このプロトコルは、成人のゼブラフィッシュから臓器を特定し、解剖するための手順を説明します。
過去20年間で、ゼブラフィッシュは、脊椎動物の発生や疾患を理解するための強力なモデル生物となっています。胚および幼虫の実験的分析は広範であり、形態が十分に文書化されているが、一緒に大人と一緒に作業するためのテクニックを持つ成人のゼブラフィッシュの解剖学と成人の構造や臓器の開発の研究の説明は、不足している。幼虫の臓器は、その全体的な構造、形態、及び成人への移行幼虫の時の解剖学的位置に大きな変化を受ける。内部的に、臓器が巨大な成長とリモデリングを受ける間、外部から、透明な幼虫は、その特徴的な大人のストライプpigmentパターンと対になった骨盤のフィンを開発しています。さらに、両性能の生殖腺の原基が精巣か卵巣のどちらかに開発しています。このプロトコルは、成体の器官の多くを識別し、脳、生殖腺、消化器系、心臓、および成人のゼブラフィッシュの腎臓の解剖のための方法を示しています。解剖の臓器は、in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学、組織学、RNAの抽出、タンパク質解析、および他の分子技術のために使用することができます。このプロトコルは、幼虫の臓器のリモデリング、成体の器官系の成人およびその他の調査への特定の器官の形態形成を含むようにゼブラフィッシュでの研究の広がりを支援します。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、MCMとTGの米国癌学会特別研究員#PF – 05 – 041 – 01 – DDCにNIHの助成R01 HD050901によってサポートされていました。
Reagents:
0.2% Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate) 200 mg tricaine powder 97.9 ml DD water ~1 ml 1 M Tris (pH 9) Adjust pH to 7.0
Phosphate buffered saline (PBS) 4.0 g NaCl 0.1 g KCl 100 ml 0.1 M PO4 Buffer, pH 7.3 150 ml dH2O
Ringer’s solution 6.7g NaCl 0.2g KCl 0.2g CaCl2 1.2g Hepes 1 L H2O Adjust pH to 7.2
Equipment:
Dissecting dish with mat Electron Microscopy Sciences catalog #70540
Vannas spring scissors Fine Science Tools catalog #91500-09