Репликация Ordered, неизбыточной библиотека штамма PA14 Transposon вставки мутантов синегнойной палочки
Summary
Pseudomonas aeruginosa инфекция вызывает значительные заболеваемости в уязвимых хостов. Неизбыточной transposon вставки мутант библиотека штамм P. aeruginosa PA14, как PA14NR набор, облегчает анализ гена функциональность в многочисленных процессах. Представленные здесь — это протокол для создания высококачественных копий PA14NR набор мутант библиотеки.
Abstract
Pseudomonas aeruginosa является фенотипически genotypically разнообразной и гибкой грамотрицательные бактерии, повсеместно в окружающей среде. P. aeruginosa способен формировать биоплёнки, развивать устойчивость к антибиотикам, производят Факторы вирулентности и быстро развиваться в течение хронической инфекции. Таким образом P. aeruginosa может вызвать как острый и хронический, трудных для лечения инфекций, что приводит к значительным заболеваемости в некоторых популяциях пациентов. Штамм P. aeruginosa PA14 — изолированный человека клинических с сохранение генома структурой, которая поражает разнообразием млекопитающих и nonvertebrate узлов, делая PA14 штамма привлекательным для изучения этого патогена. В 2006 году был создан неизбыточной transposon вставки мутант библиотеки, содержащей 5459 мутантов, соответствующий 4596 предсказал PA14 генов. С тех пор распространение PA14 библиотеки позволила исследовательского сообщества лучше понять функции отдельных генов и сложные пути P. aeruginosa. Поддержание целостности библиотеки через процесс репликации требует надлежащей обработке и точных методов. С этой целью эта рукопись представлены протоколы, которые подробно шаги, участвует в репликации Библиотека, Библиотека контроля качества и надлежащего хранения отдельных мутантов.
Introduction
Pseudomonas aeruginosa является фенотипически genotypically разнообразной и гибкой грамотрицательных бактерий, присутствующих в почве, воде и большинство человеческих средах, а также микрофлоры кожи. По сравнению с многих видов бактериальных, P. aeruginosa имеет сравнительно большой геном 5.5-7 Mbp с высоким G + C контента (65-67%). Кроме того значительную долю своих генов участвуют в метаболических адаптируемость и являются частью регулирования сети, что позволяет большую гибкость в ответ на экологического стресса1. P. aeruginosa выражает множество факторов вирулентности, проявляет склонность к форме биопленки, обладает способностью координировать ответы через несколько кворум зондирования пути и отображает заметный способность вырабатывать устойчивость к антибиотикам и терпимости2,3,4,5,6,,78. Эти атрибуты представляют серьезные проблемы для лечения инфекций, вызванных P. aeruginosa.
Хронический P. aeruginosa инфекции может произойти в многочисленных положениях заболеванием. Кистозный фиброз (CF), генетическое заболевание, вызванное мутаций гена Муковисцидоза регулятор трансмембранной проводимости (МВТР) , приводит к inspissated, инфицированных выделениями в дыхательные пути, прогрессивное расширение бронхов и, в конечном счете, смерть от9дыхательной недостаточности. В зрелом возрасте большинство пациентов с CF хронически инфицированы P. aeruginosa, который играет ключевую роль в заболеваемости и смертности, связанных с этой болезнью10. Кроме того у больных с тяжелой сжечь травм11, tracheostomies12, совместные замены13или пребывает катетеры14 подвергаются риску инфекции P. aeruginosa , связанные с способность бактерий в форме биоплёнки побег принимающей воспалительных реакций и15. Кроме того колонизация происходит без конкуренции после многолетних антибиотикам или терпимая(ый) населения выбирается путем широкого спектра, последовательные антимикробного лечения12,16,17 , 18. лучшее понимание патогенеза P. aeruginosa будет иметь значительные последствия для многих государств болезни.
Несколько клинических изолятов P. aeruginosa , включая штаммы, PAO1, PA103, PA14 и Пак, были широко изучены расследовать различные особенности патогенеза P. aeruginosa . Штамм PA14 является клинической изолировать, который принадлежит к одной из наиболее распространенных во всем мире19,клоновых группы20 и не были широко пассированной в лаборатории. Высоко вирулентным в позвоночных модели инфекции, с заметным эндотоксинов PA14is профиль21, пили структуры22, патогенности острова23, тип III секреторной системы (TTSS), цитотоксичность на млекопитающих клетки24 и профили в антибиотикам сопротивление и сохранение25. Кроме того, PA14 также высоко вирулентным в многочисленных системах модель хост патогена, включая завод лист инфильтрации модели26,27,Caenorhabditis elegans инфекции моделей28, 29, насекомое модели3130,, а также мыши пневмонии моделей32,33 и ожог кожи модели34.
