Preparación de la vida aislada de Vertebrados células visuales para imágenes de fluorescencia

En la retina de los vertebrados, fototransducción, la conversión de la luz en una señal eléctrica, se lleva a cabo por la barra y conos fotorreceptores ^1-4. Fotorreceptores de los bastones son responsables de la visión con poca luz, los conos de luz brillante. Fototransducción tiene lugar en el segmento externo de las células fotorreceptoras, un compartimento especializado que contiene una alta concentración de pigmento visual, el detector de luz principal. El pigmento visual se compone de un cromóforo, 11 – cis retinal, unido a una proteína, la opsina. Un fotón absorbido por el pigmento visual isomeriza el cromóforo de 11 – cis-trans de todos. Este fotoisomerización produce un cambio conformacional en el pigmento visual que inicia una cascada de reacciones que culminaron en un cambio en el potencial de membrana, y provocar la transducción de los estímulos de luz en una señal eléctrica. La recuperación de la célula de la estimulación de la luz consiste en la desactivación de los intermediarios activados por la luz, y el restablecimiento del potencial de membrana. Ca ^{2 +} modula la actividad de varias de las enzimas involucradas en la fototransducción, y su concentración se reduce a la estimulación de luz. De esta manera, Ca ^{2 +} juega un papel importante en la recuperación de la célula de la estimulación de la luz y su adaptación a la luz de fondo.

Otra parte esencial del proceso de recuperación es la regeneración del pigmento visual que ha sido destruido durante la luz de la detección por el fotoisomerización de los 11 – cromóforo cis a ^trans-5.7. Esta regeneración se inicia con la liberación de todo-trans retinal por el pigmento fotoactivado, dejando atrás la opsina apo-proteína. La libertad a todos-trans retinal se reduce rápidamente en una reacción de la utilización de NADPH a todo-trans retinol y opsina se combina con el nuevo 11 – cis retinal trajo en el segmento externo de reforma del pigmento visual. Todo-trans retinol se transfiere fuera del segmento externo y en las células vecinas por la proteína portadora retinoides especializados Interphotoreceptor (IRBP).

Imágenes de fluorescencia de las células fotorreceptoras solo puede ser usado para estudiar la fisiología y la biología celular. Ca ^{2 +} sensibles a tintes fluorescentes se pueden utilizar para examinar en detalle la interacción entre los segmentos externos de Ca ^{2 +} y la respuesta a los cambios de luz ^08/12, así como el papel de segmento interno Ca ^{2 +} en la homeostasis del Ca ^{2 + 13,14} . Los tintes fluorescentes también se puede utilizar para medir la concentración de Mg ^{2 + 15,} el pH, y como trazadores de humor acuoso y compartimentos de membrana ^16. Finalmente, la fluorescencia intrínseca de todo-trans retinol (vitamina A) puede utilizarse para controlar la cinética de su formación y la eliminación de las células fotorreceptoras solo ^17-19.