यह प्रोटोकॉल 7 दिन पुराने चूहों में नवजात पूति की स्थापना और मूल्यांकन करने के लिए आवश्यक कदम प्रदान करता है ।
नवजात पूति एक वैश्विक बोझ बना हुआ है । प्रभावी नियत्रंण या चिकित्सीय हस्तक्षेप स्क्रीन करने के लिए एक नैदानिक मॉडल की जरूरत है । नवजात माउस polymicrobial पूति जीवन के दिन 7 चूहों में cecal घोल intraperitoneally इंजेक्शन द्वारा प्रेरित किया जा सकता है और उन्हें अगले सप्ताह के लिए निगरानी. यहां प्रस्तुत विस्तृत इस नवजात पूति मॉडल के कार्यांवयन के लिए आवश्यक कदम उठाए हैं । यह एक सजातीय cecal घोल स्टॉक बनाने शामिल है, यह एक वजन के लिए कमजोर और कूड़े-खुराक समायोजित, निगरानी अनुसूची की एक रूपरेखा, और मनाया स्वास्थ्य के लिए मानव अंतिमबिंदु परिभाषित इस्तेमाल श्रेणियों की एक परिभाषा । एक सजातीय cecal घोल की पीढ़ी परित दानदाताओं से कई कूड़े में प्रशासन के लिए समय पर अनुमति देता है, दाताओं के बीच भिंनता को कम करने, और संभावित विषाक्त ग्लिसरॉल के उपयोग को रोकने । निगरानी की रणनीति का इस्तेमाल अस्तित्व के परिणाम की प्रत्याशा के लिए अनुमति देता है और चूहों की पहचान है कि बाद में मौत की प्रगति, मानव समापन बिंदु की एक पूर्व पहचान के लिए अनुमति देगा । दो मुख्य व्यवहार सुविधाओं के लिए स्वास्थ्य स्कोर को परिभाषित किया जाता है, अर्थात्, नवजात चूहे की क्षमता को सही खुद को जब उनकी पीठ पर रखा और गतिशीलता के अपने स्तर पर । इन मानदंडों संभावित चूहों में नवजात रोग के अन्य अध्ययनों में मानवीय अंतिमबिंदु पता करने के लिए लागू किया जा सकता है, जब तक एक पायलट अध्ययन सटीकता की पुष्टि करने के लिए किया जाता है. अंत में, इस दृष्टिकोण को चूहों में मॉडल नवजात पूति के लिए एक मानकीकृत विधि प्रदान करता है, जबकि पशुओं को चुनौती दी जानवरों के लिए जल्दी मानवीय अंतिमबिंदु परिभाषित करने के लिए इस्तेमाल किया कल्याण का आकलन करने के लिए संसाधनों प्रदान ।
पूति मानव नवजात संक्रामक मौतों का एक प्रमुख कारण है1. क्योंकि नवजात पूति खराब समझ है, कम प्रगति में जोखिम नवजात शिशुओं की पहचान में किया गया है जल्दी रोग और प्रभावोत्पादक उपचार या prophylaxes के विकास के दौरान । इस प्रक्रिया को बेहतर ढंग से समझने और संभव उपायों का परीक्षण करने के लिए पूति के पशु मॉडलों का उपयोग आवश्यक । इसके अलावा, वयस्क कुतर पूति को अलग तरह से जवाब, बैक्टीरिया की संख्या में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर के साथ एक ही घातक खुराक (LD) और परिणामी मेजबान प्रतिक्रिया में अंतर प्राप्त करने के लिए प्रशासन के रूप में नवजात शिशुओं की तुलना में2. इस प्रकार नवजात शिशुओं में नवजात पूति का अध्ययन किया जाना है । पूति रिसर्च में कई एडल्ट पूति मॉडल्स का इस्तेमाल किया गया है । ये वयस्क मानव पूति या cecal बंधाव और पंचर (CLP) में फंसा विशिष्ट जीवों के साथ एक नसों में चुनौती शामिल हैं । CLP एक अंतर्जात चुनौती मॉडल है जहां अंधान्त्र शल्य चिकित्सा पृथक है, ligated, और के लिए, अंततः रोगाणुओं और उनके उत्पादों