파리에서 에탄올 민감도를 측정하는 간단한 방법

1. 노출 챔버 만들기 면도날을 사용하여 반으로 병을 플러그 컷. 또는, 면화 공을 사용합니다. 파리가 인치 끼지는 것이다 부드러운 표면을 만들어 식품 약병의 하단에, 유리병 플러그 절반 또는 목화 공을 밀어 다중 노출 챔버 스를 만드는 경우, 유리병 플러그 식품 각 챔버에서 동일한 볼륨을 받아 있는지 확인하십시오. 유리병의 측면에 마크는 이것을 용이하게하실 수 있습니다. 2. 파리를 노출 하나의 성별, 나이 1~5일, 누룩을 넣지 않은 일반 식품 유리병에 노출 전날 8 파리를 수집합니다. 코드에서 실험자 사용 실제 유전자형 / 변형에 멀게됩니다 그러한 그들을 분류. 감청에 의해 노출 실에 8 파리를 전송합니다. 마취하지 마십시오. 그것이 쉽게 볼 수 있도록 200 증거 에탄올 음식 염료, 예 : 산성 블루 9의 작은 금액을 추가합니다. 0.5 ML의 에탄올과 코팅은 유리 플러그의 바닥이나 면화 공. 노출 약병에 에탄올 플러그를 삽입합니다. 알코올은 유리병에, 아니라 유리병의 벽을 향해 마주보고 있는지 확인하십시오. 세는 타이머를 시작합니다. 3. 기록 에탄올 유도 중독증 타이머 후 각 분 시작은, 파리를 놀라게하고 10 초 동안 그들을 관찰하기 위해 벤치에 노출 챔버를 누릅니다. 각 분간 정지 파리의 번호를 기록합니다. 파리는 그들이 귀찮게 안할 수 없다면 한 위치에 남아, 또는 빠르게 전체 10 초 관찰 – 기간 내내 자신의 날개를 진동 정지됩니다. 이러한 파리의 대부분 빠른 날개 운동의 기간 사이에 고정되기 때문에 후자 파리는 고정 간주됩니다. 파리는 그들이 귀찮게하고 거리 및 / 또는 유리 벽까지 걸을 수있다면 고정되지 않습니다. 4 개 이상 날아가 정지로 기록하는 경우 노출 재판이 완료됩니다. 파리를 취소하고 나중에 재사용을위한 노출 챔버 공기를 내보 내줘. 4. 50 % 진정 작용 시간을 결정 50 %의 진정 작용 (ST50)하는 데 걸리는 시간은 8 파리 그 중 넷은 고정 남아있는 에탄올의 노출의 시작 후 시간입니다. 이것은 다음과 같이 결정됩니다 : 어느 : 정확히 네 파리 고정하는 첫번째 측정 분. 또는 : 이하보다 4 파리 (Y1)가 한 번에 포인트 (분 X), 그리고 다음 측정 시점에 개 이상 (Y2) (X 일분) 공식을 사용하여 다음 선형 보간 ST50에 정지하는 경우 : ST50 = (4 – Y1) / (Y2 – Y1) + X 5. 공차를 결정하는 노출을 반복 파리를 노출 실험에 사용된 야생 형 제어 변형에 대한 ST50 (WT)을 결정합니다. 위에서 설명한 에탄올로 파리의 실험 그룹을 쉽게받을 수 있습니다. 그들 ST50 (1) 측정하지만, 당신이 시간을 2 배 ST50 (WT)를 도달할 때까지 노출로 진행합니다. 빈 식품 약병에 다시 파리를 전송하고, 4 시간 동안 기다려. 파리를 다시 노출하고, 노출 2 ST50 (2) 결정됩니다. 허용 오차를 결정 x100 – (1 ST50 (2) / ST50 (1))로 %의 허용 오차를 계산합니다. 6. 대표 결과 : 여기에 나와 우리가 유전자형과 복용량 당 파리 6-8 유리병과 함께 얻은 몇 가지 대표적인 결과입니다. 당신의 표준 오차가 크게 확대되면 체계적인 문제는 가능성이 발생했습니다. 에탄올은 챔버가 같은 볼륨되는 노광 실에 얼굴을하고 있는지 확인하십시오. 야생 유형의 그림 1. 선량 반응 곡선은 에탄올의 증가 비율에 노출 날아. 파리의 여덟 병은 복용과 성별에 따라 노출되었습니다. 복용에 걸쳐 ST50가 증가 에탄올 선량 (P는 <0.001)로 크게 감소하면서 남성과 여성의 파리는 각 복용량 (P> 0.22, 2 방향 ANOVA)에서 동일한 ST50을 보여줍니다. 오버 혼잡 병에서 파리 참고 건강한 병에서보다 대폭 작은 수 있으며,이 크기의 차이가 ST50에 영향을 줄 수 있습니다. 15-20 여성과 시드 각 병 병마다 최적의 애벌레 밀도를 얻을 1~2일위한 누워. 그림 2. 중 90 %, 또는 백퍼센트 에탄올로 파리를 노출은 흰색 rabbit1 mutation2 (P <0.001, 2 방향 ANOVA)에 의한 이전에 설명한 에탄올 저항을 재현. 그림 3. 4 시간 복구 간격에 의해 간격, 100 % 에탄올에 노출을 반복, 두 번째 노출 (P <0.001, 이점 t 후 ST50에서 상당한 증가 원인테스트). 파리가 첫 번째 노출 (두 번 자신의 나의 적 ST50에 해당하는) 동안 24분에 대한 노출다고합니다. 시간 (12 분)의 짧은 금액에 대한 노출을 다시 노출 (데이터가 표시되지 않음)에 따라 ST50에 상당한 증가를 일으키지 않았다.