Förebyggandet av mänsklig trikinos i många länder över hela världen är baserad på laboratorieundersökningar av muskelprover från mottagliga djur med förfaranden enligt matsmältning, av vilka den magnetiska omröraren metod anses vara den gyllene standarden.
Trikinos är en försvagande sjukdom hos människor och orsakas av konsumtion av rått eller dåligt tillagat kött från djur som smittats med nematodlarver av släktet Trichinella. De viktigaste källorna till infektioner hos människor över hela världen är vilt och fläsk eller fläskprodukter. I många länder är att förebygga mänskliga trikinos baserad på identifieringen av smittade djur med hjälp av artificiell nedbrytning av muskelprover från mottagliga djurkadaver.
Det finns flera metoder baserade på rötning av kött men magnetomröraren metoden anses vara den gyllene standarden. Denna metod gör det möjligt att upptäcka trikiner larver genom mikroskopi efter den enzymatiska nedbrytning av muskelprover och efterföljande filtrering och sedimenteringssteg. Även om denna metod inte kräver speciell och dyrbar utrustning, kan den interna kontrollen inte användas. Därför bör stränga kvalitetsstyrning kan applied under hela testet. Syftet med detta arbete är att ge detaljerade hanteringsanvisningar och kritiska punkter av metoden analytiker, baserat på erfarenheterna från Europeiska unionens referenslaboratorium för parasiter och det nationella referenslaboratoriet i Tyskland för trikiner kontroll.
Nematoder av släktet Trichinella kan detekteras i tvärstrimmiga muskler i rovdjurs och allätare däggdjur, fåglar och reptiler över hela världen. Dessa zoonotiska nematoder kan nå människor när rå eller halv rått kött och köttprodukter framställda produkter från svin, häst och vilt intas. Denna zoonos kan vara en allvarlig sjukdom hos människor som kännetecknas av patognomona tecken och symtom, till exempel diarré, feber, periorbitalt ödem och myalgi och möjliga komplikationer såsom myokardit, tromboembolisk sjukdom och encefalit 1.
Trichinella spiralis är den mest utbredda etiologiska medlet för trikiner infektion i vilda och tama djur och orsakar de flesta av infektioner hos människor över hela världen. I Europa, Nord- och Västafrika, och västra Asien, är TRICHINELLA BRITOVI annan källa till infektioner hos människor. Dessutom är tio andra taxa mindre frekvent rapporterade som orsakande medel av den mänskliga sjukdomen och finns i olika regioner i världen, vanligtvis hos vilda djur 2. Förutom vilda djur såsom vildsvin, björn, valrossar och grävlingar, representerar fläsk viktigaste källan till mänsklig infektion i världen.
Det bästa sättet att förhindra trikinos är att avstå från att äta råa köttprodukter och att laga något kött, speciellt viltkött till säkra temperaturer (> 65 ° C under 1 minut, det vill säga att ändra kött färg från rosa till brun kärna köttprodukt) 3. Europeiska unionen och USDA har angett frys- och tillagningstider och temperaturer för fläskprodukter som kan användas för att döda T. spiralis larver i kött fyra, fem. Vidare har rekommendationer för inaktivering av trikiner i kött och köttprodukter som publicerats av International Commission on Trikinos"xref"> 6. I Europa, förutom införandet av kontrollerade uppfödningsförhållanden i kommersiella svinbesättningar där risken för trikiner infektion är försumbar, är att förebygga mänskliga trikinos baseras på laboratorieundersökningar av muskelprover från mottagliga djur 4.
För livsmedel säkerhetsskäl, matsmältningen analyser är de enda tillförlitliga förfaranden för direkt detektion av trikinlarver i kött 3, 7. Även om det finns flera varianter av matsmältningen analysen är magnetomröraren metoden internationellt accepterade referensmetod 3, 4, 7. Denna analys är baserad på påvisande av trikiner larver i tvärstrimmig muskelvävnad. Efter den enzymatiska nedbrytning av muskelprover och efterföljande filtrering och sedimenteringssteg, Trichinella larver identifieras genom mikroskopi. Beroende på handelsåtaganden och den nationella lagstiftningen, det finns en mängd små variationer i det allmänna protokollet av magnetomröraren metoden. Här är de tekniska detaljerna baseras på EU: s krav 4, ISO specifikationer 8, IKT riktlinjer 6, och upplevelsen av Europeiska unionens referenslaboratorium för parasiter (EURLP) och den tyska referenslaboratorium för trikiner.