के प्रणालीगत प्रसार के लिए अग्रणी में आंतों सामग्री के रिसाव की अनुमति पंचर । हालांकि, शल्य चिकित्सा CLP स्थापित करने के लिए आवश्यक प्रक्रिया नवजात जानवरों के लिए घातक है; इसलिए, एक वैकल्पिक विधि CLP के polymicrobial चुनौती नवजात पूति प्रेरित करने के लिए नकल करने के लिए आवश्यक है । नवजात polymicrobial पूति के लिए cecal गारा मॉडल इस जरूरत को संबोधित करने के लिए विकसित किया गया था, जिससे जानवरों की cecal सामग्री काटा जाता है, पानी में बाँझ डेक्सट्रोज 5% में निलंबित (D5W), और intraperitoneally नवजात चूहों में इंजेक्शन2. यह है, के बाद से, दोनों नवजात और वयस्क पशुओं में पूति का अध्ययन करने के लिए एक तेजी से लोकप्रिय मॉडल बन गया है और रोग की प्रक्रिया में काफी उन्नत यंत्रवत अंतर्दृष्टि4,5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15।
इस मॉडल और शोधकर्ताओं की इच्छा के बढ़ते उपयोग को देखते हुए सीधे प्रकाशनों भर में परिणाम की तुलना, वहां तकनीकी पहलुओं के लिए एक की जरूरत है अच्छी तरह से वर्णित है और अध्ययन के पार मानकीकृत । मानकीकरण मॉडल के तीन पहलुओं पर लागू होता है, अर्थात्, i) cecal घोल स्टॉक की तैयारी, ii) प्रायोगिक पशुओं में इंजेक्शन के लिए चुनौती aliquots की तैयारी, और iii) मानव समापन बिंदु की परिभाषा जिससे जानवरों चुनौती प्रयोगों में जीवित बचे समझी जाती हैं. विशेष रूप से, तरीके cecal घोल स्टॉक तैयार करने के लिए अक्सर मूल मॉडल2शुरू लेख को संदर्भित कर रहे हैं । कि मॉडल का एक संक्षिप्त सारांश यह है कि वयस्क चूहों से cecal सामग्री काटा गया, बाँझ D5W में ८० मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता के लिए निलंबित कर दिया, और 2 के भीतर इस्तेमाल किया प्रायोगिक पशुओं इंजेक्षन करने के लिए एच । इस मूल मॉडल एक ही उंर के चूहों का इस्तेमाल किया, एक ही विक्रेता स्थान है, जो अपने अनुसंधान सुविधाओं में से कम 2 सप्ताह के लिए cecal सामग्री संचयन से पहले के लिए स्थित थे से । घर में चूहों नस्ल का उपयोग करते हैं, हालांकि नियमित रूप से विक्रेता के वितरण से लागत को कम करने और सेक्स और उंर की एक व्यापक रेंज के अतिरिक्त चूहों के उपयोग के लिए अनुमति देता है, भी काफी बढ़ दाता को दाता परिवर्तनशीलता । यह एक वैकल्पिक तकनीक के विकास के लिए प्रेरित किया, जिससे कई चूहों से cecal सामग्री एक साथ परित थे एक बड़े भंडार है, जो तब aliquoted और पर संग्रहित-८० डिग्री सेल्सियस13तैयार थे । इस वैकल्पिक विधि कई समूहों द्वारा अनुकूलित किया गया था14,15. हालांकि, कि अनुकूलन कुछ तकनीकी बदलाव के परिणामस्वरूप, दोनों भंडारण मीडिया में इस्तेमाल किया (10% या 15% ग्लिसरॉल, या अकेले D5W) और निस्पंदन की रणनीति में कण को हटाने के लिए (एक ८६० µm के माध्यम से multistage निस्पंदन और, तो, एक १९० µm फ़िल्टर, या व्यक्तिगत १०० µm या ७० µm फिल्टर के माध्यम से निस्पंदन)13,14,15. अकेले ग्लिसरॉल के इंजेक्शन संभावित नुकसान का कारण हो सकता है, यह देखते हुए कि 25%-५०% ग्लिसरॉल इंजेक्शन