La formación específica de las vocalizaciones de ultrasonidos en las ratas viejas y Parkinson

1. Pre / post-entrenamiento Grabaciones Comenzar el monitoreo por ultrasonido con Avisoft grabadora mediante la configuración que se muestra en la Figura 2. Vocalizaciones ultrasónicas se puede controlar visualmente observando el espectrograma en tiempo real, o auditivamente con auriculares conectados a la interfaz de grabación de ultrasonido. Coloque una sexualmente receptiva (en celo) de ratas hembra en la jaula de la rata macho tema. Signos de estro incluyen lordosis, moviendo la oreja y lanzando rápidos. Las hembras en celo obtener más vocalizaciones de los hombres que no son sexualmente hembras receptivas. Después de que el hombre ha mostrado interés en la mujer (por ejemplo, inhalación, perseguir y / o montaje), retirar la hembra y el registro de vocalizaciones del macho durante 1-2 minutos. Si el macho no vocalizar inmediatamente, volver brevemente la rata hembra a la jaula de la casa del hombre para estimular la vocalización. 2. Entrenamiento vocal Comenzar el monitoreo por ultrasonido con Avisoft grabadora utilizando la misma configuración que se muestra en la Figura 2. Coloque la rata macho en su jaula en el micrófono. Poner una rata hembra en la jaula de la casa del macho. Como se indicó anteriormente, la rata hembra debe estar en celo para maximizar la respuesta de la vocalización de los hombres. Una vez que el hombre ha mostrado interés en la mujer retire la mujer. Inmediatamente después el macho produce la vocalización de destino, la recompensa al mismo tiempo con un lápiz y haga clic en una breve presentación de la botella de agua o el tratamiento de los alimentos. Inicialmente, los 50 kHz de frecuencia modulada (Figura 5) llamada es recompensado. Como el entrenamiento progresa sólo cadenas cada vez más complejo de las llamadas, como las cadenas de 5 a 10 llamadas en una rápida sucesión, se refuerzan. Continuar con la sesión de entrenamiento hasta que haya un plazo de 30 refuerzos. Esto suele tardar entre 5 – 10 minutos. 3. Preparación para el análisis acústico Siempre archivar los archivos de sonido original y realizar los cambios y las mediciones en una copia de trabajo, ya que el análisis será necesario filtrar y borrar el ruido de cada archivo. Utilizando el modo por lotes de Avisoft SASLab Pro, filtro de paso alto de todos los archivos de sonido para ser analizado a 25 kHz para eliminar el ruido no deseado por debajo de la vocalización ultrasónica. Para utilizar la función de detección automática de SASLab Pro, el umbral de ruido debe ser determinada. Para ello, abra un archivo de sonido y crear un espectrograma con la configuración que se muestra en la Figura 3. El parámetro de visualización automática de mediciones debe ser configurado de acuerdo con la configuración que se muestra en la Figura 4. Busque un área del espectrograma, donde no hay llamadas o los ruidos, lo que es el ruido de fondo. Utilizando el "automático (único umbral)" opción, establezca el umbral de la sección de separación de elementos del parámetro automático cuadro de diálogo de configuración para las mediciones justo por encima del ruido de fondo mediante el ajuste de la línea de negro en la ventana del espectro de energía por encima del espectrograma. En la Figura 4, el umbral se ha establecido en -55 dB. En la parte inferior del cuadro de diálogo, establecer el "Rechazar si la amplitud de pico es inferior al" valor de 1 dB por debajo del umbral en el paso anterior. Estos dos valores ahora se debe utilizar para todos los archivos de sonido analizado, asumiendo que todos los ajustes de grabación eran los mismos. 4. Vocalización identificación Para etiquetar las vocalizaciones con la regulación automática indicados anteriormente, primero debe crear un espectrograma con la configuración anterior. Manualmente borrar cualquier ruido que cumple con los siguientes criterios: 1) ha sido identificado erróneamente como una vocalización, 2) está afectando a la discriminación de los principios y / o al final de la vocalización, y / o 3) ha sido identificado erróneamente como el más alto o frecuencia más baja en la vocalización (indicado por las líneas rojas superior e inferior, respectivamente). Por otra parte, las horas de inicio / parada de las etiquetas de vocalización se puede ajustar manualmente después de la creación de etiquetas permanentes en el paso 4.5. Ruido que afectan las mediciones