Геном всей мутант библиотеки являются коллекции isogenic мутантов в несущественные генов, которые представляют собой очень мощные инструменты, чтобы понять биологии организма, позволяя анализ функции гена в геномной масштабе. Две transposon вблизи насыщения вставки мутант библиотеки построено в P. aeruginosa в настоящее время доступны для распространения. Вставки сайты транспозонов были определены для обеих библиотек. Эти так называемые неизбыточной библиотеки облегчения исследования генома общесистемной бактериальных штаммов, значительно уменьшив время и затраты в uncharacterized скрининга мутантов случайных transposon. P. aeruginosa PAO1 transposon мутант Библиотека, построенный в MPAO1 изолировать штамм PAO1 с помощью транспозонов ISphoA/ Ба иlacZ/ ха35, куратор Манойл лаборатории, Университет Вашингтона. Библиотека состоит из последовательности проверить коллекцию 9,437 transposon мутантов, обеспечивает генома широкий охват и включает в себя два мутантов для большинства генов36. Информация о библиотеке мутантов transposon P. aeruginosa PAO1 доступна на сайте Лаборатории Манойл общественности, доступной через Интернет на http://www.gs.washington.edu/labs/manoil/libraryindex.htm. P. aeruginosa штамм PA14 неизбыточной transposon вставки мутант библиотека (значение PA14NR) построена в штамм PA14 с использованием MAR2xT7 и Tn транспозоновphoA37 распространяется в настоящее время кафедра педиатрии в массачусетской больницы. Набор PA14NR включает в себя коллекцию из более чем 5800 мутантов с одной transposon вставок в несущественные генов37. Сведения о строительстве комплекса PA14NR описаны в общественности, доступной через Интернет сайт http://pa14.mgh.harvard.edu/cgi-bin/pa14/home.cgi?section=NR_LIB, который также содержит целый ряд онлайн поиск инструментов для облегчения использования PA14NR Набор.
Оригинальный набор PA14NR включает 5459 мутантов, выбранных из всеобъемлющей библиотеки около 34000 мутантов вставки случайных transposon, которые соответствуют 4596 предсказал PA14 генов, представляющие 77% всех предсказал PA14 генов37. Поскольку строительство библиотеки в 2006 году были добавлены новые мутанты, и в настоящее время набор PA14NR включает в себя более чем 5800 мутантов38 , которые представляют около 4600 PA14 генов. Большинство transposon мутантов PA14 были созданы в дикого типа фона37. Подробности, касающиеся каждого члена мутант библиотеки, включая генетический фон, доступны через поиск онлайн базы данных, либо загрузив таблицу неизбыточной Библиотека, обе функции, доступные на веб-сайте PA14 (http:// pa14.MGH.Harvard.edu/CGI-BIN/pa14/Home.CGI). Большинство из мутантов были созданы с помощью MAR2xT7 transposon (MrT7), с небольшим набором, созданные с помощью transposon TnPhoA (phoA)37. Каждый transposon имеет антибиотикорезистентности кассету, которая позволяет для мутантов выделение с помощью гентамицин (MrT7) или канамицин (phoA). PA14NR набор мутантов хранится в шестьдесят три 96-луночных пластины и включает в себя два дополнительных управления 96-луночных пластины, которые состоят из дикого PA14 привиты и uninoculated скважин интеркалированного в подготовленного узора. Формат 96-луночных пластины, в паре с онлайн поиск инструментов значительно облегчает пользовательских развития скрининговых анализов, которые позволяют пользователям легко идентифицировать гены, связанные с мутант фенотипов. Онлайн Поиск инструменты также облегчают поиск и отбор дополнительных соответствующих мутантов, необходимых для дальнейших исследований.