गुर्दे की चोट का एक कुतर मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया है16,17,18,19, 20। ग्लिसरॉल के अवांछित दुष्प्रभाव से बचने के लिए, इस अध्ययन में चूहों के लिए cecal घोल स्टॉक तैयारी ग्लिसरॉल बिना D5W में जम जाता है, और-८० डिग्री सेल्सियस पर भंडारण से बैक्टीरियल व्यवहार्यता का परीक्षण किया जाता है । इस अध्ययन में इस्तेमाल किया निस्पंदन रणनीति सूचीबद्ध अन्य निस्पंदन रणनीतियों की तुलना में सीधे नहीं किया गया है, जो एक ७० µm फिल्टर, के माध्यम से एक पास है ।
घातक वजन-इंजेक्शन cecal घोल की खुराक समायोजित सुविधा से सुविधा के लिए भिन्न हो सकते हैं और व्यक्तिगत समूहों के लिए वांछित घातकता के लिए बाहर titered किया जाना चाहिए. अलग चुनौती खुराक के साथ, आवश्यकता के साथ चुनौती संस्करणों में परिवर्तन. हालांकि, इस methodological विस्तार से पहले रिपोर्ट नहीं की गई है । इसके अलावा, intraperitoneal इंजेक्शन के रूप में मानक प्रक्रियाओं, के लिए रणनीतियों, शायद ही कभी साहित्य के भीतर पर सविस्तार हैं, लेकिन व्यक्तिगत तकनीक को प्रभावित कर सकता है कि नवजात चूहों रिसाव जब इंजेक्शन और उनके अंतिम परिणाम प्रभाव ।
मानव समापन बिंदु की एक परिभाषा सहित पशु कल्याण, इस मॉडल का एक केंद्रीय पहलू और21कुतर में संक्रमण और सूजन के किसी भी मॉडल में है । १९९८ में, कनाडा के पशु देखभाल पर परिषद (CCAC) मानव समापन बिंदु चयन के लिए व्यापक दिशानिर्देश प्रकाशित, “किसी भी वास्तविक या संभावित दर्द, संकट, या असुविधा के रूप में मानव समापन बिंदु को परिभाषित किया जाना चाहिए कम या ज्यादा से जल्द से कम समापन बिंदु है कि अनुसंधान के वैज्ञानिक उद्देश्यों के साथ संगत है “22। दूसरों को भी चेतावनी है कि मानव अंतिमबिंदु वैज्ञानिक औचित्य के आधार पर स्थापित किया जाना चाहिए बजाय21अकेले पशु राज्य की एक व्यक्तिपरक व्याख्या पर । जबकि वहां नैदानिक, व्यवहार के लिए संसाधनों का खजाना है, और मानव समापन बिंदु के लिए शरीर की स्थिति पर हस्ताक्षर आधारित मानदंडों, यहां तक कि संक्रमण और सूजन के संदर्भ में विशेष रूप से21,23,24, इनमें से कोई नहीं , मानव समापन बिंदु22के लिए CCAC दिशानिर्देश सहित, नवजात चूहों का उल्लेख । इस प्रकार, होना चाहए और वैज्ञानिक रूप से न्यायोचित मानव अंतिमबिंदु है और अधिक कठिन नवजात जानवरों के लिए स्थापित करने के लिए, दोनों अपने सीमित व्यवहार क्षमताओं और वजन घटाने, जो आमतौर पर वयस्क के लिए इस्तेमाल किया जाता है जैसे मानदंडों से सबूत की कमी को देखते हुए चूहों. वर्तमान में, मानव समापन बिंदु के लिए मानदंड 5 के लिए इस्तेमाल किया cecal घोल साहित्य में 12 दिन पुराने नवजात चूहे सभी मूल पांडुलिपि है कि मॉडल2शुरू करने के लिए वापस संदर्भ । इस मूल पत्र में, नवजात पशुओं के लिए मानव समापन बिंदु की परिभाषा दो मानदंडों पर आधारित थी; अर्थात्, घोंसला के बाहर एक चूहे का स्थान (कैटरिंग) और दूध के धब्बे की कमी के कारण घंटों के भीतर मौत का परिणाम देखा गया था । एक मानवीय समापन बिंदु निर्दिष्ट