Även magnetomröraren metod kan lätt utföras, inte strikt följa tekniska detaljer leder till otillräcklig känslighet, vilket äventyrar konsumenternas hälsa. De kritiska kontrollpunkter har lyfts fram i texten ovan. Dessutom är avgörande för det framgångsrika resultatet av testet användning av lämplig utrustning. Alla fartyg bör vara gjorda av glas och pipettspetsar belagda med kisel för att minska vidhäftning av larver till ytan.
Känsligheten hos matsmältningen metod beror på larvtätheten i musklerna och mängden muskelprov testas. För en larv densitet av 3-5 LPG av muskelvävnad ades en känslighet på 100% rapporterade, men under en lpg känsligheten sjönk till 40% 13. Beroende på de testade värddjurarter, kan känsligheten av testet förbättras genom att öka mängden använt prov. den infection börda på vilt är vanligtvis låg, därför större prover storlekar används 14. Predilektionsställena varierar också mellan värddjur. Här är lägre smältbarhet vissa muskelvävnad såsom tungan måste beaktas, vilket även kan leda till större provstorlekar 15.
Vidare är det viktigt att förstå att den magnetiska omröraren metoden är utan interna kontroller. Därför är viktigt kvalitetsstyrning försäkran från provtagning till dokumentation för att erhålla exakta och precisa resultat. Kvaliteten på laboratorie prestanda för att påvisa förekomst av trikiner larver i muskelprover bör övervakas genom regelbundet deltagande av varje analytiker i kompetenstest.
Ytterligare begränsningar med metoden är att den slutliga fasen för identifiering av muskel larver genom mikroskopi är mycket subjektiv och heavily beroende på kunskap om larver morfologi av att undersöka analytiker.
Ett intressant alternativ metod för att kringgå detta problem är den magnetiska omröraren metoden / på filter isolering följt av larver detektering av en latexagglutinationstest. Men enligt EU-lagstiftning denna metod endast anses likvärdiga för testning av kött från tamsvin men inte för djur som löper högre risk för infektion såsom vildsvin 4. Identifieringen av larver antigen med monoklonala antikroppar gör testet mer objektiv, men förnekar laboratoriet möjligheten att bestämma antalet larver per gram kött 16.
Ytterligare variationer av magnetomrörare metoden innefattar mekaniskt assisterad av samlingsprov metod / sedimenteringsteknik, det mekaniskt undersökning av samlingsprover grävaestion metod / på filterisoleringsteknik, och den automatiska matsmältning för samlingsprover på upp till 35 g teknik. Dessa tekniker är alla baserade på den konstgjorda nedbrytning av kött och visualisering och räkning av Trichinella larver, men skiljer sig i den utrustning som används för filtrering och sedimenteringssteg.
Det isolerade larver kan identifieras ytterligare på artnivå genom en molekyl testet (t.ex., multiplex PCR) 17. Enligt EU-lagstiftningen måste alla positiva prover vidarebefordras till det nationella referenslaboratoriet eller EURLP för trikiner artbestämning.
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar vänligt Sabine Reckinger för utmärkt tekniskt bistånd och stöd.
Knife,Scissors, Tweezers | Cutting samples and removing non-digestible tissue | ||
Blender | With a sharp chopping blade | ||
Magnetic stirrer | With thermostatically controlled heating plate | ||
Stirring Rod | Teflon-coated, approximately 5 cm long | ||
Conical glass separation funnel | Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation | ||
Stands, rings and clamps | |||
Sieve | Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh | ||
Funnel | Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves | ||
Glass beaker | Capacity 3 litres | ||
Glass measuring cylinder | Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube | ||
Stereo-microscope | With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table | ||
Petri dishes | 9 cm diameter, marked on their undersides into 10 × 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope | ||
Aluminium foil | Alternatively a lid to cover the beakers | ||
25 % hydrochloric acid | |||
Pepsin | Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml | ||
Ethanol | 70-90% ethyl alcohol | ||
Tap water | Heated to 46-48 °C before use | ||
Balance | Accurate to at least 0.1 g | ||
Metal tray | Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice | ||
Pipettes and pipette holder | Different sizes (1, 10 and 25 ml) | ||
Thermometer | Accurate to 0.5 °C, temperature range at least from 20 ° C to 70 ° C | ||
Siphon | For tap water |