Acesso à diferenciação precoce de células T ^CD4+ foliculares específicas de vírus em camundongos infectados por LCMV agudo

Encontrando diferentes patógenos ou ameaças, as células T CD4 ⁺ virgens adaptam suas respostas imunes diferenciando-se em vários subconjuntos de células T auxiliares (T_H) com funções especializadas¹. No cenário de infecção viral aguda, uma grande parcela de células T CD4⁺ virgens se diferencia em células T auxiliares foliculares (T_FH) que fornecem ajuda às células B ^2,3. Diferente de outros subconjuntos de células T_H CD4 ⁺ (por exemplo, células T_H1, T_H2, T_H9 e T_H17), as células T_FH expressam um nível substancial de CXCR5, que é o receptor de quimiocina para a quimiocina CXCL13 de células B, permitindo que as células T_FH migrem para os folículos das células B. Nos folículos das células B, as células T_FH auxiliam as células B cognatas a iniciar e manter as reações do centro germinativo, permitindo assim a rápida produção de anticorpos de alta afinidade e memória humoral de longo prazo ^2,3.

Após a infecção viral aguda, o comprometimento precoce do destino das células T_FH específicas do vírus ocorre dentro de 72 h ^4,5 e é controlado pelo linfoma de células B repressor transcricional-6 (Bcl-6) ^{5 , 6 , 7 , 8 , que} atua como o “regulador mestre” que governa as decisões de destino das células T_FH. A deficiência de Bcl-6 embota severamente a diferenciação das células T_FH, enquanto a expressão ectópica de Bcl-6 promove substancialmente o compromisso do destino das células T_FH. Além do Bcl-6, várias moléculas estão envolvidas na instrução do comprometimento precoce do destino das células T_FH. Os fatores de transcrição TCF-1 e LEF-1 iniciam a diferenciação de células T_FH por meio da indução de Bcl-6 ^9,10,11. A inibição do Blimp1, tanto por Bcl-6 quanto por TCF-1, é necessária para o comprometimento precoce do destino das células T_FH ^11,12. STAT1 e STAT3 também são necessários para a diferenciação precoce de células T_FH ¹³. Além disso, as modificações epigenéticas pela histona metiltransferase EZH2^14,15 e m6A metiltransferase METTL3¹⁶ ajudam a estabilizar os programas transcricionais de células T_FH (especialmente Bcl6 e Tcf7) e, assim, preparar o compromisso inicial do destino das células T_FH. Embora avanços, incluindo as moléculas acima mencionadas e outras, resumidas em outro lugar³, tenham sido feitos na compreensão dos regulamentos transcricionais e epigenéticos do compromisso inicial do destino das células T_FH, moléculas anteriormente desconhecidas ainda precisam ser aprendidas.

No modelo de camundongo de infecção pelo vírus da coriomeningite linfocítica aguda (LCMV), as células T CD4⁺ SMARTA (SM) congênitas transgênicas TCR transferidas adotivamente, que reconhecem especificamente o epítopo da glicoproteína LCMV^{I-A b}GP_66-77, sofrem diferenciação de células T_FH ou T_H1 durante a infecção viral. Este padrão de diferenciação de bifurcação T_FH /_{T H}1 suporta o avanço do modelo de infecção SM / LCMV aguda no estudo da biologia de células T_FH específicas do vírus. De fato, o modelo de infecção SM/LCMV agudo tem sido amplamente utilizado no campo de pesquisa de células T_FH e desempenhou um papel crucial nas descobertas marcantes na biologia celular T_FH. Isso inclui a identificação do Bcl-6 mencionado acima como o fator de transcrição definidor de linhagem de células T_FH ^5,6, bem como outros fatores transcricionais importantes (por exemplo, Blimp-1⁶, TCF-1 / LEF ^9,10,11, STAT1 / STAT3¹³, STAT5¹⁷, KLF2¹⁸ e Itch¹⁹) orientando a diferenciação de células T_FH, regulações pós-transcricionais ( por exemplo, METTL3¹⁶ e miR-17 ~ 92²⁰) da diferenciação de células T_FH, memória e plasticidade de células T_FH ^21,22 e estratégias racionais de vacinação direcionadas às células T_FH (por exemplo, selênio²³).

O presente estudo descreve métodos reprodutíveis para acessar o compromisso de destino precoce de células T_FH específicas do vírus, incluindo (1) estabelecer um modelo de camundongo quimera SM infectado com LCMV agudo adequado para acessar células T_FH diferenciadas precocemente, (2) realizar colorações de citometria de fluxo de moléculas relacionadas a células T_FH diferenciadas precocemente e (3) realizar manipulação de genes baseada em vetor retroviral em SM CD4 ⁺ Células T. Esses métodos serão úteis para estudos que investigam o compromisso de destino precoce de células T_FH específicas do vírus.