실제 세계에서 인간 Circadian 현상형 및 일주 성능 테스트

여기에 설명된 모든 방법은 버밍엄 대학 연구 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 1. 참가자 선별 및 실험 설계 헬싱키 선언에 따라 적절한 윤리적 승인에 따라 모든 방법을 수행하고 참여하기 전에 모든 참가자의 서면 동의를 얻습니다. 수면, 신경 학 또는 정신 장애의 사전 진단없이 참가자를 모집, 수면에 영향을 미치는 약물을 복용하지 않고, 멜라토닌 이나 코티솔 리듬. 교대 근무자가 아니고, 참가자가 지난 달 에 두 개 이상의 시간대를 여행하지 않았는지 확인하고 연구에 자유롭게 참여할 수 있습니다 (즉, 액티워치 착용에 전념할 수 있고, ‘자유로운 날’에 타액 샘플을 제공하고 특정 시간에 성능 테스트를 위해 참석하십시오 (섹션 2.1 참조). 포함 기준을 통과한 참가자를 초대하여 초기 설정 회의에 참석하여 동의를 얻고, 설문지 데이터를 수집하고, 집에서 타액 샘플을 수집하는 교육을 받고, 액티그래픽 장치및 수면 일기로 설정하도록 초대합니다. 이 회의에서 참가자들에게 생리학적 샘플링 프로토콜을 숙지하여 필요한 것이 무엇인지 이해하도록 합니다(섹션 3 참조). 참가자들에게 수면/각성 변수의 개인차이와 업무 및 자유일3일에대한 빛의 노출을 평가하는 뮌헨 크로노타입 설문지(MCTQ)를 작성하도록 요청합니다. 이를 통해 크로노타입의 마커로 사용되는 자유 일(MSFsc)에서수정된 중간 수면 시간을 계산할 수 있습니다. 2. 액티그래피 및 수면 일기 적어도 2 주동안 19 (연구 목표에 따라 더 긴 기간이 될 수 있습니다), 참가자들에게 손목 활동 모니터 또는 ‘actigraph’를 착용하고, 휴식 / 활동 패턴을 수집하고, 연구 기간 동안 빛 (1-32,000 럭스) 데이터를 수집하도록 요청하십시오. 각 참가자에게 목욕/샤워(방수가 아님)를 제거하고 가벼운 데이터를 수집할 수 있도록 소매를 덮는 것을 방지하는 등 액티그래프 사용 방법에 대한 세부 정보를 제공합니다. 비지배적인 손목에 액티그래프를 착용해야 합니다. 액티그래피와 함께 액티그래피 데이터에서 파생된 수면/각성 분석을 용이하게 하기 위해 각 참가자에게 매일 수면 일기를 제공합니다. 취침 시간, 수면 시간, 야간 각성, 기상 시간, 수면 의 질, 낮잠 및 액티그래프가 제거된 시간을 포함한 질문이 있는지 확인합니다. 필요한 것에 따라 매개 변수를 etting 나머지 / 활동 분석을위한 행동 데이터를 수집 (이 연구는 30Hz 샘플링 주파수 및 중간 감도 설정을 사용). 매일 취침 시간에 대한 세부 정보를 추출하고 수면 일기와 제조업체의 소프트웨어 또는 대안에 대한 입력(예: 연구와 관련된 액티그래픽 변수를 얻기 위해 오픈 소스 유효성을 검사한 코드)에 대한 입력을 얻을 수 있습니다. 3. 생리샘플링 폴리프로필렌 수집 튜브 또는 살리벳에 라벨을 붙임으로써 샘플링 팩을 미리 준비합니다(이 연구에서 는 7 mL 플라스틱 비쥬사용). 참가자 ID 번호, 아침 또는 저녁 및 개별 샘플링 번호로 튜브에 레이블을 지정합니다. 실수시 사용할 ‘여분의’ 튜브를 포함합니다. 참가자들이 샘플을 채취할 때 타임스탬프를 찍을 수 있도록 아침 및 저녁 프로토콜에 대한 샘플 수집 레코드 시트를 준비합니다(예: 아침 샘플 1, 촬영 시간 = hh:mm, 아침 샘플 2, 촬영 시간 = hh:mm). 참가자 ID 번호, 계절 정보 날짜 및 포토 기간 계산 위치를 포함합니다.참고: 군사 시간을 사용하여 AM/PM에 문제가 없도록 하는 것이 중요합니다. 아침과 저녁 샘플링 튜브에 대한 다른 컬러 라벨을 사용하여 샘플을 구별할 수도 있습니다. 참가자들에게 가정/직장 환경에서 타액 샘플을 채취하는 방법을 훈련하는 동안 생리샘플링 및 미리 만들어진 팩에 대한 관련 프로토콜을 제공합니다. 