Procesamiento de patas de insectos para microscopía de fluorescencia: un método para preservar estructuras neuromusculares para imágenes
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. (2018).
Este video describe un método para diseccionar, arreglar y montar la pierna adulta De Drosophila mientras preserva su neuromusculatura intacta para el análisis de imágenes.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Disección y fijación de las piernas Tome una placa de vidrio multi-pozo y llene el número apropiado de pozos con 70% de etanol. Añadir 15-20 CO2moscas anestesiadas (de cualquier sexo y cualquier edad) a cada pozo y mediante el uso de un cepillo, suavemente dab las moscas en la solución de etanol hasta q…
Representative Results
Figura 1: Procedimiento para montar las piernas en diapositivas del microscopio. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Cite This Article
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).