de frecuencia alta y baja, sin embargo, debe ser borrado manualmente. En algunos casos, una vocalización no podrán ser separados de los ruidos circundantes, tales como el sonido de la ropa de cama durante la locomoción. En estos casos, la llamada no puede ser analizado y precisión debe ser borrado. Una vez que todas las vocalizaciones han sido identificados, borrar permanentemente las secciones eliminadas del espectrograma del archivo de sonido, seleccione "Eliminar borra secciones espectrograma de forma de onda …" de las herramientas en el menú desplegable. Si este comando no se ejecuta antes de que el espectrograma se cierra, todo el trabajo de borrado se perderá. Crear etiquetas permanentes en el archivo de sonido haciendo clic en el botón 'Editar' en la sección de los elementos de separación de la ventana de configuración de parámetros de medidas automáticas. Visual y auditivamente revisar cada vocalización etiqueta para determinar su categoría: Frecuencia simple, modulada (FM), o armónico. Culoign la etiqueta apropiada con el pre-texto definido por módulos. Ejemplos de cada categoría de vocalización se muestran en la Figura 5. Cerrar el espectrograma, guarde el archivo de sonido, y continuar con el archivo de sonido junto a analizar. 5. Las mediciones acústicas Después de vocalizaciones en todos los archivos de sonido han sido identificados, utilice la herramienta de procesamiento por lotes (Herramientas: Batch Processing) para medir automáticamente los parámetros acústicos de todos los archivos. En el cuadro de diálogo de procesamiento por lotes, seleccione "Las mediciones de parámetros automático" en el menú desplegable. Seleccione el "proceso de todos los archivos de la carpeta seleccionada" casilla de verificación haga clic en la "carpeta" y seleccione la carpeta donde los archivos de sonido se guardan. Haga clic en "Inicio" y cada archivo se analiza automáticamente de acuerdo con la última configuración utilizada en el cuadro de parámetros de medición automática de diálogo de configuración. Las mediciones se guardarán en un archivo de texto que se puede definir mediante los parámetros de DDE / comandos del archivo de registro de configuración. Este archivo de texto se puede importar en un programa para el análisis estadístico. 6. Los resultados representativos: Vocalizaciones ultrasónicas de las ratas se ven afectados por los cambios fisiológicos asociados con el envejecimiento y la 6-OHDA modelos de la enfermedad de Parkinson 13 Por lo general, se observa una reducción en la calidad de las vocalizaciones ultrasónicas se caracteriza por una reducción de los parámetros acústicos cuantitativos:. Ancho de banda, frecuencia máxima, la duración , y la intensidad. La Figura 6 muestra las vocalizaciones de frecuencia modulada de una rata en el modelo PD en tres momentos diferentes: inicial, después de la inducción de la EP, y después del entrenamiento de vocalización. En el estado de la EP, la llamada muestra una reducción en el ancho de banda, duración e intensidad. Además, la modulación de frecuencia se ha convertido en irregulares. Además de la degradación de determinados parámetros acústicos, también se observa una menor complejidad global de los tipos de vocalizaciones producidas en las ratas seniles y parkinsonismo. Por ejemplo, después de la inducción de la EP una rata produce un mayor número de llamadas simple y menos llamadas de frecuencia modulada. Formación vocalización siguientes, muchos parámetros acústicos, tales como la duración e intensidad, los niveles de aproximación de referencia y aumenta el número de llamadas complejas (Figura 6). Ratas de edad manifiesta la degradación similar de los parámetros acústicos en sus vocalizaciones ultrasónicas. Actualmente estamos investigando los efectos del entrenamiento vocal en ratas de edad. Figura 1. El número de vocalizaciones por sesión (objetivo cumplido por todas las ratas a la semana) y la tasa de vocalización (media y error estándar de muestra) se incrementan en un período de 6 semanas en un grupo de los jóvenes (9 meses) y adultos (32 mo) Fischer 344/Brown Noruega ratas F1. Figura 2 vocalizaciones representante de cada una de las tres categorías de 50 vocalizaciones kHz;. (A) simple, (B) de frecuencia modulada, y la armónica (C). Figura 3. Representante de frecuencia modulada vocalizaciones de una sola rata en (A) de referencia, (B) después de la inducción-PD, y (C) la formación después de la vocalización.