참가자가 잠자리에 들고 원하는 시간에 깨어날 수 있는 자유일에 샘플을 수집해야 함을 참가자에게 알립니다(예: 알람 없이). DLMO의 신뢰할 수 있는 계산을 보장하기 위해 참가자는 습관적인 취침 시간을 지나 깨어 있어야 하기 때문에 성능 테스트 전날 저녁 타액 샘플링 프로토콜을 수행해서는 안 됩니다. 참가자들에게 타액 샘플을 주기로 결심할 수 있을 때 연구 2주 동안 아침과 저녁(같은 날)을 할당해 달라고 한다. 참가자들에게 아침 샘플을 수집하고 같은 날 저녁 샘플을 채취하도록 권고합니다.참고 : 샘플링 순서 (아침 다음 저녁) 수면 타이밍의 변화가 결과에 영향을 미치지 않도록해야합니다 (저녁 샘플이 먼저 습관적 인 취침 시간을 지나 깨어 있어야하는 경우, 이것은 다음 날 찍은 경우 아침 샘플에 영향을 미칠 수 있습니다). 코티솔 각성 응답을 위한 아침 샘플링 프로토콜 타액 샘플이 첫 번째 웨이크 업 (침대에 있는 동안) 첫 번째 1 5 분마다 다음 1 ~ 2 시간 동안 30 분마다 수집되도록하십시오. 이 기간 동안 참가자는 알코올 음료, 인공 색소가 들어있는 음료 및 테스트 기간 동안 음료를 삼가고 샘플링 기간 동안 치약유무에 관계없이 치아 를 닦지 않도록하십시오. 모든 샘플이 제공되면, 참가자가 연구팀에 의해 수집 될 때까지 -20 °C에서 자신의 냉장고에 자신의 샘플을 저장해야합니다.참고 : 가능한 경우 냉동 샘플을 저장하는 것이 가장 좋지만 다음 날 수집 될 때까지 냉장고에 보관하면 실행 가능한 상태로 유지됩니다. 2004년 인간 조직법(HTA)에 따라 분석 수행 기관에서 HTA 라이선스를 보유하지 않는 한 샘플을 수집하여 수집한 후 7일 이내에 수집하여 세포가 렌더링되어야 합니다. 희미한 빛 멜라토닌 개시를 위한 저녁 샘플링 프로토콜 타액 샘플은 습관적인 취침 후 1-2 시간까지 습관적인 취침 시간 전에 3-4 시간마다 30 분마다 수집되도록하십시오 (예 : 습관적 취침 시간이 22:00 시간인 경우 참가자는 18:00 /19:00h에서 23:00/00:00h까지 시작됩니다). 적절하게 라벨이 붙은 바이알에 침을 뱉어 타액 샘플을 수집합니다 (1 번부터 2, 3 등으로 시작). 이 기간 동안, 참가자는 습관적인 취침 전 6 시간 (예 : 차, 커피, 코카콜라)에서 카페인이 함유 된 음료 (예 : 습관적 인 취침 시간이 22:00 시간인 경우, 카페인 섭취는 수집 당일 16:00 h)에 중단해야합니다. 참가자가 희미한 빛에 실내에 앉아 있는지 확인하십시오 (예를 들어, 단일 테이블 램프가 바람직하게는 빨간 불빛, 실내 의 반대편에, 오버 헤드 조명, 전자 스크린, 커튼이 닫혀 있지 않습니다). 참가자는 알코올이나 인공 색소가 함유 된 음료를 마시지 않도록하고 샘플링 기간 동안 치약유무에 관계없이 치아를 닦지 마십시오. 참가자가 뭔가를 먹고 싶은 경우, 화장실에 가거나 비 카페인 음료를 만들기, 그들은 샘플의 수집 후 즉시 그렇게하고 다음 샘플이 수집 될 예정되기 전에 15 분 동안 다시 앉아하려고합니다. 시료 사이에 음식이 소비되는 경우, 참가자들이 다음 시료를 채집하기 15분 전에 물로 입을 씻어내도록 하십시오. 참가자가 샘플링 기간 동안 희미한 빛 (바람직하게는 빨간색 빛)에 남아 있도록 다른 모든 객실이 동일한 조명 조건을 가지고 있는지 확인하십시오. 모든 샘플이 제공되면, 참가자가 연구팀에 의해 수집 될 때까지 -20 °C에서 자신의 냉장고에 자신의 샘플을 저장해야합니다.참고: 참가자가 희미한 조명 프로토콜을 준수하는 것이 중요합니다. 가능한 경우, 연구원은 강도와 스펙트럼 조성을 모니터링하기 위해 조명 조건을 측정해야합니다. 4. 방사선 면역 분석 각 시점에서 상대 농도를 결정 하기 위해 인간의 타 액에서 멜 라 토 닌과 코 티 솔의 RIA 또는 ELISA를 수행.