Sinekler Etanol Hassasiyet Tedbir Basit Yolu

1. Pozlama odasına oluşturma Yarım jilet kullanarak bir şişe tapası kesin. Alternatif olarak, pamuk topları kullanın. Sinekler içeri takılıp almazsınız pürüzsüz bir yüzey yapmak için bir gıda flakonun alt flakon fiş yarısı veya pamuk itin Eğer birden fazla maruz odaları, flakon fiş ve gıda her odasında aynı hacimde sürebilir emin olun. Flakonun tarafında bir işareti bu kolaylaştırabilir. 2. Sinekler merceğin Bir cinsiyet, yaş, maya olmadan düzenli gıda şişeleri içine maruz önce 1-5 gün gün 8 sinekleri toplayın. Deneyci kullanılan gerçek genotip / zorlanma kör olduğu gibi, kod onları Etiket. Pozlama odaları dokunarak içine sekiz sinekler aktarın. Uyutmak değil. Kolayca görünür hale getirmek için 200 kanıtı etanol küçük bir miktar, örneğin asit mavi 9, gıda boyası ekleyin. Coat 0.5 ml etanol ile bir şişe tapası altında, ya da pamuk topağı,. Pozlama şişenin içine etanol takın. Alkol şişenin içine değil, flakon duvara doğru baktığından emin olun. Sayan bir sayaç başlayın. 3. Kayıt etanol-indüklenen zehirlenme Zamanlayıcı sonra her dakika, sinekler irkilme ve on saniye için onları gözlemlemek için poz odasında bankta dokunun. Her dakika için sabit sineklerin numarasını kaydedin. Sinekler arkalarını kurtulmak edemiyorsa, tek bir yerde kalır, ya da tüm on saniyelik bir gözlem süresi boyunca kanatlarını hızla titreşmeye sabit. Ikinci sinekler, bu sineklerin büyük çoğunluğu hızlı bir kanat hareketi dönemleri arasında sabit çünkü sabit olarak kabul edilir. Sinekler arkalarını kurtulmak ve uzakta ve / veya flakon duvar kadar yürümek durumunda sabit DEĞİLDİR. 4 veya daha fazla sinek sabit olarak kaydedilmektedir bir poz deneme sona erdi. Sinek atın ve daha sonra yeniden kullanmak için poz odası havayı boşaltıyorum. 4. % 50 sedasyon zamanı belirleyin Sekiz sinek dört sabit kalır etanol maruz kalma başladıktan sonra zaman zaman% 50 sedasyon (ST50). Bu aşağıdaki şekilde belirlenir: Ya tam dört sinekler sabit olan ilk ölçüm dakika. Veya: az dört sinekler (Y1) bir kez noktası (X dakika), ve sonraki ölçüm süresi noktada fazla dört (Y2) (X 1 dakika), sonra aşağıdaki formül kullanılarak doğrusal enterpolasyon ST50 sabit: ST50 = (4 – Y1) / (Y2-Y1) + X 5. Hoşgörü belirlemek için poz tekrarlayın. Sinekler merceğin Deneyde kullanılan yabani tip kontrol suşu için ST50 (ağırlık) belirleyin. Yukarıda açıklandığı gibi etanol sinek deneysel gruplar Açığa. Kendi ST50 (1) Ölçü, ama 2x ST50 (wt) ulaşana kadar maruz devam. Sineklerin boş bir gıda şişenin içine geri aktarın ve 4 saat boyunca basılı tutun. Sinekler yeniden ortaya çıkarmak, ve maruz kalma 2 ST50 (2) belirlemek. Hoşgörü belirleyin X100 – (1 ST50 (2) / ST50 (1))% tolerans hesaplayın. 6. Temsilcisi Sonuçlar: Burada gösterilen, genotip ve doz başına düşen sinek 6-8 şişe ile elde edilen bazı temsilcisi sonuçları. Standart hata ölçüde büyükse, daha sonra sistematik bir sorun muhtemelen meydana. Etanol odaları aynı hacimde olduğunu maruz kalma odalarına karşı karşıyadır ve bu emin olun. Vahşi tip Şekil 1 doz yanıt eğrisi artan etanol yüzdeleri maruz uçar. Sinek Sekiz şişe doz ve cinsiyet başına maruz bırakıldı. Erkek ve dişi sinekler, her doz (p> 0.22, 2-yönlü ANOVA) aynı ST50 ST50 dozlarda çapında artan etanol doz (p <0,001) ile önemli ölçüde azalır. Aşırı kalabalık şişe uçar sağlıklı şişelerden oldukça küçük olabilir ve bu boyut farkı ST50 etkileyebilir. Tohum 15-20 kadın ile her şişe şişe başına optimal larva yoğunluğu elde etmek için 1-2 gün için döşeme. Şekil 2 veya% 90 veya% 100 etanol sinekler merceğin beyaz rabbit1 mutation2 (p <0.001, 2-yönlü ANOVA) neden daha önce açıklanan etanol-direnç üretir. Şekil 3, 4 saat kurtarma aralığı aralıklı,% 100 etanol maruz tekrarlayın, ikinci maruz kalma (p <0.001, eşleştirilmiş t sonra ST50 önemli bir artışa neden olur-Testi). Sinekler ilk pozlama (iki katına na ve ST50 tekabül eden) sırasında 24 dakika boyunca maruz kaldığı unutmayın. Yeniden pozlama (veriler gösterilmemiştir) üzerine ST50, kısa bir süre (12 dakika) miktarı için maruz kalma önemli bir artışa neden olmadı.