ניתוח של החומצה הרטינואית המושרה בידול עצבית של תאי גזע עובריים עכבר בשניים ובשלושה-ממדי גופים Embryoid

ESCs מקורם מסת התאים הפנימית הבלסטוציסט. תאים אלה הם pluripotent, כלומר יש להם את היכולת להתמיין לכל סוג תא של האורגניזם ממוצא. בידול ESC במבחנה הוא עניין רחב כמערכת ניסיונית חוקר מסלולים ומנגנונים התפתחותי. הוא מציע מערכת מודל חזקה וגמישה לבחון גישות טיפוליות חדשות תיקון של תפקוד תאים ורקמות. EBS לשחזר היבטים רבים של התמיינות תאים במהלך העובר מוקדם. בפרט, EBS ניתן להשתמש כאשר הקטלניות עובריים מקשה לקבוע את הבסיס התאי של מומים עובריים ^{1, 2.} EBS יכול להיוצר גם על ידי Drop Hanging או טכניקות השעיה נוזלות ^3. היתרון של לשעבר הוא היכולת ליצור EBS של גודל וצפיפות עקביים, ובכך להקל על שחזור ניסיוני.

<p c= "נער" "jove_content"> אינטראקציה עם תאי מטריקס (ECM) חלבונים דבקים עשויה להשפיע על תנועתיות והישרדות של תאים חסידים. במערכת התרבות 2D, פיברונקטין מוחל לעתים קרובות כדי להגדיל את הידבקות התא למצע. פיברונקטין הוא מרכיב lamina בסיס מוכר על ידי 10 סוגים של פני שטח תא integrin heterodimers ^4.

RA הוא מטבוליט lipophilic קטן של ויטמין A אשר גורמת בידול עצבי ^{5, 6.} ריכוזים גבוהים של RA לקדם ביטוי גנים עצבי ואת מדחיקת ביטוי גני mesodermal במהלך היווצרות ^{7 EB, 8.} RA מופק על ידי ויטמין A חמצון כדי retinaldehyde ידי אחד dehydrogenase אלכוהול או רטינול, ואחריו חמצון retinaldehyde למוצר הסופי על ידי retinaldehyde דהידרוגנז ^9. בידול עצבי דורש הובלה של RA מן הציטופלסמה אל הגרעין ידי חלבון תאי RA-מחייב 2 (CRABP2). בגרעין, RA נקשר לקולטן מורכב מאותו המקור שלה מורכב heterodimer RAR-RXR ^10. התוצאה היא גיוס של ממריצים-שיתוף תעתיק, וגם בהוצאת תעתיק ^{9, 11.} יתר על כן, RA מקדמת את ההשפלה של פוספורילציה (פעיל) SMAD1, ובכך קומם BMP ו הסמאד איתות ^12. בנוסף לפעילויות אלה, RA מגביר ביטוי Pax6, גורם שעתוק התומך בידול עצבי ^13. איתות RA היא מווסתת על ידי הסירטואינים-1 (SIRT1) חברה dinucleotide אדנין nicotinamide גרעיני (NAD +) – אנזים תלוי כי הוא מסיר קבוצות אצטיל CRABP2, מפריעים טרנסלוקציה שלו אל גרעין, ולכן עם RA מחייב heterodimer RAR-RXR ^{14, 15, 16.}

e_content "> מטרתנו בעיצוב פרוטוקול EB RA שטופל המתואר כאן היא למטב בידול עצבי כדי להקל במבחנת ניתוח של מסלולי איתות המווסתים בידול ESC לתוך תאים מבשרים עצביים. אחד היתרונות של פרוטוקול זה הוא סיוע של הניתוח של תפקוד תא על ידי immunofluorescence. EBS 3D אינו חדר היטב על ידי נוגדנים וקשים תמונה. דיסוציאציה EB לתוך בשכבת 2D בנקודות ספציפיות עת במהלך בידול עצבי מקל immunolabeling הדמיה של התאים על ידי מיקרוסקופ confocal.