PA14 и PAO1 transposon мутант библиотеки являются очень важные глобальные ресурсы для научного сообщества, и они дополняют друг друга в проверке функции неизвестных генов и пути этого бактериальных патогенов. Кстати поскольку строительство библиотеки PAO1 и PA14 transposon мутации, полный геном анализ последовательности ДНК многих P. aeruginosa изолятов показал, что PAO1 и PA14 принадлежат к различным основным субкладов P. aeruginosa филогении7,,3940,41. Потому что клинических P. aeruginosa изолирует находятся распределены по всему филогения, тот факт, что PAO1 и PA14 принадлежат к различным P. aeruginosa подгруппы повышает значение двух transposon мутации библиотек для сравнительных исследования.
Публикаций, описание конструкции и скрининг бактериального мутант библиотек, включая, P. aeruginosa библиотек3537,42, легко доступны в литературе. Однако в меру наших знаний, не опубликованные протоколы, описывая подробные процедуры и методы, используемые для репликации, техническое обслуживание и проверки бактериальных мутант библиотек доступны.
Методологии, изложенной в настоящем издании описывает набор из трех протоколов, которые облегчают использование и обслуживание комплекса PA14NR. Первый протокол описывает репликации библиотеки, как рекомендовано получателям набора PA14NR. Второй протокол включает руководящие принципы для полос, выращивания и хранения отдельных мутантов, определены с использованием набора PA14NR. Третий протокол описывает методы контроля качества, включая ПЦР-амплификация фрагментов из transposon мутантов и последующего последовательности для подтверждения личности мутантов. Этот набор протоколов также может быть адаптирована для репликации и поддержание других бактериальная мутант библиотек или коллекций. Репликацию бактериальных мутант библиотек или коллекции настоятельно рекомендуется сохранить целостность «оригинал» (оригинал получил). Репликация нескольких копий набор PA14NR для использования обычной лаборатории минимизирует вероятность загрязнения осреднения мастер-копии.
Protocol
Representative Results
Discussion
P. aeruginosa PA14NR набор является ценным ресурсом для научного сообщества. По словам марта 2017 dataset из Clarivate аналитика основные индикаторы науки базы данных, Либерати и др. (2006) 37, который описывает строительства комплекса PA14NR, занимает в верхней 1% публикаций микробиол…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить Лиза Philpotts MGH Тредуэлл виртуальной библиотеки для ее руководства в базе данных поиска. Эта работа была поддержана Фондом кистозный фиброз (YONKER16G0 и HURLEY16G0) и низ NIAID (ДГПЖ и Аде: R01 A1095338).
Materials
| Materials for Library Replication | |||
| Sterile 96-well Tissue-culture treated, case of 50 | Corning Life Sciences | 353072 | via Fisher Scientific |
| Sterile 96 Well Clear V-Bottom 2000μL Deep Well Plates, case of 25 | Corning Life Sciences | 3960 | via Fisher Scientific |
| Nunc OmniTray (rectangular plates), case of 60 | Thermo Scientific Rochester | 242811 | via Fisher Scientific |
| Rectangular Ice Pan, Midi (4L) | Corning Life Sciences | 432104 | via Fisher Scientific |
| Secure-Gard Cone Mask, case of 300 | Cardinal Health | AT7509 | via Fisher Scientific |
| AluminaSeal, pack of 100 | Diversified Biotech | ALUM-100 | via Fisher Scientific |
| Breathe-Easy membrane, pack of 100 | Diversified Biotech | BEM-1 | via Sigma-Aldrich |
| Sterile, individually wrapped, 50mL Solution Trough/Reagent Reservoir, case of 100 | Sorenson | S50100 | via Westnet Incorporated |
| Plate roller | VWR | 60941-118 | via VWR |
| Cryo Laser Labels – CRYOLAZRTAG 2.64" x 0.277", pack of 16 sheets | GA International | RCL-11T1-WH | via Labtag.com (template for printing also available from Labtag.com) |
| 96-well replicator | V & P Scientific, Inc. | Custom 407C, 3.18mm pin diameter, 57mm long | via V & P Scientific, Inc. |