करने में एक उलझी बात यह है कि दूध स्पॉट ऐसे आमतौर पर कार्यरत C57BL/6J तनाव के रूप में अंधेरे फर, जीवन के पहले सप्ताह के बाद के रूप में, जबकि बीमार पशुओं को जीवन के 14 दिन (राजभाषा) तक नजर रखी है के साथ माउस उपभेदों में देखना मुश्किल हो गया है । इसके अलावा, मृत जानवरों postchallenge पाया जा सकता है जब इन मानदंडों को लागू (स्वयं अवलोकन; अप्रकाशित); इस प्रकार, मानव समापन बिंदु की एक और अधिक कठोर परिभाषा प्रयोगात्मक पशुओं को पीड़ित को कम करने और स्थितियों में मृत्यु दर से बचने के लिए आवश्यक है, जहां परिणाम सही पहले समझदार हो सकता है ।
cecal घोल मॉडल के सभी तीन methodological पहलुओं एक मानक ऑपरेटिंग cecal घोल स्टॉक की तैयारी का ब्यौरा प्रक्रिया में प्रस्तुत कर रहे हैं, प्रयोगात्मक जानवरों है कि खुराक के बीच लगातार इंजेक्शन की मात्रा रहता है और इंजेक्शन के लिए एक विधि लीक के जोखिम को कम कर देता है, और 7 के लिए मानव समापन बिंदु की परिभाषा-दिन-पुराने चूहों व्यवहार मॉडलिंग की एक प्रणाली पर आधारित है । २४० से अधिक प्रयोगात्मक पशुओं से माउस स्वास्थ्य स्कोर के व्यवहार की जानकारी एकत्र की और अंतिम अस्तित्व के परिणाम द्वारा समूहीकृत किया गया था, एक सबूत के प्रदर्शन मानव समापन बिंदु की परिभाषा संचालित । प्रयोगात्मक पशुओं की पीड़ा से कम से जल्द संभव समय बिंदु पर मरणासन्न नवजात चूहों की पहचान, जबकि जैविक रूप से महत्वपूर्ण अस्तित्व के परिणामों के प्रमुख चर देख द्वारा आस्थगित किया जा सकता है । दोनों cecal घोल तैयारी और नवजात माउस व्यवहार के दृश्य प्रतिनिधित्व किसी भी समूह पूति या नवजात चुनौती मॉडल जानवरों का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट संसाधन के रूप में काम करेंगे ।
जन्मोत्तर नवजात चूहों बहुत सीमित गतिशीलता है और सही खुद को विफल करने के बाद अपनी पीठ पर रखा जा रहा है, यहां तक कि जब चुनौती दी । 7 डॉल द्वारा, चूहों की आयु इस मॉडल में चुनौती दी गई, अधिकारों से फैले आंदोलन की एक सीमा-मोबाइल FTR-मोबाइल को चुनौती दी चूहों में मनाया गया था, एक महत्वपूर्ण अंतर के साथ, अर्थात् है कि इस उंर में एक चुनौती माउस FTR सुस्त व्यवहार प्रदर्शित नहीं किया । केवल polymicrobial पूति के साथ चुनौती दी चूहों FTR सुस्त बन मनाया गया; इसलिए, इस प्रतिक्रिया रोग गंभीरता का एक मार्कर हो सकता है । हिप आंदोलन के लिए क्षैतिज से एक ९० ° कोण के कटऑफ के लिए चौकस होने के नाते चूहों में सुस्ती या मोबाइल हिप आंदोलन के अनुरूप और सही काम के लिए अनुमति देता है. 4 एस की समय सीमा को देखने के लिए अगर एक माउस सही खुद को चुना गया था क्योंकि चुनौती चूहों को लगातार इस समय सीमा के भीतर खुद को सही कर रहे थे । एक ही माउस का दोहराया माप बचा लिया गया था, जबकि समय के लिए सही खुद को और हिप गतिशीलता की माप 4 एस करने के लिए सीमित था, जरूरत से ज्यादा माउस, जो अंयथा अपने भोजन और गर्मी प्राप्त करने के लिए अपनी क्षमता को प्रभावित कर सकता से बचने के लिए और अपने को प्रभावित कर सकता रोग का निदान बेहतर हो । लेकन खुद को छोड़ दिया और दाईं ओर दोनों से मनाया गया, और स्कोर के उच्च अगर माउस एक मानव समापन बिंदु पर था यह निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, क्योंकि कुछ चूहों FTR-गैर-मोबाइल एक तरफ अभी तक प्रदर्शित करने के लिए पाया गया था दूसरी तरफ और बी एक उच्च गतिशीलता है ई अंततः ठीक करने में सक्षम ।
