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Fluormetria de varredura nano-diferencial para triagem em descoberta de chumbo baseada em fragmentos
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Bioquímica
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JoVE Journal Bioquímica
Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

Fluormetria de varredura nano-diferencial para triagem em descoberta de chumbo baseada em fragmentos

DOI:
10.3791/62469-v

•

06:26 min

•

May 16, 2021

•

, , , , , , , ,
1Oncode Institute and Division of Biochemistry,the Netherlands Cancer Institute, 2Institute for Organic Chemistry and Chemical Biology, Center for Biomolecular Magnetic Resonance (BMRZ),Johann Wolfgang Goethe-University

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 00:35Plate Preparation
  • 01:06Fragment Nano-Dispensing by the Mosquito Robot
  • 02:01Fragment Dispensing
  • 03:17Preparing the Prometheus
  • 04:25Fluorescence Scan and Thermal Denaturation
  • 05:04Results: Fragment Screening
  • 05:49Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Monitorar mudanças na temperatura de fusão de uma proteína alvo (ou seja,ensaio de mudança térmica, TSA) é um método eficiente para triagem de bibliotecas de fragmentos de algumas centenas de compostos. Apresentamos um protocolo TSA implementando fluoremetria nano-diferencial assistida por robótica (nano-DSF) para monitorar fluorescência triptofano intrínseca e dispersão de costas leves para triagem de fragmentos.

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Keywords: Nano-differential Scanning FluorimetryFragment-based Lead DiscoveryProtein SampleLigand ScreeningFragment PlateProtein PlateNano DispenserDeck ConfigurationFragment DispensingProtein Sample Preparation

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