Stéréotaxique transfert adoptif de cellules immunitaires cytotoxiques dans des modèles murins de xénogreffes de glioblastome Multiforme Orthotopic homme

GBM (qui grade astrocytome IV), est le cancer de cerveau primitif plus fréquentes et les plus agressifs chez les adultes. En dépit de traitements agressifs qui associent chirurgie et la radio-chimiothérapie, GBM reste associé à un très mauvais pronostic (survie médiane de 14,6 mois et un an-2-mortalité > 73 %)¹. Cela prouve que quelques avancées thérapeutiques efficaces ont été validées au cours de la dernière décennie². Parmi les candidats pour la conception du plus efficace des stratégies thérapeutiques^3,4,5, immunothérapies⁶ sont actuellement explorées afin de suivre et d’éliminer très tumeur invasive et radio/chimio-résistant cellules, soupçonnés pour leur contribution essentielle à rapide et fatale de tumeur rechute⁷. Diverses cibles immunologiques potentielles ont été immunothérapies identifiés et proposés pour, comportant naturels ou modifié αβ lymphocytes T ϒδ tels que les antigènes de tumeur GBM spécifiques ou le stress induit par les molécules^{8,9, 10}. La possibilité d’administrer des effecteurs de cellules immunitaires GBM-réactive sélectionnées représente une occasion unique d’offrir des quantités élevées de lymphocytes effecteurs directement dans le site de la tumeur maligne résiduelle. Pour soutenir cette stratégie, nous avons récemment démontré que les modèles basés sur des souris immunodéficientes transportant orthotopique primaires xénogreffes humaines de GBM fidèlement récapitulent le développement de tumeurs cérébrales dans GBM patients^9,11. En outre, ces modèles ont servi à démontrer l’efficacité antitumorale forte de Moutschen transférés lymphocytes allogéniques des Vϒ9Vδ2T humains.

Ce protocole décrit les étapes expérimentales critiques pour la réalisation des immunothérapies stéréotaxiques des tumeurs cérébrales, telles que GBM, basée sur le transfert adoptif des lymphocytes de T allogéniques. L’article indique : (i) l’amplification des lymphocytes effecteur immunitaire allogénique thérapeutiques T, telles que les lymphocytes humains de Vϒ9Vδ2T ; (ii) la préparation de ces lymphocytes effecteurs T pour injection ; (iii) la procédure d’administration stéréotaxique dans le cerveau, près de la tumeur. Cet article donne également une idée sur le comportement de ces effecteurs cellulaires après injection stéréotaxique.

L’approche thérapeutique présentée ici est basée sur l’injection de 20 x 10⁶ cellules effectrices par dose pour chaque souris immunodéficientes avec tumeur de cerveau. Une étape d’expansion initiale in vitro est nécessaire pour produire de grandes quantités de cellules immunitaires. Par conséquent, les expansions de cellules non spécifiques sont effectuées à l’aide de la phytohémagglutinine (PHA-L) et irradié des cellules nourricières allogéniques : cellules mononucléaires de sang périphérique (PBMC) provenant de donneurs sains et cellule B-lymphoblastoïdes transformées par Epstein Barr Virus EBV lignes (BLCLs), dérivés de PBMC par in vitro l’infection par EBV contenant la culture surnageante de la lignée cellulaire Ouistiti B95-8, en présence de 1 µg/mL de cyclosporine-A.

Les cellules immunes effectrices GBM-réactive sont comparées et choisies dans in vitro tests⁹. Ces cellules effectrices sont activés et amplifié à l’aide de protocoles standard, selon leur nature (par exemple, de lymphocytes humains Vγ9Vδ2 T⁹ ou virus anti-herpès humain αβ T lymphocytes¹²) d’une pureté minimale de > 80 %, comme d’habitude vérifiée par l’analyse par cytométrie en flux. La procédure d’extension cellulaire détaillée ci-dessous s’applique à divers sous-ensembles de lymphocytes humains.