Visualisatie van de embryonale zenuwstelsel in zijn geheel-mount Drosophila Embryo's
Summary
Beschrijven we de procedure voor te bereiden geënsceneerde<em> Drosophila</em> Embryo's voor de visualisatie van de embryonale zenuwstelsel tijdens de embryogenese.
Abstract
De Drosophila embryo is een aantrekkelijk model voor onderzoek naar de cellulaire en moleculaire basis van neuronale ontwikkeling. Hier beschrijven we de procedure voor de visualisatie van Drosophila embryonale zenuwstelsel met behulp van antilichamen tegen neuronale eiwitten. Omdat de hele embryonale perifere zenuwstelsel en het centrale zenuwstelsel zijn goed gekarakteriseerd op het niveau van individuele cellen (Dambly-Chaudière et al., 1986;.. Bodmer et al., 1987;. Bodmer et al., 1989), eventuele afwijkingen aan deze systemen kunnen gemakkelijk worden geïdentificeerd met behulp van antilichamen tegen verschillende neuronale eiwitten. De zich ontwikkelende embryo's worden verzameld op bepaalde tijden te zorgen dat de embryo's worden in de juiste ontwikkelingsstadia voor visualisatie. Na het verzamelen, worden de buitenste lagen van het embryo, het chorion membraan en de vitelline envelop dat het embryo omgeeft, verwijderd voordat fixatie. Embryo's worden vervolgens geïncubeerd met neuronale antilichamen en gevisualiseerd met behulp van fluorescent gelabelde secundaire antilichamen. Embryo's in stadia 12 tot 17 worden gevisualiseerd op de embryonale zenuwstelsel toegang. In fase 12 van de CNS kiem band begint verkorten en door etappe 15 de definitieve patroon van de commissuur is bereikt. Per fase 17 van de CNS contracten en de PNS is volledig ontwikkeld (Campos-Ortega et al.. 1985). Zo veranderingen in het patroon van de PNS en CNS kan gemakkelijk worden geobserveerd tijdens deze ontwikkelingsstadia.
Protocol
Discussion
De Drosophila embryo is een krachtig systeem voor het onderzoeken van de cellulaire en moleculaire veranderingen tijdens neuronale ontwikkeling. In dit protocol hebben we laten zien hoe je ganse berg embryo's voor te bereiden op immunohistochemie. We hebben aangepast dit protocol bij het protocol beschreven in Carroll en Scott, 1985. Dit protocol kan ook worden aangepast aan andere neuronale antistoffen te testen, maar optimalisatie van antilichamen moet worden gedaan. Verder kunnen defecten in de ontwikkel…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG wordt ondersteund door middelen van de State University van New York in Buffalo en van John R. Oishei Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
References
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Developmental Biology. 113, 288-294 (1986).