| Multitron Pro, 3mm Shaking incubator | Infors HT | l10003P | via Infors HT |
| Picus 12 Channel 50-1200μL Electronic Pipette | Sartorius | 735491PR | via Sartorius |
| Filter Tips 50-1200μL, pack of 960 | Biohit | 14-559-512 | via Fisher Scientific; use electronic multichannel-compatible tips |
| Dry Ice | User-specific vendor | ||
| Materials for Individual Mutant Storage | |||
| Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL | Fisher Scientific | 05-408-130 | via Fisher Scientific |
| Pipettes (P1000, P200, P20, P2) | Gilson | F167370 | via Gilson |
| Materials for Quality Control PCR | |||
| Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL | Fisher Scientific | 05-408-130 | via Fisher Scientific |
| NanoDrop | Thermo Scientific | ND-2000 | via ThermoFisher |
| PCR Thermocycler | |||
| Omnistrips PCR Tubes with domed lids | Thermo Scientific | AB0404 | via Fisher Scientific |
| ART Barrier low-retention pipette tips (10 uL, 100 uL, 1000 uL) | Molecular BioProducts, Inc. | Z676543 (10 uL), Z676713 (100 uL), Z676802 (1000 uL) | via Sigma-Aldrich |
| Pipettes (P1000, P200, P20, P2) | Gilson | F167370 | via Gilson |
| Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL | Fisher Scientific | 05-408-130 | via Fisher Scientific |
| MasterPure DNA Purification Kit | Epicentre | MCD85201 | via Epicentre Technologies Corp |
| GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder, ready-to-use | Thermo Scientific | SM1333 | via ThermoFisher |
| RediLoad Loading Buffer | Invitrogen | 750026 | via ThermoFisher |
| Chemicals | |||
| Chemicals for Library and Individual Mutant Storage | |||
| Glycerol MB Grade, 1L | Sigma Aldrich | G5516 | via Sigma-Aldrich |
| LB Broth | Per 1L dH2O: 10g tryptone, 5g yeast extract, 5g NaCl, 1ml 1N NaOH (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley, 1994.) | ||
| Tryptone | Sigma Aldrich | T7293 | via Sigma-Aldrich |
| Yeast Extract | Sigma Aldrich | Y1625 | via Sigma-Aldrich |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S7653 | via Sigma-Aldrich |
| Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | S8045 | via Sigma-Aldrich |
| LB agar | See preparation above, add 15g Bacto Agar | ||
| Bacto Agar | Sigma Aldrich | A5306 | via Sigma-Aldrich |
| Gentamicin sulfate, 10g | BioReagent | 1405-41-0 | via Sigma-Aldrich |
| Kanamycin sulfate | Gibco | 11815024 | via ThermoFisher |
| Ethanol, 190 proof | Decon | 04-355-221 | via Fisher Scientific |
| Chemicals for Quality Control PCR | |||
| Primers | User-preferred vendor | See primers listed in Table 3 | |
| Corning cellgro Molecular Biology Grade Water | Corning | 46000CV | via Fisher Scientific |
| Taq Polymerase Buffer | Invitrogen | 10342020 | via ThermoFisher |
| Taq DNA Polymerase, recombinant | Invitrogen | 10342020 | via ThermoFisher |
| dNTPs | Invitrogen | 10297018 | via ThermoFisher |
| Agarose | Sigma | A9539 | via Sigma-Aldrich |
Referências
- Moradali, M. F., Ghods, S., Rehm, B. H. Pseudomonas aeruginosa lifestyle: A paradigm for adaptation, survival, and persistence. Front Cell Infect Microbiol. 7, 39 (2017).
- Bleves, S., et al. Protein secretion systems in Pseudomonas aeruginosa: A wealth of pathogenic weapons. Int J Med Microbiol. 300 (8), 534-543 (2010).
- Breidenstein, E. B., de la Fuente-Nunez, C., Hancock, R. E. Pseudomonas aeruginosa: all roads lead to resistance. Trends Microbiol. 19 (8), 419-426 (2011).
- Flynn, K. M., et al. Evolution of ecological diversity in biofilms of Pseudomonas aeruginosa by altered cyclic diguanylate signaling. J Bacteriol. 198 (19), 2608-2618 (2016).
- Hazan, R., Maura, D., Que, Y. A., Rahme, L. G. Assessing Pseudomonas aeruginosa persister/antibiotic tolerant cells. Methods Mol Biol. 1149, 699-707 (2014).
- Klockgether, J., et al. Genome diversity of Pseudomonas aeruginosa PAO1 laboratory strains. J Bacteriol. 192 (4), 1113-1121 (2010).
