Retalho axial da artéria epigástrica superficial inferior para estudo dos efeitos do pré-condicionamento isquêmico em modelo de ratos
Summary
Este protocolo descreve a coleta, sutura e monitorização de retalhos fasciocutâneos em ratos que permitem boa visualização e manipulação do fluxo sanguíneo através dos vasos epigástricos superficiais inferiores por meio de pinçamento e ligadura dos vasos femorais. Isso é fundamental para estudos envolvendo pré-condicionamento isquêmico.
Abstract
Os retalhos fasciocutâneos (FCF) tornaram-se o padrão-ouro para reconstrução de defeitos complexos em cirurgia plástica e reconstrutiva. Esta técnica poupadora de músculo permite transferir tecidos vascularizados para cobrir qualquer grande defeito. FCF pode ser usado como retalhos pediculados ou como retalhos livres; no entanto, na literatura, as taxas de falha para FCF pediculado e FCF livre são superiores a 5%, deixando espaço para aprimoramento dessas técnicas e maior expansão do conhecimento nessa área. O pré-condicionamento isquêmico (PI) tem sido amplamente estudado, mas os mecanismos e a otimização do regime de PI ainda precisam ser determinados. Esse fenômeno é, de fato, pouco explorado na cirurgia plástica e reconstrutiva. Neste estudo, é apresentado um modelo cirúrgico para estudar o regime de PI em um modelo de retalho fáscio-cutâneo axial de ratos, descrevendo como avaliar de forma segura e confiável os efeitos da PI na sobrevida do retalho. Este artigo descreve o procedimento cirúrgico completo, incluindo sugestões para melhorar a confiabilidade desse modelo. O objetivo é fornecer aos pesquisadores um modelo reprodutível e confiável para testar vários regimes de pré-condicionamento isquêmico e avaliar seus efeitos na sobrevida do retalho.
Introduction
A cirurgia plástica e reconstrutiva está em constante evolução. O desenvolvimento dos retalhos muscular, fasciocutâneo e perfurante tem possibilitado reconstruções de melhor qualidade e redução da morbidade. Combinando esse conhecimento anatômico aprimorado com habilidades técnicas aprimoradas, os cirurgiões reconstrutivos podem realizar transferências de retalhos livres quando os defeitos não estão próximos de nenhuma solução local. Entretanto, embora a cirurgia de retalho perfurante seja atualmente a técnica mais avançada em cirurgia reconstrutiva, a literatura relata uma taxa de falha de 5% nas transferências de retalhos livres 1,2,3 e de até 20% para a reconstrução de retalho pediculado 4,5,6. A falha parcial a total do retalho ocorre quando o pedículo do retalho está comprometido, portanto, é essencial a busca contínua de melhorias nas técnicas atuais. Um dos métodos para melhorar a sobrevida do retalho é promover sua neovascularização no leito da ferida, permitindo a perfusão por outra fonte que não o pedículo. O pré-condicionamento isquêmico (PI) foi inicialmente descrito emum modelo cardíaco7, demonstrando que um órgão exposto à isquemia controlada sobrevive em maior grau após perder seu suprimento sanguíneo primário por ser submetido à neovascularização induzida por isquemia. Vários autores têm estudado esse princípio fundamental para otimizar a sobrevida do retalho em modelos pré-clínicos e clínicos 8,9,10.
A vantagem desta técnica sobre outros métodos para melhorar a sobrevida do retalho é a sua facilidade de execução, consistindo em testes de pinça/declamp da fonte sanguínea. No modelo de ratos, autores anteriores utilizaram o retalho da artéria epigástrica superficial inferior (SIEA) para estudar a I.P. por meio do pinçamento do pedículo principal11,12,13. No entanto, vários problemas técnicos podem ser encontrados com esse modelo, e a literatura carece de protocolos bem descritos.
