2',7'-ジクロロジドロフルオレセイン・ジアセテート染色による接着性細胞中の全活性酸素種の検出

生理的意味を持つ細胞代謝によって産生される3つの主要な活性酸素種(ROS)は、スーパーオキシドアニオン、ヒドロキシルラジカル、及び過酸化水素¹である。低濃度では、それらは生理学的細胞プロセスに関与するが、高濃度では細胞シグナル伝達経路¹に悪影響を及ぼす。私たちの体は、過剰なROSに対して有効である抗酸化システムを開発しました。しかし、酸化ストレスは、炎症、癌、および神経変性疾患^,,2、3、4を含む多くの病的状態に寄与する、ROSが私たちの体の解毒能力を圧倒²するときに発生する可能性^{があります}。この方法の目的は、2′,7′-ジクロロジヒドロフルオレセインジアセインジアセテート(DCFH-DA)染色を使用して、接着細胞における総細胞ROSを決定することです。その根拠は、DCFH-DAから2′-7’ジクロロフルオレセイン(DCF)への酸化が、ヒドロキシルラジカル(•OH)および二酸化窒素(•NO₂₎を含む総ROS検出のために広く使用されてきたということです。機械学的に、DCFH-DAは、細胞エステラーゼがアセチル基を切断する細胞によって取り込まれるため、DCFHが得られます。ROSによるDCFHの酸化は、分子をDCFに変換し、励起波長485nmで緑色蛍光を放出し、発光波長は530nmです。フローサイトメトリーと他の代替方法⁵で蛍光の検出と比較すると、この方法の利点は、蛍光顕微鏡とプレートリーダーを用いて、それが明確に目に見える蛍光画像を生成し、かつ、効率的かつ費用対効果が高く、実行が容易である。この方法は、様々^,な条件^6、7、87を研究⁶するための細胞ROSを検出するために広く使用されている。⁸このプロトコルは、接着細胞の総ROSを検出するために使用されます。この方法を使用して懸濁液細胞のROSを検出するには、いくつかの変更が必要な場合があります。