- Mathee, K., et al. Dynamics of Pseudomonas aeruginosa genome evolution. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (8), 3100-3105 (2008).
- Taylor, P. K., Yeung, A. T., Hancock, R. E. Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa biofilms: towards the development of novel anti-biofilm therapies. J Biotechnol. 191, 121-130 (2014).
- Flume, P. A., Van Devanter, D. R. State of progress in treating cystic fibrosis respiratory disease. BMC Med. 10, 88 (2012).
- . Cystic Fibrosis Foundation Patient Registry 2015 Annual Data Report Available from: https://www.cff.org/Our-Research/CF-Patient-Registry/2015-Patient-Registry-Annual-Data-Report.pdf (2016)
- Church, D., Elsayed, S., Reid, O., Winston, B., Lindsay, R. Burn wound infections. Clin Microbiol Rev. 19 (2), 403-434 (2006).
- Sadikot, R. T., Blackwell, T. S., Christman, J., Prince, A. Pathogen-host interactions in Pseudomonas aeruginosa pneumonia. Am J Respir Crit Care Med. 171 (11), 1209-1223 (2005).
- Song, Z., et al. Prosthesis infections after orthopedic joint replacement: the possible role of bacterial biofilms. Orthop Rev (Pavia). 5 (2), 65-71 (2013).
- National Nosocomial Infections Surveillance, S. National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report, data summary from January 1992 through June 2004, issued October 2004. Am J Infect Control. 32 (8), 470-485 (2004).
- Cohen, T. S., Parker, D., Prince, A. . Pseudomonas aeruginosa Host Immune Evasion. 7, 3-23 (2014).
- Fernandes, A., Dias, M. The microbiological profiles of infected prosthetic implants with an emphasis on the organisms which form biofilms. J Clin Diagn Res. 7 (2), 219-223 (2013).
- Khosravi, A. D., Ahmadi, F., Salmanzadeh, S., Dashtbozorg, A., Montazeri, E. A. Study of Bacteria Isolated from Orthopedic Implant Infections and their Antimicrobial Susceptibility Pattern. Res J of Microbiol. 4 (4), 6 (2009).
- Roemhild, R., Barbosa, C., Beardmore, R. E., Jansen, G., Schulenburg, H. Temporal variation in antibiotic environments slows down resistance evolution in pathogenic Pseudomonas aeruginosa. Evol Appl. 8 (10), 945-955 (2015).
- Fischer, S., et al. Intraclonal genome diversity of the major Pseudomonas aeruginosa clones C and PA14. Environ Microbiol Rep. 8 (2), 227-234 (2016).
- Wiehlmann, L., et al. Population structure of Pseudomonas aeruginosa. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (19), 8101-8106 (2007).
- Lam, J. S., Taylor, V. L., Islam, S. T., Hao, Y., Kocincova, D. Genetic and functional diversity of Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide. Front Microbiol. 2, 118 (2011).
- Choi, J. Y., et al. Identification of virulence genes in a pathogenic strain of Pseudomonas aeruginosa by representational difference analysis. J Bacteriol. 184 (4), 952-961 (2002).
- He, J., et al. The broad host range pathogen Pseudomonas aeruginosa strain PA14 carries two pathogenicity islands harboring plant and animal virulence genes. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (8), 2530-2535 (2004).
- Mikkelsen, H., McMullan, R., Filloux, A. The Pseudomonas aeruginosa reference strain PA14 displays increased virulence due to a mutation in ladS. PLoS One. 6 (12), e29113 (2011).
- Drenkard, E., Ausubel, F. M. Pseudomonas biofilm formation and antibiotic resistance are linked to phenotypic variation. Nature. 416 (6882), 740-743 (2002).
- Rahme, L. G., et al. Common virulence factors for bacterial pathogenicity in plants and animals. Science. 268 (5219), 1899-1902 (1995).
- Rahme, L. G., et al. Use of model plant hosts to identify Pseudomonas aeruginosa virulence factors. Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (24), 13245-13250 (1997).
- Kirienko, N. V., Cezairliyan, B. O., Ausubel, F. M., Powell, J. R. Pseudomonas aeruginosa PA14 pathogenesis in Caenorhabditis elegans. Methods Mol Biol. 1149, 653-669 (2014).