참고 : 이러한 대표적인 결과의 절차는 요오드(125I) 방사성 라벨 추적자 및 고체 상 분리와 RIA를 사용했다. 이 프로토콜은 영국 서리 대학, 연대기 학 연구소에서 일상적으로 사용된다20. 멜라토닌 농도가 세 가지 기준 측정값(처음 세 개의 샘플)의 두 가지 표준 편차를 초과하는 시점으로 개별 DMO를 계산합니다.참고: 이 방법은 고정 속도 농도14를사용하는 것과 비교하여 개별 기준선 차이를 조정합니다. 다른 방법은 샘플링에 사용되는 시간에 따라 사용될 수 있다(예를 들어, 전체 프로파일14에대해 24시간 동안). 코티솔 피크를 아침 코티솔 각성 반응 중에 기록된 가장 높은 코티솔 농도의 시간으로 계산합니다. 5. 일주 성능 테스트 참고 : 이 프로토콜에 사용된 조치는 정신 운동 경계 작업 (PVT)21,그리고 카롤린스카 졸음 척도 (KSS)22입니다. 그러나, 다른 테스트는 연구의 목적에 따라 동일한 디자인을 유지 하는 데 사용할 수 있습니다 (예를 들어, 연구 작업 메모리에 circadian 표현형의 영향을 조사 하는 경우, 메모리 작업이 필요 합니다). 참가자들에게 테스트 전 일주일 동안 적어도 한 번(작업에 따라) 연습 시험을 수행하여 설정에 익숙해지도록 요청한다.참고: 연습 시험은 모니터링하는 경우 원격으로 수행할 수 있습니다. 연습 테스트의 수는 연구에서 사용되는 작업에 따라 조정되어야 합니다. 예를 들어, 보다 복잡한 집행 기능 작업은 더 간단한 작업에 비해 고원에 도달하기 위해 여러 가지 연습 테스트가 필요할 수 있습니다. 특정 시계 시간에 조사되는 시간 포인트의 수에 따라 연구 가설에 따라 테스트 세션을 정렬합니다.참고: 연구 설계에 따라 가정이나 실험실에서 성능 테스트를 수행할 수 있습니다. 프로토콜의 시간에 민감한 특성으로 인해 가정 환경에서 성능 테스트가 수행되는 경우 참가자가 스스로 수행하고 시간과 날짜가 스탬프가 찍히는지 확인하기 위해 규정 준수를 모니터링해야 합니다. 관련 장치에서 테스트를 수행합니다(이 연구는 DQ67OW, i7-2600 프로세서, 4GB RAM, 표준 키보드 및 마우스가 있는 32비트 데스크톱을 사용했습니다).참고: 랩톱, iPad 또는 기타 장치를 테스트하는 데 필요한 경우 마우스와 트랙 패드 대 터치 스크린의 응답에 대한 잠재적 인 가변성으로 인해 모든 참가자와 각 테스트 세션 전반에 걸쳐 동일한 장치 및 설정이 사용되었는지 확인하십시오. 6. 분석 수집된 5가지 변수에 대한 값에 기초하여 circadian 표현형 그룹을 분류한다: MSFsc,웨이크업 시간, 코티솔 각성의 피크 시간, DLMO 및 수면 개시(컷오프는 표 1에 주어진다). 각 참가자에 대해 변수당 점수를 할당합니다. 변수는 ECP 범주에 있는 경우 0, ICP 범주에 있는 경우 1, LCP 범주에 있는 경우 2가 할당됩니다. 예를 들어 참가자가 모든 변수에 대한 LCP 범주에 있는 경우 10점의 점수를 누적합니다. 0-10의 총 점수 중 참가자는 EMP (0-3), IIP (4-6) 및 Lcp (7-10)로 참가자를 식별합니다. 총 점수에서 circadian 표현형의 하위 범주는 다음과 같이 결정될 수 있습니다: 0 = 극단적인 ECP, 1 = 명확한 ECP, 2 = 보통 ECP, 3 = 온화한 ECP, 4 = 초기 ICP, 5 = ICP, 6 = 후기 ICP, 7 = 경증 LCP, 8 = 보통 LCP, 9 = 명확한.참고: 통계 분석은 개별 연구에 대한 연구 질문에 기초하여 결정되어야 합니다. 데이터가 정규 분포를 따르지 않는 경우 비파라메트릭 테스트를 사용해야 합니다. 시간 효과 의 시간을 결정 하기 위해 사후 hoc 테스트를 실행 해야 합니다. 여러 파라미터를 측정할 때 여러 비교를 추가로 수정해야 합니다(예: p-값의 FDR 보정).