マウス用ダーク/ライト遷移テスト

マウスのゲノム配列のすべてが決定されているが、これらの遺伝子のほとんどの機能は知られていない。技術を遺伝子標的、しかし、マウスの特定の遺伝子を削除したり操作するために使用することができます（相葉ら、2007;。。Aust​​inら、2004）。特定の行動上の特定の遺伝子の影響は、その後、変異マウスの行動解析を行うことによって決定することができる（高尾と宮川、2006;高尾らは、2007年。）。変異マウスの行動表現型解析のためのテストとして、ダーク/ライト遷移テストは、マウスの動作（ローリー、2000）のような不安を測定するために最も広く使用されている試験の一つです。テストは、明るく照らされた領域へのマウスの自然な嫌悪感にと新たな環境で彼らの自発的な探索行動（ローリー、1985）に基づいています。テストは、抗不安薬の治療（ローリー、1985）に敏感です。装置は、暗室と明るく照明室で構成されています。 5センチメートル広い3センチの高さ制限されたオープニングは、2つのチャンバーを接続します。マウスは2つのチャンバー間を自由に移動することが許可されます。明るい室と時間の期間内のエントリの数は、マウスで明るい空間不安の指標として、そこに使用されて過ごした。

ダーク/ライト遷移テストは、もともとローリーと同僚（クローリーとグッドウィン、1980）によって開発されました。元のバージョンと我々のテストの間に2つの違いがあります。二つの部屋の大きさは、テストの我々のバージョンで同じであるのに対し、最初に、光室は、オリジナルバージョンの暗室よりも大きいです。第二に、オリジナルバージョンでは、光室は天井がなく、我々は光室の天井と壁のために不透明な白いプラスチックを使用しながら、光室の壁は、透明であった（クローリーとグッドウィン、1980）。これらの違いは、すなわち光室の大きさと開放性は、同時明るい空間不安の検出だけでなく、テストの元のバージョンのオープンスペースの不安を可能にする。当研究室では、しかし、オープンスペースマウスの不安様行動は高架式十字迷路でテストされます。不透明な壁と天井、光室の大きさ、そして私たちの特定の光/闇遷移テストのプロトコルは、元のバージョンに比べて明るい空間不安を検出するための、より特化です。

ダーク/ライト遷移テストと高架式十字迷路は両方不安様行動を評価するために使用されますが、結果は必ずしも一貫性がありません。例えば、前脳特異的カルシニューリンノックアウトマウスは、光/闇遷移テストに光室での時間の減少量を過ごすが、高架式十字迷路のオープンアームでの時間の増加量（宮川ら、2003） 。我々は、明/暗移行テストと高架式十字迷路試験はそのような明るい空間不安とオープンスペースの不安のような振る舞いのような不安のような振る舞いの異なる側面を、評価するという仮説を立てた。この仮説をテストするには、我々は、大規模なデータの両方のテストで同じマウスを使用して収集された設定を使用していました。当研究室では、我々は遺伝子の行動の重要性をスクリーニングするために多くのドメインをカバーする行動テストバッテリーを行う。テストバッテリーの寿命は数週間が完了する必要があります。テスト期間中は、マウスのケージは、私たちの施設でラックに保持されます。マウスが他の機関から研究室に輸送されている場合、それらは少なくとも1週間のために私たちの施設の環境に慣れています。馴化期間の後、マウスは、一般的なヘルスチェックと神経学的スクリーニング（宮川ら、2003）に供される、およびこれらの簡単な検査の後、マウスは明/暗移行試験に供されています。映画に示すように、テストは、実験室への慣れの30分後の防音実験室で行われている。

我々は映画に示されているプロトコルを使用して、遺伝子組み換え変異マウスの60以上の系統を評価し、3000以上のマウス（野生型と変異マウスを含む）のための生データの大きなセットを持っている。我々は、生データの大きなセットを活用するために因子分析を行った。インデックス（未発表データ）の間にいくつかの有意な相関があったものの、実際、我々は、各試験（未発表データ）から別の要因を検出..これらのデータは、我々が今構築している公的データベースの一部として開示されます。

我々のテストバッテリーでは、野生型の同腹子は、通常、コントロールとして使用されます。背景の株として、C57BL/6Jマウスは、一般的に使用されています。我々はテスト電池の変異マウスのコントロールとして使用されるC57BL/6Jマウスのデータを収集した。私たちの光/闇遷移テストでC57BL/6Jマウスから得られた指標は、（;平均SEM、N = 795）、以下の通りであった走行距離：光室で846.5 8.88センチメートル、暗室で1478.5 9.53センチメートルを、時間の持続時間は費やして：光の215.8 1.85秒、暗闇の中で395.8 1.86秒、コンパートメント間の遷移の数：30.52 0.43;光チャンバーを入力してレイテンシ：64.94 2.40秒チャンバーへの入り口付近マウスの動きはカメラによって検出され、cの両方に費やされる時間としてカウントされますhambers。このため、時間の平均期間の合計は、光の中で過ごし、暗闇のコンパートメントで試験の全期間（600秒）よりも大きかったこと。

我々のプロトコルでは、マウスが最初に暗い部屋に置かれている。 3秒暗室でマウスを配置した後、チャンバーの間にドアが自動的に開き、マウスは2つのチャンバー間を自由に移動できます。 215.8 1.85秒、暗闇の中で過ごした時間の長さ：316.3 2.11秒[時間暗所で過ごした行うC57BL/6Jマウスは、（P <0.0001、持続時間は、光の中で過ごした場合暗室よりも光室に少ない時間を過ごす初めて光室]、N = 795、ペア- t検定）を入力する前に暗闇の中で過ごした最初の時間は含まれません。これは、C57BL/6Jマウスは光チャンバーを避ける傾向にあることを示し、そして光の中で費やされた時間が不安のような振る舞いのよい指標であること。

すべてのデータが同じプロトコルを使用して取得されるので、変異マウスの様々な株から得られた結果は、簡単に、比較されます。容易に再現し、他の変異体のデータと比較することができる変異マウスの系統の結果を表現型取得するには、行動試験法は、研究室間で可能な限り同じにする必要があります。クラッブと同僚は、全く同じ近交系とのnull変異株を用いて、マウスの行動と実験環境間の相互作用を試験した。彼らの研究では、装置、テストプロトコル、および多くの環境変数は、厳密に標準化した。彼らはまた、すべてのビヘイビア（クラッブら、1999）における系統差を検出したものの、標準化にもかかわらず、彼らは、研究室間の行動における体系的な違いを見つけた。彼らは変異体を特徴づける手に負えないの変数との実験は、特定の研究室に特異な結果をもたらす可能性があることを報告した。研究室間に存在する手続き型の違いは、それが困難な研究室間の結果を複製または比較すること。プロトコルの詳細を示すことができるように、ここで、私たちは映画のような光/闇の移行テストのための我々のプロトコルを示す。

プロトコルの視覚的なドキュメントを確立することは研究室間および変異マウスの様々な系統の行動表現型の比較のために使用されるプロトコルの標準化を可能にする、実験手順の詳細についての理解を促進するこのテストを用いて評価されます。そのような我々の行動テストバッテリーで使用する高架式十字迷路、オープンフィールド試験、porsolt強制水泳試験、恐怖条件付け、用など、他のプロトコルの作品は現在、将来のビデオ雑誌記事などの出版物のために作られている。