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Extração de Microtúbulos Modificados de Células de Mamíferos para Estudo de Complexos Microtúbulo-Proteína por Microscopia Crio-Eletrônica
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JoVE Journal Bioquímica
Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy

Extração de Microtúbulos Modificados de Células de Mamíferos para Estudo de Complexos Microtúbulo-Proteína por Microscopia Crio-Eletrônica

DOI:
10.3791/65126-v

•

08:02 min

•

March 03, 2023

•

, , ,
1Oncode Institute and Division of Biochemistry,Netherlands Cancer Institute

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cell Culture and Harvesting
  • 01:30Microtubule Extraction
  • 04:13Cryo-Electron Microscopy (EM) Grid Preparation
  • 06:16Results: Analyzing Microtubule-Protein Complexes
  • 07:34Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Aqui, descrevemos um protocolo para extrair tubulina endógena de células de mamíferos, que podem não possuir ou conter enzimas modificadoras de microtúbulos específicas, para obter microtúbulos enriquecidos para uma modificação específica. Em seguida, descrevemos como os microtúbulos extraídos podem ser decorados com proteínas purificadas de ligação a microtúbulos para preparar grades para microscopia crio-eletrônica.

Tags

MicrotubuleCryo-EMMicrotubule-protein ComplexesPost-translational ModificationsCell CultureHCT116 CellsCell LysisUltracentrifugationMicrotubule PolymerizationPaclitaxel

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