Portanto, este trabalho tem como objetivo fornecer aos pesquisadores uma descrição detalhada de uma técnica de captação de retalhos SIEA de ratos com dissecção ampliada dos vasos femorais para permitir estudos intravenosos em um modelo de retalho fáscio-cutâneo axial. Esse modelo mantém a integridade dos vasos epigástricos e manipula os vasos femorais, que são mais resistentes. Compartilhamos nossa experiência e ferramentas para aprimorar o estudo desse fenômeno e aumentar a replicabilidade desse procedimento.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este artigo descreve um modelo de retalho fasciocutâneo reprodutível colhido em ratos, permitindo a avaliação da I.P. Este protocolo cirúrgico passo a passo fornece aos grupos de pesquisa um modelo confiável para testar diferentes regimes de IP. Ao impedir qualquer vascularização que não seja o pedículo, esse modelo permite estudar a neovascularização do retalho a partir do leito e margem da ferida. Este estudo realizou a ligadura no DPO5, pois estudos prévios observaram a autonomização deste retalho em ra…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo Massachusetts General Hospital (W.G.A) e Shriners Children’s Boston (B.U, K.U, C.L.C). Y.B e I.F.v.R são financiados pelo Shriners Hospitals for Children (ID da proposta: #970280 e #857829 respectivamente).
Materials
| 1 mL Syringe Luer-Lok Tip | BD | 309628 | |
| 3-0 Ethilon 18” Black Monofilament Nylon suture | Ethicon | ETH-663H | |
| 8-0 Ethilon 12” Black Monofilament Nylon suture | Ethicon | 1716G | |
| Adson Atraumatic Forceps | Aesculap Surgical Instruments | BD51R | |
| Akorn Fluorescein Injection USP 10% Single Dose Vial 5 mL | Akorn | 17478025310 | |
| Betadine Solution 5% Povidone-Iodine Antiseptic Microbicide | PBS Animal Health | 11205 | |
| Bipolar Cords | ASSI | ASSI.ATK26426 | |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection | PAR Pharmaceutical | 3003406C | This concentration needs to be diluted for rodents. |
| Depilatory product – Nair Hair remover lotion | Nair | NC0132811 | |
| Ear tag applier | World Precision Instruments | NC0038715 | |
| Gauze Sponges | Curity | 6939 | |
| Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine | E-Z Systems | EZ-190F | |
| Isoflurane, USP | Patterson Veterinary | 1403-704-06 | |
| Jewelers Bipolar Forceps Non-Stick 11 cm, straight pointed tip, 0.25 mm tip diameter | ASSI | ASSI.BPNS11223 | |
| Lone Star elastic stays | Cooper Surgical | 3311-1G | |
| Lone star Self-retaining retractor | Cooper Surgical | 3304G | |
| Metronidazole tablets USP | Teva | 500111-333-06 | |
| Micro spring handle scissors | AROSurgical | 11.603.14 | |
| Microscope (surgical) | Leica | M525 F40 | |
| Microsurgical clamp applying forceps | Ambler Surgical | 31-906 | |
| Microsurgical clamps (x2) | Millennium Surgical | 18-B1V | |
| Microsurgical Dumont #4 forceps | Dumont Swiss made | 1708-4TM-PO | |
| Microsurgical needle holder | ASSI | B-14-8 | |
| Needle holder | World Precision Instruments | 501246 | |
| Nosecone for Anesthesia | World Precision Instruments | EZ-112 | |
| Pixel analysis software | GNU Image Manipulation Program v2.10 | GIMP | GNU Open licence |
| PrecisionGlide Needle 27 G | BD | 305109 | |
| Ragnell Scissors | Roboz Surgical | RS-6015 | |
| Rimadyl (carprofen) | Zoetis | 10000319 | This concentration needs to be diluted for rodents |
| Scientific Elizabethan collar (e-collar) for Rats | Braintree Scientific | NC9263311 | |
| Small animal ear tag | National Band & Tag Company | Style 1005-1 | |
| Small Animal Heated Operating Table (Adjustable) | Peco Services Ltd | 69023 | |
| Sterile towel drape | Dynarex Corporation | 4410 | |
| Sterile water for injection and irrigation | Hospira | 0409488724-1 | |
| Surgical scrub – BD ChloraPrep Hi-Lite Orange 3 mL applicator with Sterile Solution | BD | 930415 | |
| UV lamp | UVP | UVL-56 | |
| Webcol Alcohol prep pads | Simply Medical | 5110 |
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