A optogenética permite o uso da luz para manipular neurônios geneticamente modificados para expressar opsinas específicas – proteínas sensíveis à luz cuja ativação da luz desencadeia uma mudança no estado do neurônio. Aqui descrevemos uma abordagem optogenética em Drosophila usando o opsin Channelrhodopsin2. O protocolo de exemplo apresenta um ensaio optogenético definido para estudar os circuitos neuronais por trás do comportamento de fuga da mosca.
Protocol
Este protocolo é um trecho de de Vries e Clandinin, Optogentic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Gerar moscas channelrhodopsin Cross UAS-ChR2 voa com o motorista Gal4 de sua escolha, usamos G105-Gal4, que é expresso em neurônios Foma-1 no lobo óptico. Para eliminar a possibilidade de uma resposta visual à estimulação da luz azul, ambas as linhas de mosca estão em um fundo w+norpA. <…
Representative Results
Figura 1: Configuração experimental mostrando a plataforma com o suporte vertical e os quatro braços de resfriação segurando dissipadores de calor com matrizes led afixadas a eles. (A) A configuração sob iluminação ambiente. (B) A configuração quando os LEDs estiverem iluminados. (C) Uma visão de perto de um LED Tri-Star na pia de calor. (D) U…
Materials
Reagent
All-trans Retinal
Advance Scientific Chemical Inc
R3041
Equipment
Heat Sink 9.2 C/W
Luxeonstar
LPD30-30B
30 mm square X 30 mm high
Carclo 18° Tri-Lens
Luxeonstar
10507
Blue Rebel LED on Tri-Star Base
Luxeonstar
MR-B0030-20T
470 nm, 174 lm @ 700 mA.
700 mA BuckPuck DC Driver
Luxeonstar
3021-D-E-700
Wiring Harness for BuckPuck Driver
Luxeonstar
3021-HE
Pre-cut thermal adhesive tape
Luxeonstar
LXT-S-12
20 mm Hex Base
Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID
McMaster-Carr
5307K49
Snap-Loc Coolant Hose Connector
McMaster-Carr
5307K39
¼" NPT Male
Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply