Journal
/
Bioquímica
/
Visualisering af konformationsdynamikken i membranreceptorer ved hjælp af enkeltmolekyle FRET
JoVE Journal
Bioquímica
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Bioquímica
Visualizing the Conformational Dynamics of Membrane Receptors Using Single-Molecule FRET

Visualisering af konformationsdynamikken i membranreceptorer ved hjælp af enkeltmolekyle FRET

DOI:
10.3791/64254-v

•

10:59 min

•

August 17, 2022

•

, ,
1Department of Molecular Biosciences,Northwestern University

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 01:04Slide and Coverslip Cleaning
  • 03:04mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
  • 05:13Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
  • 06:23Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
  • 07:47Data Analysis
  • 08:39Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
  • 10:11Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Denne undersøgelse præsenterer en detaljeret procedure til udførelse af enkeltmolekyle fluorescensresonansenergioverførsel (smFRET) eksperimenter på G-proteinkoblede receptorer (GPCR'er) ved hjælp af stedsspecifik mærkning via unaturlig aminosyre (UAA) inkorporering. Protokollen giver en trinvis vejledning til smFRET-prøveforberedelse, eksperimenter og dataanalyse.

Tags

Keywords: Single-molecule FRETMembrane ReceptorsConformational DynamicsProtein LabelingMGluR2HEK 293T CellsPEGylationAmino SalinizationDremelAcetonePotassium HydroxideMethanolPoly-L/D-lysineTransfectionAlkyne Cyanine Dyes

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/64254?article_type=v

Single-molekyle Super-resolution Imaging af Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphat i plasmamembranen med Novel fluorescerende prober
check_url/pt/64254?article_type=v

Strukturel Oplysninger fra Single-molekyle FRET Eksperimenter Brug af Fast Nano-positionering System
check_url/pt/64254?article_type=v

Brug Stillads Liposomer at Rekonstituer Lipid-proksimal protein-protein interaktioner<em> In vitro</em
check_url/pt/64254?article_type=v

High Precision FRET på enkeltmolekyliveau for biomolekylstrukturbestemmelse
check_url/pt/64254?article_type=v

Enkelt-molekyle Manipulation af G-quadruplexes af magnetiske pincet
check_url/pt/64254?article_type=v

Ved hjælp af trefarvet enkelt-molekyle FRET at studere sammenhængen af Protein interaktioner
check_url/pt/64254?article_type=v

Definere Hsp33's Redox-regulerede anstandsdame aktivitet og kortlægning konformationelle ændringer på Hsp33 ved hjælp af brint-deuterium Exchange massespektrometri
check_url/pt/64254?article_type=v

Kovalente immobilisering af proteiner for enkelt molekyle kraft spektroskopi
check_url/pt/64254?article_type=v

Proteom-wide kvantificering af mærkning homogenitet på enkelt-molekyle niveau
check_url/pt/64254?article_type=v

Enkelt-molekyle tracking mikroskopi-et værktøj til bestemmelse af Difvøse tilstande af Cytosolic molekyler

Read Article