स्कोरिंग प्रणाली को माउस स्वास्थ्य का मूल्यांकन करने के लिए क्या आंदोलन की एक स्पेक्ट्रम है और इसलिए, व्यक्तिगत पूर्वाग्रह से ग्रस्त हो सकता है के लिए स्पष्ट कटऑफ के आवेदन पर भरोसा करते थे । कर्मचारियों को एक साथ प्रशिक्षित किया गया था सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक व्यक्ति एक ही चूहे बनाए; हालांकि, वहां की संभावना भिंनता के लिए अग्रणी मनोवाद के एक स्तर रहेगा । स्कोरिंग की निरंतरता सात शोधकर्ताओं जो पहले नवजात माउस की निगरानी प्रदर्शन नहीं किया था द्वारा मूल्यांकन किया गया इस प्रोटोकॉल और वीडियो में उल्लिखित आवश्यकताओं को जानने के लिए और, तो, स्वतंत्र रूप से व्यवहार असाइन करें और मानव निर्धारित समापन बिंदु. एक ९७% सटीकता ६० चुनौती दी चूहों पर प्रदर्शन स्कोरिंग के साथ मनाया गया था, सुझाव है कि व्यक्तिगत पूर्वाग्रह इस मॉडल के व्यवहार कार्य में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा नहीं है. प्रस्तुत व्यवहार निगरानी प्रोटोकॉल पर आधारित है जानवरों की टिप्पणियों पर चुनौती दी 7 राजभाषा, अभी तक एक चुनौती स्वस्थ राज्य में 6 दिनों से छोटे चूहे लगातार सही खुद नहीं कर सकते । इस प्रकार, वर्णित मानव समापन बिंदु मानदंड सीधे छोटे चूहों को लागू नहीं किया जा सकता है । यदि युवा चूहों इस प्रयोगात्मक मॉडल में उपयोग किया जाता है या अगर अलग रोग कैनेटीक्स के साथ एक अलग चुनौती मॉडल लागू है, तो उपयुक्त मानव समापन बिंदु मानदंड विकसित किया जाना चाहिए और चूहों कि अंयथा, अंततः होगा की इच्छामृत्यु से बचने के लिए प्रायोगिक तौर पर, पुनर्प्राप्त. स्कोरिंग प्रणाली मानव समापन बिंदु वर्गीकरण है कि, परीक्षण और पुष्टि के साथ, संभावित अंय मॉडलों के लिए लागू किया जा सकता है में सुधार लाने की एक मजबूत विधि प्रदर्शित करता है ।
cecal घोल की प्रत्येक तैयारी या एक नए माउस तनाव के उपयोग के लिए cecal घोल खुराक के retitration की आवश्यकता के लिए एक समान घातक खुराक प्राप्त करने के लिए प्रशासन । प्रत्येक तैयारी readout ब्याज की, अर्थात् जीवित रहने के बजाय एक ही जीवाणु गिनती देने के द्वारा मानकीकृत किया गया था । प्रत्येक cecal घोल तैयारी व्यवहार्य बैक्टीरियल एकाग्रता थोड़ा विविध, संभावित दाता खाना खानेवाला बैक्टीरिया में अंतर के कारण या वजन में विचरण के कारण cecal घोल स्टॉक postfiltration के सेल छलनी में छोड़ दिया । cecal घोल के अनुमापन के दौरान पहले दो कूड़े को दो समूहों में बांटा जाता था और कूड़े के प्रत्येक आधे हिस्से को दो खुराकों में से एक के साथ चुनौती दी जाती थी ताकि प्रत्येक खुराक का दो लिटर में परीक्षण किया जा सके । यदि