使用非整合附加型质粒从冷冻血沉棕黄层诱导多能干细胞的产生

在2006年，该基山中伸弥¹展示首次从成年小鼠和人类体细胞可以通过四种重编程因子（Oct-4的，SOX-2，KLF-4，和异位表达被转换成多能状态c-Myc的），产生了所谓的诱导多能干细胞（iPS细胞^）2。患者特异性的iPSC中的形态，增殖和分化成三胚细胞类型（中胚层，内胚层和外胚层）的能力方面非常类似于人类胚胎干细胞（胚胎干细胞），而缺乏相关的使用人类胚胎干细胞和旁路的伦理问题可能的免疫排斥反应^3。因此，iPS细胞表现为患者特异性的细胞为基础研究，药物筛选，疾病建模，毒性的评价，和再生医学的目的⁴的最重要来源之一。

几种方法已用于iPSC的生成：病毒整合载体（逆转录病毒^5，慢病毒^6），病毒非整合载体（腺病毒^7），仙台病毒^8，BAC座子^9，附加型载体^10，蛋白质¹¹或RNA递送^12。虽然使用病毒介导的方法可导致高效率的重编程，病毒载体整合到宿主细胞，因此潜在随机插入 ​​突变的基因组中，基因表达，和沉默的转基因的再活化的分化过程中的永久改变，不能排除^13。

使iPSCs的安全再生医学，已经作出努力来推导的iPSC未经外源DNA整合到细胞基因组中。虽然应纳税病毒载体和转座子被开发出来，它仍然是不清楚短载体序列，这不可避免地留在切除后的转导的细胞，和转座表达，是否可以诱导改变在细胞ular功能^13。尽管其高重编程效率，仙台病毒代表一种昂贵的方法，并达到通授权的关注与开发的这个系统必须限制其应用在翻译研究的潜力公司。此外，需要对直接引入蛋白质和RNA的需要多个递送重新编程分子的固有技术局限性此介绍的，和总重编程效率是非常低的^14。值得注意的是，具有成本效益的基础上，利用附加型质粒的病毒-自由和非整合的方法已被成功地报道了皮肤成纤维细胞¹⁵的再编程。具体而言，在本工作中，我们决定使用市售集成无附加型质粒，如先前报道^10,15。

迄今为止，皮肤成纤维细胞代表了最流行 ​​施主小区类型^5。然而，其他细胞来源已经更迭sfully重编程为iPS细胞包括角质形成细胞^16，骨髓间充质干细胞^17，脂肪基质细胞^18，毛囊¹⁹与牙髓细胞^20。这些细胞的分离，需要外科手术，并以建立原代细胞培养，需要在体外细胞扩增几个星期。

有鉴于此，起始细胞类型的选择是至关重要的，但同样重要的是能够从方便和较少侵入性的组织，例如血液产生的iPSC。两个脐带血单核细胞^{（CBMNCs）21,22}和外周血单核细胞（外周血单个核细胞^）14,22-24表示细胞为iPS细胞的推导合适来源。

虽然成人PBMNC重编程的效率比CBMNCs ²²的低20-50倍，它们仍然是最方便的细胞类型为取样目的。在事实上，PBMNC取样有被微创的优点，此外，这些细胞不需要重新编程实验之前在体外广泛扩展。迄今为止，不同的协议已经报道，密度梯度分离后外周血单个核细胞可冷冻后冷冻和解冻天至数月并重新编程成iPS细胞^22,23之前膨胀为几天。然而，就我们所知没有报道描述从冷冻的血沉棕黄层外周血单个核细胞的重编程。重要的是，没有密度梯度分离收集冷冻棕黄色大衣代表存储在从人口研究大型生物库，从而代表材料的生产的iPSC以避免进一步的样品采集的方便池中最常见的血液样本。

此处我们报告首次病毒无iPSCs的产生来自人类冷冻血沉棕黄层，根据先前描述的方案^22。在此外，从密度梯度分离之后得到的冷冻外周血单个核细胞生成的iPSCs，对于非密度梯度纯化PBMNC结果的控制协议。