיתי 7. התכווצויות Submaximal, כמו פרכוסים, ניתן להשתמש בו, אבל זה יניב אורך תלות בכוח 8 שונה. היבט חשוב של קביעת יחסי כוח באורך המלא הוא הצורך להעריך את הכח הפסיבי באורך הצרור שבו נמדד הכח מתרחש. כוח פעיל מחושב כהפרש בין כוח מוחלט והכח הפסיבי המתאים. מאחר שהמבנים אלסטיים המקבילים לשאת את הכח הפסיבי ואלה בסדרה עם סדרת המבנים אלסטיים, תרומת הכח הפסיבית לכוח מוחלט חייבת לרדת כסדרת elaמבני stic נמתחים במהלך התכווצות 3. ברגע שהכח הפסיבי ידוע לכל אורכי השרירים הרלוונטיים, הכח הפסיבי המתאים ניתן לאמוד במדידה רציפה של אורך צרור באמצעות sonomicrometry, או על ידי הערכת הציות של מערכת המדידה ואת המבנים בסדרה של יחידת שריר הגיד. אם זה לא נעשה, האורך האופטימלי של הכוחות והכנה לשיא, הם זלזלו. 14. יחסי כוח במהירות 9 אם ברצונך לקבוע את יחסי כוח במהירות, תצטרך לצרף את מתמרי כוח למערכת, המאפשרת שליטה אף עומס או קצב שינוי אורך. השיטה הקלה ביותר והחסכונית ביותר היא להשתמש בלחץ אוויר כדי להגביל קיצור לטעינה מבוקרת. במערכת שלנו, השריר מחובר לידית בצד אחד של המשען ולחץ האוויר מפריע לשינוי אורך בצד השני. חיישן אורך neהעורכים להיות מועסקים, כך שאתה יכול לזהות את השינוי באורך שריר במהלך צירים איזוטוניים. הסדר זה מאפשר התכווצויות afterloaded עם התנגדות פנאומטי. טנקים כפולים יכולים להרשות לכיווץ איזומטרי עם שחרורו לעומס איזוטוני. כולל של התכווצויות 15-20 יש לקבל, עם המון החל כמעט פרק לכוח האיזומטרי מרבי. כשהוא מודד את הנתונים למשוואה, עומסים מעל 90% מאיזומטרי אין להשתמש 9. 15. נציג תוצאות: התכווצויות דוגמה מוצגות באיור 2. התכווצויות אלה התקבלו על מנת להמחיש את יחסי כוח בתדר. חישוב הכח הפעיל השיא של ההתכווצויות הללו, והתוויית הכח הפעיל כנגד תדירות, תשואות איור 3; יחסי כוח בתדר. הנתונים שהוצגו באיור 2 ניתן להתאים למשוואה: AF = ג / (1 + e ((AF) / b) + ד); AF הוא כוח פעיל, F הוא תדר ו, ב, ג וד הם קבועים. לשרירי הגסטרוקנמיוס החולדה המדיאלי, התדירות חצי המקסימלי של גירוי היא בדרך כלל 50-60 הרץ בשריר שאינו עייף 2. תוצאות תתאמנה באופן הדוק לקו המתואר על ידי המשוואה לעיל. איור 1 Apparatus ושרירי הגדרה:. פניאומטיים הגדרה מוצגת בצד השמאל, איזומטרי בצד ימין. מערכת המנוף מוצגת מהשמאל מחוברת לשולחן התרגום כאשר התכווצויות דינמיות רצויות (מותאם מ 13). מנוע הצעד הוא נשלט על ידי מחשב (מעובד מ14). . איור 2 התכווצויות גבי איזומטרי: 20, 40, 60, 80 הרץ, 100 ו 200. המשרעת של התכווצות ההרץ 200 היא 8.13 נ les/ftp_upload/3167/3167fig3.jpg "/> 3. יחסי איור חיל תדר: כוח פעיל של התכווצויות באיור 2 הם זממו והקו מייצג את הקו של הכושר הטוב ביותר.