परिणामस्वरूप जीवित रहने की दर अपेक्षित स्तर से मेल नहीं खाती है, तो चुनौती खुराक या तो बढ़ गया था या 5% से कम-10% और प्रयोग दोहराया । कई कूड़े के लिए कूड़े के लिए खाते में कूड़े मतभेद है कि प्रतिरोध या बढ़ संवेदनशीलता एक कूड़े के पार पूति के कारण हो सकता था । यह सुनिश्चित करने के लिए कि cecal घोल के नए अनुमापन पिछले cecal घोल तैयार करने के लिए तुलनीय था एक नई तैयारी के साथ cecal घोल स्टॉक titer सही करने के लिए महत्वपूर्ण था । अतिरिक्त शोर और कंपन की अवधि, विशेष रूप से डामर की कॉंपैक्ट के दौरान और एक पास के भवन और सड़क के निर्माण, बांधों में तनाव को बढ़ाने के लिए मनाया गया । यह cannibalization की वृद्धि की दर के साथ संबंधित है, और अस्तित्व के प्रयोगों की मृत्यु को प्रभावित किया, यहां तक कि चुनौती चूहों को प्रभावित करने, यह दर्शाता है कि नवजात अस्तित्व है कि भी के लिए नियंत्रित करने की आवश्यकता पर बाहरी प्रभावों हो सकता है.
cecal घोल स्टॉक तैयारी के लिए पहले तरीकों या तो ताजा cecal घोल या जमे हुए cecal घोल की तैयारी का उपयोग शामिल है, ग्लिसरॉल में भंडारण कि अनिवार्य रूप से चुनौती के दौरान स्थानांतरित किया जाएगा सहित तरीकों की एक किस्म का उपयोग कर । जबकि ताजा cecal घोल का उपयोग एक बैक्टीरियल मूल cecal सामग्री के निकटतम संरचना होने का लाभ प्रदान करता है, वहां खाना खानेवाला बैक्टीरिया की भिंनता के कारण व्यक्तिगत दाता चूहों के बीच विचरण का खतरा है । हालांकि इस प्रयोग के आगमन और प्रगति के बीच ंयूनतम समय के साथ एक ही विक्रेता से cecal दाताओं का उपयोग करके कम किया गया था, यह कुछ प्रयोगशालाओं के लिए एक लागत प्रतिबंधित विकल्प बन सकता है और एक और समय रसद चुनौती होने में प्रस्तुत उंर मिलान उपलब्ध चूहों जब नवजात चूहों में एक cecal घोल प्रयोग केसाथ कि 7 दिन पुराने थे । ताजा cecal घोल का उपयोग करने के लिए एक वैकल्पिक विधि का उपयोग किया गया था, जहां एकाधिक वयस्क दानदाताओं ‘ cecal सामग्री परित, D5W में resuspend थे, पर जमे हुए-८० डिग्री सेल्सियस ग्लिसरॉल के बिना, और एक समय में प्रयोग के लिए एक aliquot गल । वयस्क दाता cecal घोल का उपयोग नवजात पूति के अध्ययन के लिए संभावित cecal घोल में मौजूद बैक्टीरिया की प्रजातियों के हस्तांतरण सकता है कि नवजात माउस को उजागर नहीं किया गया है, लेकिन यह एक रणनीति है कि नवजात चूहों में पूति के अध्ययन के लिए अनुमति देता है और पिछले13,14,15में नवजात माउस जीवविज्ञान अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । Cecal घोल D5W में पतला था बैक्टीरिया को पोषण प्रदान करने के लिए, जो एक सक्रिय संक्रमण की स्थापना की अनुमति दी एक बार जीवाणु इंजेक्शन थे, और पेरिटोनियल गुहा में नेक्रोटाइज़िंग के दौरान पोषक तत्वों की उपलब्धता की नकल करने के लिए किया गया था आंत्रशोथ. ग्लिसरॉल क्योंकि संभावित नकारात्मक पक्ष प्रभाव है कि अकेले ग्लिसरॉल इंजेक्शन से पैदा कर सकता ठंड बैक्टीरिया में एक स्थिर एजेंट के रूप में शामिल नहीं किया गया था । यदि