- Mahajan-Miklos, S., Tan, M. W., Rahme, L. G., Ausubel, F. M. Molecular mechanisms of bacterial virulence elucidated using a Pseudomonas aeruginosa-Caenorhabditis elegans pathogenesis model. Cell. 96 (1), 47-56 (1999).
- Limmer, S., et al. Pseudomonas aeruginosa RhlR is required to neutralize the cellular immune response in a Drosophila melanogaster oral infection model. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (42), 17378-17383 (2011).
- Miyata, S., Casey, M., Frank, D. W., Ausubel, F. M., Drenkard, E. Use of the Galleria mellonella caterpillar as a model host to study the role of the type III secretion system in Pseudomonas aeruginosa pathogenesis. Infect Immun. 71 (5), 2404-2413 (2003).
- Coleman, F. T., et al. Hypersusceptibility of cystic fibrosis mice to chronic Pseudomonas aeruginosa oropharyngeal colonization and lung infection. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (4), 1949-1954 (2003).
- Pazos, M. A., et al. Pseudomonas aeruginosa ExoU augments neutrophil transepithelial migration. PLoS Pathog. 13 (8), e1006548 (2017).
- Maura, D., Hazan, R., Kitao, T., Ballok, A. E., Rahme, L. G. Evidence for direct control of virulence and defense gene circuits by the Pseudomonas aeruginosa quorum sensing regulator, MvfR. Sci Rep. 6, 34083 (2016).
- Jacobs, M. A., et al. Comprehensive transposon mutant library of Pseudomonas aeruginosa. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (24), 14339-14344 (2003).
- Held, K., Ramage, E., Jacobs, M., Gallagher, L., Manoil, C. Sequence-verified two-allele transposon mutant library for Pseudomonas aeruginosa PAO1. J Bacteriol. 194 (23), 6387-6389 (2012).
- Liberati, N. T., et al. An ordered, nonredundant library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 transposon insertion mutants. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (8), 2833-2838 (2006).
- Feinbaum, R. L., et al. Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model. PLoS Pathog. 8 (7), e1002813 (2012).
- Stewart, L., et al. Draft genomes of 12 host-adapted and environmental isolates of Pseudomonas aeruginosa and their positions in the core genome phylogeny. Pathog Dis. 71 (1), 20-25 (2014).
- Thrane, S. W., et al. The widespread multidrug-resistant serotype O12 Pseudomonas aeruginosa clone emerged through concomitant horizontal transfer of serotype antigen and antibiotic resistance gene clusters. MBio. 6 (5), e01396-e01315 (2015).
- van Belkum, A., et al. Phylogenetic Distribution of CRISPR-Cas Systems in Antibiotic-Resistant Pseudomonas aeruginosa. MBio. 6 (6), e01796-e01715 (2015).
- Lewenza, S., et al. Construction of a mini-Tn5-luxCDABE mutant library in Pseudomonas aeruginosa PAO1: a tool for identifying differentially regulated genes. Genome Res. 15 (4), 583-589 (2005).
- . . Current Protocols in Molecular Biology. , (1994).
- Breidenstein, E. B., Khaira, B. K., Wiegand, I., Overhage, J., Hancock, R. E. Complex ciprofloxacin resistome revealed by screening a Pseudomonas aeruginosa mutant library for altered susceptibility. Antimicrob Agents Chemother. 52 (12), 4486-4491 (2008).
- Musken, M., Di Fiore, S., Dotsch, A., Fischer, R., Haussler, S. Genetic determinants of Pseudomonas aeruginosa biofilm establishment. Microbiology. 156 (Pt 2), 431-441 (2010).
- Schurek, K. N., et al. Novel genetic determinants of low-level aminoglycoside resistance in Pseudomonas aeruginosa. Antimicrob Agents Chemother. 52 (12), 4213-4219 (2008).
- Oumeraci, T., et al. Comprehensive MALDI-TOF biotyping of the non-redundant Harvard Pseudomonas aeruginosa PA14 transposon insertion mutant library. PLoS One. 10 (2), e0117144 (2015).
- Yeung, A. T., et al. Swarming of Pseudomonas aeruginosa is controlled by a broad spectrum of transcriptional regulators, including MetR. J Bacteriol. 191 (18), 5592-5602 (2009).
