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Medindo a ligação de nucleotídeos a proteínas de membrana intactas e funcionais em tempo real
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JoVE Journal Bioquímica
Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time

Medindo a ligação de nucleotídeos a proteínas de membrana intactas e funcionais em tempo real

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•

08:33 min

•

March 11, 2021

DOI:

10.3791/61401-v

DOI:
10.3791/61401-v

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08:33 min
March 11, 2021

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1Department of Physiology, Anatomy and Genetics,University of Oxford, 2Department of Chemistry and Neuroscience Program,Trinity College

Summary

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Este protocolo apresenta um método para medir a ligação de adenina nucleotídica a receptores em tempo real em ambiente celular. A ligação é medida como transferência de energia de ressonância de Förster (FRET) entre derivados de nucleotídeos trinitrofenila e proteínas marcadas com um aminoácido fluorescente não canônico.

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Nucleotide BindingMembrane ProteinsFRETATPPotassium ChannelDiabetesUnroofed MembraneSonicationMicroscopyANAPFluorescence Imaging

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Usher, S. G., Ashcroft, F. M., Puljung, M. C. Measuring Nucleotide Binding to Intact, Functional Membrane Proteins in Real Time. J. Vis. Exp. (169), e61401, doi:10.3791/61401 (2021).

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