ग्लिसरॉल cecal घोल तैयारी में शामिल किया गया था, तो संभावित नुकसान है कि अकेले ग्लिसरॉल पैदा कर सकता है एक ग्लिसरॉल-केवल (cecal घोल कमी) चूहों में इंजेक्शन, जो माउस के उपयोग में वृद्धि हुई है सहित के लिए परीक्षण किया जाना चाहिए । cecal गारा शेयरों की जीवाणु व्यवहार्यता ग्लिसरॉल के बिना cecal घोल स्टॉक ठंड के बाद परीक्षण किया गया था और लगातार हो पाया था, एक ही cecal घोल तैयारी की अलग aliquots में बैक्टीरिया एकाग्रता में कोई परिवर्तन के साथ-८० ° c पर एक 6 पर संग्रहीत महीने की अवधि । यह पता चलता है कि ग्लिसरॉल के बिना भंडारण एक सुसंगत जैविक परिणाम प्रदान करने में संभव है । एक थोक तैयार जमे हुए cecal घोल स्टॉक भी चूहों के उपयोग के लिए अनुमति दी घर में पैदा, लागत को कम करने और पुरुष चूहों है कि अंयथा प्रजनन से अधिक होगा उपयोग, इसलिए माउस अपव्यय को कम करने के उपयोग ।
चूहों में विफल चुनौतियों की पहचान के लिए सिस्टम में अतिरिक्त शोर जोड़ने से बचने के लिए महत्वपूर्ण था. cecal घोल के एक intraperitoneal इंजेक्शन के दौर से गुजर के बाद, चूहों त्वचा, जो वास्तव में चमड़े के नीचे था एक असफल इंजेक्शन संकेत के नीचे एक उभार की उपस्थिति के लिए मनाया गया । चूहों इंजेक्शन साइट पर लीक के लिए मनाया गया, दोनों तुरंत सुई हटाने के बाद और उन्हें इंजेक्शन के बाद एक कदम उठाने के लिए अनुमति देने के बाद, क्योंकि चूहों कभी कभार (शायद ही) एक कदम उठा कर इंजेक्शन साइट के अंग ले जाने के बाद ही रिसाव. इंजेक्शन के बाद एक उभार या रिसाव की उपस्थिति विश्लेषण से माउस को हटाने में हुई । सब के बाद, इनमें से या तो एक अलग cecal घोल की गलत राशि के कारण चुनौती खुराक में एक 5% अंतर के रूप में इंजेक्शन का परिणाम हो सकता है बाद में अस्तित्व को प्रभावित करने के लिए मनाया गया है ।
Cecal घोल चैलेंज प्रयोगों अक्सर आवश्यक अलग वजन-समायोजित खुराक के साथ घातक खुराक बदलती । इस के कारण, इंजेक्शन की मात्रा के रूप में छोटे रूप में 20 µ एल से रेंज कर सकते है और १०० µ एल के लिए । मृत सुई मात्रा के साथ जुड़े आनुपातिक प्रयोगात्मक त्रुटि भी इंजेक्शन की मात्रा के साथ बदलता है, कठिनाई को बढ़ाने के लिए सीधे अलग खुराक की तुलना. इंजेक्शन की मात्रा का मानकीकरण के सरल संशोधन के साथ, विचरण के इस स्रोत प्रयोग से हटा दिया जाता है ।
नवजात माउस की व्यवहार निगरानी प्रणाली इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल अपनी तरह का पहला है । नवजात चूहों के साथ नैतिक अनुसंधान आयोजित करने पर शोधकर्ताओं की मंशा अक्सर इस उम्र में जानवरों की भलाई का आकलन करने के लिए संसाधनों की चुनौतीपूर्ण कमी के साथ सामना कर रहे हैं । प्रस्तुत सहज और सुसंगत निगरानी प्रणाली इस ज्ञान अंतर को संबोधित करने के लिए शुरू होता है । महत्वपूर्ण बात, यह सबूत संचालित दृष्टिकोण न केवल प्रयोगात्मक डेटा प्राप्त की गुणवत्ता बढ़ जाती है, लेकिन एक ही समय में, यह भी प्रयोगात्मक पशुओं की पीड़ा कम कर देता है ।
The authors have nothing to disclose.
