Обнаружение вирусов от биоаэрозоли, используя анион обмен смолы

Цель этого метода является обеспечение высокочувствительный Биоаэрозоль выборки платформы для облегчения молекулярной обнаружение отрицательно заряженные вирусов от биоаэрозоли. Микроорганизмов, в том числе вирусные частицы, могут выжить в биоаэрозоли для длительных периодов времени¹. Биоаэрозоли могут путешествовать на относительно большие расстояния и поддерживать жизнеспособность и инфективности, о чем свидетельствует вспышка болезни легионеров, породивший от промышленных охладительных башен, расположенных на расстоянии 6 км от пострадавших лиц и в результате 18 погибших². Косвенные передачи вирусов для людей при посредничестве биоаэрозоли может произойти в нескольких параметров и продемонстрировал норовирус вспышек в школах и ресторанов^3,4. Аналогично Биоаэрозоль передачи вирусов может произойти в сельскохозяйственных параметры в фермах свиней и птицы, такие как с этот путь передачи, рассматривается как важный фактор в движении вирусов между производства зал^{5, 6 , 7 , 8 , 9}.

Эффективное выборки вируса Ладена биоаэрозоли позволяет улучшить в быстрой диагностики и готовности к предотвращению вспышки, как показано в демонстрациях, в котором H5 от биоаэрозоли в живых животных были обнаружены вирусы гриппа рынков в Китае и Соединенные Штаты Америки^10,11. Текущий Биоаэрозоль выборки технологии включают ряд различных частиц захвата принципов и может быть широко разделены на impingers, циклоны, ударных и фильтры¹². Это выходит за рамки сферы охвата настоящего Протокола исчерпывающим образом охватывать все преимущества и недостатки этих платформ для выборки вирусов из биоаэрозоли; Однако можно отметить, что большинство этих устройств выборки не были оптимизированы для коллекции вирусы и бактериофаги¹³. Кроме того инфективности вирусных частиц часто негативно влияет, с жидким impingers, считается, что более эффективно, чем выборка устройств, таких как твердых ударных или фильтры¹⁴поддерживать вирусные инфективности. Однако недостатком жидкости покушение является целевой разрежающего эффект, который возникает потому, что вирусы собраны в относительно больших объемах (обычно каналов ≥20 мл) жидкости в сосуде сбора. Еще одним важным недостатком предполагает субоптимальные эффективность жидких impingers сконцентрировать частицы < 0,5 мкм в размер¹⁵. Однако эффективность захвата этих устройств может быть улучшена путем иммобилизации на твердой матрицы, как иммобилизация может повысить сохранность вирусных нуклеиновых кислот и вирусных инфективности^16,17.

Ранее мы показали, что анион обмен смола является эффективным инструментом для захвата и концентрация вирусов из жидкого матриц, включая F-РНК бактериофагов, вирус гепатита А, человека аденовирус и ротавирусной^{18,19 ,20}. Как это определено изготовителем, смола обмен анион, широко использовались в этой работе является смола обмен полистирола сильная база анион macroreticular в котором функционализированных четвертичные амины группы посредничества привлечения и захват анионов в жидкость средних²¹ . Следовательно обмен смолы анион ожидается захват вирусов с net отрицательные поверхности обвинения, включая многие кишечных вирусов, вирусов гриппа и других вирусов, касающихся здоровья населения и животных.

Текущий протокол включает в себя добавление анион обмен смолы для жидкого Импинджера. В этой системе смолы служит средней концентрации шаг для вирусных частиц, захваченных в Импинджера жидкости. Нуклеиновые кислоты может затем быть непосредственно этого eluted в небольших объемах, обеспечивая концентрированного образца для молекулярного анализа. Таким образом основным преимуществом этого метода является улучшение чувствительность обнаружения вирусных, главным образом за счет сокращения объема выборки. Кроме того, из-за присущего неспецифической захвата отрицательно заряженные вирусов, метод вряд ли применимо для обнаружения большого числа вирусов, представляющих интерес. Здесь метод продемонстрировал для вакцины против штаммов типа A и вирусы гриппа типа B и FRNA Колифаги мс2 (МС2). Впоследствии эти вирусы обнаруживаются с помощью стандартных qRT ПЦР-анализы как описано²². Конечного пользователя не следует ожидать сталкиваются с трудностями в выполнении этого метода, поскольку изменения в существующих в настоящее время оборудование не представляют собой серьезные нарушения обычного потока Биоаэрозоль отбора проб и анализа.