마우스 복막 구멍 세포의 분리
Summary
포유류의 복막 캐비티는 타고난 면역 반응에 중요한 다른 면역 세포 인구가 포함되어 있습니다. 효율적인 분리 방법은 이러한 세포의 생화 학적 및 기능적 분석이 필요합니다. 여기서 우리는 마우스의 복막 공동 세포의 격리를위한 포괄적인 방법을 제공합니다.
Abstract
복막 구멍은 간, 비장, gastro – 창자 및 기타 내장의 대부분을 포함하고 포유류의 막 – 바운드와 유체 가득한 복강입니다. 그것은 macrophages, B 세포와 T 세포를 포함한 면역 세포의 숫자를 항구. 복막 캐비티에 순진한 macrophages 높은 숫자의 존재는 순진 조직 주민 macrophages (1)의 수집을 위해 선호하는 사이트를 만듭니다. 복막 캐비티도 있기 때문에 기존의 B2 셀에 이외에 지하 1 층 세포로 알려진 독특한 복막 캐비티 상주 B 세포 부분 집합의 존재의 B 세포의 연구에 중요합니다. B1 세포는 CD11b와 CD5의 표면 표현으로 구분할 수 B1a하고 B1b 세포로 세분화됩니다. B1 세포가 병원균 (2-4)의 다양한 초기 보호를 제공하는 자연 IgM의 중요한 소스입니다. 이러한 세포는 자연 (5)에 autoreactive 있지만, 그들이 autoimmunity을 방지하기 위해 관리하는 방법은 아직 완전히 이해되지 않습니다. 반대로, CD5에<sup> +</sup> B1a 세포는 IL – 10 생산 용량 (6)을 가진 일부 규제 속성을 보유하고 있습니다. 따라서 복막 공동 B1 세포 때문에 그들의 다양한 기능과 개발 및 규제와 관련된 여러 unaddressed 질문 연구에 흥미로운 세포 인구입니다. 복막 캐비티 주민 면역 세포의 분리 때문에 복막 캐비티 내부에 정의된 구조의 부족 까다롭습니다. 우리 프로토콜은 다음 유동세포계측법에 의해 및 다른 생화 학적 및 면역 assays에 대한 phenotypic 분석을 위해 사용할 수있는 생쥐의 복막 캐비티에서 현실적인 면역 세포를 얻기위한 절차를 설명합니다.
Protocol
Discussion
복막 캐비티 세포의 격리는 다른 면역 세포, 주로 macrophages 및 구체적인 B 세포 하위 집합의 연구를위한 중요한 기술이다. 이 간단한 과정이지만, 관련된 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 수집된 샘플의 혈액을 오염의 존재는 순수 복막 캐비티 세포 인구를 얻을 피해야한다. 자궁 경부 전위에 의해 안락사는 복막에 고인 혈액 오염을 피하기 위해 신중하게 이루어져야합니다. 또는 CO 2를 사용할 수 있습니다. 또한, 프로 시저 적절한 치료 도중 복막 구멍에있는 방광이나 다른 장기 펑쳐링 않도록 주의해야한다. 주입 액의 대부분을 복구하면 세포 수율하는 것이 중요합니다.
이 절차는 널리 주민의 중간 번호부터 대식 세포 생물학을 연구하는 데 사용됩니다, unstimulated macrophages 쉽게 대식 세포 콜로니 자극 인자 (8을 사용하여 체외에서 성숙 macrophages에 골수양 전구 세포를 차별 힘드는 작업과는 달리, 복막 캐비티에서 얻을 수 있습니다 , 9). thioglycollate 사용이 macrophages (7)의 생리적 특성을 변경할 수도 있지만 복막 캐비티에서 대식 세포 수율은 thioglycollate의 이끌어 냄 메서드를 사용하여 향상시킬 수 있습니다.
B 세포는 타고난과 적응 면역 모두에 중요한 역할을 우리 면역 체계의 중요한 부분입니다. 다른 B 세포 subpopulations 중에서 B1 세포는 타고난 면역, autoimmunity 및 면역 조절에 관여 B 세포의 고유한 하위 집합을 구성. B1 세포는 주로 복막 캐비티에 위치하고 있으며 자체 replenishing입니다. 그들은 바이러스의 번호와 박테리아 (10-12)에 대한 보호의 첫 번째 라인을 제공하고 자연 IgM의 주요 생산자 중 하나이다. B1 세포는 또한 면역 조절에 관여하는 중요한 시토킨는 IL – 10 (6)의 주요 원천입니다. 여러 연구가 B1 세포와 함께 추진되고 있지만, 아직 특별히 자신의 대조 기능을 추가로 평가를 위해 규제의 역할 범위가있다. 복막 캐비티 세포 분리 방법은 B1 세포의 기능을 연구하는 독특한 기회를 제공합니다.
Acknowledgements
이 작품은 NIH 부여 AI069358 및 BloodCenter 연구 재단에 의해 부분적으로 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |
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