क्लेयर हैरिसन और जानवरों की देखभाल के लिए विशेष धंयवाद ब्रिटिश कोलंबिया बाल अस्पताल अनुसंधान संस्थान (BCCHR) में पशु काम में उनके समर्थन के लिए, साथ ही साथ डॉ पो यान चेंग को उनके मार्गदर्शन और पशु निगरानी और भलाई पर इनपुट के लिए ।
0.1 – 20 μL pipette tips | VWR | 732-0799 | |
1.8 mL Microcentrifuge tube | Costar | 3621 | |
100 – 1000 μL pipette tips | VWR | 732-0801 | |
1 – 200 μL pipette tips | VWR | 732-0800 | |
15 mL Centrifuge tube | FroggaBio | TB15-25 | |
23G1 needles | Becton Dickinson | 305145 | only the needle, not the syringe, used for pinning mouse to styrofoam |
28G 0.5 mL Insulin syringe | BD | 329461 | |
2 mL Cryogenic vial | Corning | 430488 | |
50 mL Centrifuge tube | Fisher scientific | 14-432-22 | |
5 mL pipette | Costar | 4487 | |
6 – 10 week old C57BL/6J adult mice | Jackson Laboratories | 664 | |
7 + day old C57BL/6J neonatal mice | Bred in house | n.a | |
70 μm Cell strainer | Falcon | 352350 | |
Defibrinated Sheep's Blood | Dalynn | HS30-500 | |
Dextrose 5% Water (D5W) | Baxter | JB0080 | |
Dissecting forceps | VWR | 82027-386 | |
Dissecting Scissors, Sharp Tip | VWR | 82027-592 | |
Dissecting Scissors, Sharp/Blunt Tip | VWR | 82027-594 | |
Ethanol (HistoPrep 95% Denatured Ethyl Alcohol) | Fisherbrand | HC11001GL | diluted to 70% with double distilled water |
Ethanol-proof marker; Lab marker | VWR | 52877-310 | |
EZ Anesthesia Vaporizer | EZ Anesthesia | EZ-155 | |
Germinator 500, Dry sterilize surgicial instrument (Hot bead sterilizer) | Braintree Scientific | GER 5287-120V | |
Isoflurane | Fresenius Kabi | CP0406V2 | |
Micro Spatula | Chemglass | CG-1983-12 | |
Pipette-Aid | Drummond | 4-000-100 | |
Rainin Classic Pipette PR-1000 | Rainin | 17008653 | |
Rainin Classic Pipette PR-20 | Rainin | 17008650 | |
Rainin Classic Pipette PR-200 | Rainin | 17008652 | |
Scale | Sartorius | BL 150 S | |
Specimen forceps | VWR | 82027-440 / 82027-442 | |
Square 1000 mL Storage Bottle | Corning | 431433 | |
Styrofoam board | Any | n.a | |
Sure-Seal Mouse/Rat euthanasia chamber | Euthanex | EZ-178 | |
Tryptic Soy Agar | Sigma-Aldrich | 22091-2.5KG | |
VX-200 Lab Vortex Mixer | Labnet International | S0200 | |
weigh paper | Fisherbrand | 09-898-12B |