Journal
/
Bioquímica
/
Extracción de microtúbulos modificados de células de mamíferos para estudiar complejos microtúbulos-proteínas mediante microscopía crioelectrónica
JoVE Journal
Bioquímica
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioquímica
Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Extracción de microtúbulos modificados de células de mamíferos para estudiar complejos microtúbulos-proteínas mediante microscopía crioelectrónica

DOI:
10.3791/65126-v

•

08:02 min

•

March 03, 2023

•

, , ,
1Oncode Institute and Division of Biochemistry,Netherlands Cancer Institute

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cell Culture and Harvesting
  • 01:30Microtubule Extraction
  • 04:13Cryo-Electron Microscopy (EM) Grid Preparation
  • 06:16Results: Analyzing Microtubule-Protein Complexes
  • 07:34Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Aquí, describimos un protocolo para extraer tubulina endógena de células de mamíferos, que pueden carecer o contener enzimas modificadoras de microtúbulos específicas, para obtener microtúbulos enriquecidos para una modificación específica. Luego describimos cómo los microtúbulos extraídos se pueden decorar con proteínas purificadas de unión a microtúbulos para preparar rejillas para la microscopía crioelectrónica.

Tags

MicrotubuleCryo-EMMicrotubule-protein ComplexesPost-translational ModificationsCell CultureHCT116 CellsCell LysisUltracentrifugationMicrotubule PolymerizationPaclitaxel

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

Tandem Affinity purificación de complejos de proteínas a partir de células eucariotas

Expresión y purificación de los humanos sensibles a lípido catiónico canal TRPC3 para la determinación estructural por microscopia del Cryo-electrón de solo-partícula

Preparación rápida de la rejilla para la crio-microscopía electrónica resuelta en el tiempo

Microscopía crioelectrónica de partícula única: de la muestra a la estructura

Micropatronaje Transmisión Microscopía Microscopía Rejillas para Dirigir el Posicionamiento Celular dentro de los Flujos de Trabajo de Tomografía Crioelectrónica de Celda Entera

Visualización simultánea de la dinámica de microtúbulos reticulados y únicos in vitro mediante microscopía TIRF

Un robusto flujo de trabajo de procesamiento de criomicroscopía electrónica de una sola partícula (cryo-EM) con cryoSPARC, RELION y Scipion

Purificación de proteínas p53 ubiquitinadas a partir de células de mamíferos

Preparación de partículas de núcleo de nucleosomas complejadas con factores de reparación de ADN para la determinación estructural de la criomicroscopía electrónica

Cryo-Electron Microscopy Screening Automation Across Multiple Grids Using Smart Leginon

Read Article