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Geração de nativos, sem marcas de formatação da huntingtina Exon1 monômero e fibrilas usando uma estratégia de fusão de sumô
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JoVE Journal Bioquímica
Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Geração de nativos, sem marcas de formatação da huntingtina Exon1 monômero e fibrilas usando uma estratégia de fusão de sumô

DOI:
10.3791/57506-v

•

11:22 min

•

June 27, 2018

•

, , ,
1Laboratory of Molecular and Chemical Biology of Neurodegeneration,Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL)

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:53Cell Lysis and Purification of His6-SUMO Httex1 Fusion Protein by Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC)
  • 02:56Cleavage of the His6-SUMO-tag and HPLC Purification
  • 06:06Disaggregation and Resolubilization of Httex1 Proteins
  • 07:53Results: Characterization of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Prepared via SUMO Fusion
  • 09:52Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Aqui, apresentamos um protocolo robusto e otimizado para a produção de quantidades de miligrama de monômeros nativos, livre de marca e fibrilas do exon1 da proteína huntingtina (Httex1) com base na fusão transitória do ubiquitin pequeno modificador relacionados (SUMO).

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Keywords: Native Huntingtin Exon1SUMO Fusion StrategySDS-PAGE AnalysisIMAC PurificationHPLC PurificationDTTL-cysteineTrifluoroacetic AcidAggregation-prone ProteinsAmyloid-betaAlpha-synuclein

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