CN-GELFrEE - 지우기 기본 젤 - 용출 액체 분수 내포 전기 영동

셀 내에서 일어나고있는 생물학적 과정의 대부분은 단백질 어셈블리보다는 단일 단백질 ^(1)에 의해 수행 될 것으로 생각된다. 결과적으로, 셀의 서브 유닛 단백질의 특정 생물학적 역할을 규명하기 위하여는 ^단지이 다른 단백질 또는 리간드와의 상호 작용의 구조를 이해하는 것이 필요하다. 그러나, 그들의 비공유 상호 작용과 활동을 유지, 기본적으로 단백질을 공부하고, 도전 남아있다. 천연 단백질 연구의 단점 중 하나는 다양한 하류 단백질 분석 기술과 호환되는 적절한 원시 분리 기술이다. 따라서, 생체의 비공유 어셈블리를 특성화 할 수있는 분리 기술에 대한 관심은 최근에 급격히 증가하고있다 ^(3).

단백질 분리 기술은 생화학, 생물 물리학 등 다양한 연구하는 것이 필수적이다. 현재 기본 분리 기술을 intrinsi낮은 해상도, 낮은 처리량, 강수량 감소, 초기 샘플 많은 양의 요구 사항으로 다운 스트림 분석, 호환성을 줄일 C 결핍. 탠덤 친 화성 정제는 일반적으로 단백질 상호 작용 연구를 위해 사용되지만, 그것은 높은 처리량 분석 ^4와 호환되도록한다 각 단백질 타겟에 대해 개별적으로 수행되어야한다. 크기 배제 크로마토 그래피 ⁽⁵⁾ 모두 기본 분리를 제공하지만, 본질적으로 저해상도 기술이며 높은 초기 샘플 량을 필요로 한 이온 친 화성 크로마토 그래피 ⁽⁵⁾ 밀도 구배 분리 ⁶ 선택적 침전.

대안 적으로, 청색 기본 (BN) 및 클리어 네이티브 (CN)과 같은 PAGE 겔 기반 기술 (중 1-D 또는 2-D)는, 고해상도의 분리를 표시. 또한, 다른 기술이 언급 대조, 네이티브 PAGE 분리는 광범위한 연구의 용해도 및 기본 형태를 유지소수성 단백질을 포함하는 고분자 종의 플랜지. 이 기능은 또한 이러한 방법 ^7,8에 의해 도달 프로테옴 범위를 넓혀 및 CN 및 BN-PAGE 사이에 다른 화학을 통해 달성된다. CN-PAGE는 일반적으로 BN-PAGE에서 쿠마 파란색 염료를 대체 캐리어 분자 소프트 충전 세제를 사용합니다. 높은 해상도와 관련된 있지만 BN-PAGE는 이러한 분리 된 단백질 ⁸ 쿠마 분자 부가 형성의 감소 효소 활성,이 후자의 다운 스트림 MS에 크게 편파적 인 ^9를 분석 같은주의 사항이 있습니다. 이 두 가지 방법은, 그러나, 전통적으로 인해 염색 및 젤 추출 제한 ^7을 둘러 복구 및 좁은 프로테옴 범위와 관련이있다.

변성 된 단백질의 연구를 위해이 높은 단백질 회복 고해상도 분별을 행하면서 고분자의 용해도를 유지 몇몇 기술은 다음과 그 D와 호환분리 후 단백질 분석 기술을 iverse. 젤 – 용출 액체 분수 내포 전기 영동 (GELFrEE)는 모든 이러한 특성에 맞게 분류 기법 중 하나입니다. 이 방법은 대부분이 신속하고 다목적 인 것을 나타내는, 높은 처리량 하향식 프로테오믹스 연구에 적용된다. GELFrEE에서 단백질이 변성되고 관형 겔 매트릭스를 통해 분자량에 기초한 분리의 기공율은 샘플 요건 및 원하는 분류 결과에 기초하여 변화 될 수있다. 분획 따라서 고해상도를 유지하면서, SDS-PAGE와 연관된 회수 제한을 감소 액상으로 용출된다. 분획 분액 후 분자량 대역폭 선택 ⁽¹¹⁾ 1-D의 PAGE에 의해 분석 될 수있다. 기본 분리 기술에 GELFrEE과 관련된 이점에 대한 수요가있다. 본원에 기재된 방법은, 클리어 네이티브 GELFrEE (CN-GELFrEE)는 GELFrEE의 네이티브 적응된다. 위해 폭 넓은들과 호환 가능합니다그 나라의 상태에서 거대 분자의 pectrum,이 방법은 소프트 CN-PAGE 화학에뿐만 아니라 불연속 겔 시스템 ^(9)에 존재하는 다공성의 거친 전환을 제거하여 단백질 침전을 감소 다공성 기울기 분리에뿐만 아니라 의존한다. 마우스의 심장으로부터 추출 된 단백질 복합체를 분별에 적용될 때, 용출 된 분획을 회수하고 높은 얻었다 광범위한 분자량 고해상도 분리 표시. 또한, 얻어진 분획 하류 생화학 및 생물 물리학 적 단백질 분석 대부분 호환된다.