Summary

Själv montering av komplexa Tvådimensionella former från Single DNA Tiles

Published: May 08, 2015
doi:

Summary

DNA tiling is an effective approach to make programmable nanostructures. We describe the protocols to construct complex two-dimensional shapes by the self-assembly of single-stranded DNA tiles.

Abstract

Current methods in DNA nano-architecture have successfully engineered a variety of 2D and 3D structures using principles of self-assembly. In this article, we describe detailed protocols on how to fabricate sophisticated 2D shapes through the self-assembly of uniquely addressable single-stranded DNA tiles which act as molecular pixels on a molecular canvas. Each single-stranded tile (SST) is a 42-nucleotide DNA strand composed of four concatenated modular domains which bind to four neighbors during self-assembly. The molecular canvas is a rectangle structure self-assembled from SSTs. A prescribed complex 2D shape is formed by selecting the constituent molecular pixels (SSTs) from a 310-pixel molecular canvas and then subjecting the corresponding strands to one-pot annealing. Due to the modular nature of the SST approach we demonstrate the scalability, versatility and robustness of this method. Compared with alternative methods, the SST method enables a wider selection of information polymers and sequences through the use of de novo designed and synthesized short DNA strands.

Introduction

Föregående nukleinsyra självmonteringsarbete 1-25 har lett till den framgångsrika konstruktionen av en mängd olika komplexa strukturer, inkluderande DNA 2 – 5,8,10 – 13,17,23 eller RNA 7,22 periodisk 3,4,7, 22 och algoritmisk 5 tvådimensionella gitter, band 10,12 och rör 4,12,13, 3D-kristaller 17, Polyhedra 11 och ändliga, formar 2D 7,8. En särskilt effektiv metod är bygga ställning DNA origami, varigenom en enda byggnadsställning sträng viks med många korta hjälpstapel strängar för att bilda ett komplex form 9,14 – 16,18 – 21,25.

Vi rapporterade nyligen en metod för att konstruera diskreta nanostrukturer med föreskrivna 2D former med enkelsträngade plattor (SST), och visade strukturer med komplexitet jämförbar med DNA-origami 26. Denna article är en anpassning av vårt tidigare arbete 26 och beskriver i detalj protokoll för att ordna individuellt adresserbara specialverktygen till avancerade finita 2D former med exakt föreskrivna dimensioner (bredder och längder) och morfologier. En viktig fördel med SST-metoden är dess modularitet. Varje komponent SST av en struktur fungerar som en modulär konstruktion enhet i församlingen, och olika undergrupper av dessa specialverktygen producerar olika former. Därför har vi etablerat en allmän plattform för att bygga nanostrukturer med föreskrivna storlekar och former från korta, syntetiska DNA-strängar.

Specialverktygen innehåller fyra domäner, vardera 10 eller 11 nukleotider lång (Figur 1A). De specialverktygen binder så att deras parallella spiraler skapa en DNA-gitter hålls samman av crossover bindningar. Varje crossover är fosfat mellan domänerna 2 och 3. Fosfat sträckes artificiellt i diagrammen för visuell klarhet. De delning är placerade två spiralvarv (21 baser) från varandra (<stark> Figur 1B). Komposit rektanglarna betecknas med sina mått av antalet spiraler och spiralvarv. Till exempel, som är en rektangel sex spiraler bred och åtta spiral vänder lång refereras som en 6H × 8T rektangel. Specialverktygen kan lämnas ut, tillade eller på annat sätt om för att skapa strukturer för godtyckliga former och storlekar (Figur 1C). Exempelvis kan en rektangulär utformning rullas till ett rör med en önskad längd och radie (Figur 1D).

Alternativt kan den rektangulära SST gitter ses som en molekylär duk som består av SST pixlar, vardera 3 nm genom 7 nm. I denna studie använder vi en molekyl duk av 310 fullängds interna specialverktygen, 24 fullängdsspecialverktygen som utgör de vänstra och högra gränser och 28 halv längd specialverktygen som bildar de övre och nedre gränser. Duken har 24 dubbelspiraler kopplade genom delning och varje helix innehåller 28 spiralvarv (294 baser) och därför kallas24h × 28T rektangulär duk. 24H × 28T duk har en molekylvikt liknande den hos en DNA origami struktur skapas från en M13-fag byggnadsställning.

Protocol

1. DNA-sekvens design Använd UNIQUIMER programvara 27 att utforma en SST-ändlig struktur genom att ange antalet dubbelspiraler, längder av övre och nedre spiralen för varje dubbelspiral, och crossover mönster för att skapa en 24H × 28T duk. Efter att definiera dessa parametrar är den övergripande strukturen (sträng sammansättning och komplementaritet överenskommelse) illustreras grafiskt i programmet. Generera sekvenser för delar av den angivna strukturen för att möta komp…

Representative Results

Den självorganisering av specialverktygen (figur 1) kommer att ge en 24 H × 28T rektangel, såsom visas i fig 2. DNA-sekvenser för de olika specialverktygen kan modifieras / optimeras för att möjliggöra streptavidin märkning (fig 3 och 4), omvandlingen av en rektangel i ett rör (Figur 5), den programmerbara självorganisering av specialverktygen för att bilda rör och rektanglar av varierande storlekar (Figur 10),</stro…

Discussion

I strukturen bildningssteget, är det viktigt att hålla en lämplig koncentration av magnesiumkatjoner (t.ex.., 15 mM) i DNA-strängen blandningen egen montera DNA nanostrukturer. Även i agarosgelen karakterisering / reningssteg, är det viktigt att hålla en lämplig magnesium katjonkoncentration (t.ex.., 10 mM) i gelén och gelén kör buffert för att bibehålla DNA nanostrukturer under elektrofores. För 24H × 28T rektangel struktur, testade vi glödgning i olika Mg ++ koncentrationer…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Detta arbete har finansierats av Office of Naval Research Young Investigator Program Award N000141110914, Office of Naval Research Grant N000141010827, NSF KARRIÄR Award CCF1054898, NIH direktörens Nya Innovator Award 1DP2OD007292 och en Wyss Institutet för biologiskt inspirerade LTH Startup fonden (till PY) och Tsinghua-Peking Center for Life Sciences Startup fonden (BW).

Materials

Name of Material/ Equipment Company Catalog Number Comments/Description
DNA Strands  Integrated DNA Technology Section 3.1
SYBR Safe DNA gel stain Invitrogen S33102 Section 3.4.2
Freeze'N Squeeze DNA Gel Extraction Spin Columns BIO-RAD 731-6166 Section 3.6
Bruker's Sharp Nitride Lever Probes Bruker AFM Probes SNL10 Section 4.3
Safe Imager 2.0 Blue Light Transilluminator Invitrogen G6600 Section 3.6
Centrifuge 5430R Eppendorf 5428 000.414 Section 3.6
Transmission Electron Microscope  Jeol Jem 1400 Section 7.4
Multimode 8 Veeco Section 4
Typhoon FLA 9000 Laser Scanner GE Heathcare Life Sciences 28-9558-08 Section 3.5
Ultrapure Distilled water Invitrogen 10977-023 Section 3.7.1
Mica disk SPI Supplies 12001-26-2 Section 4.1
Steel mounting disk Ted Pella, Inc. 16218 Section 4.1
carbon coated copper grid for TEM Electron Microscopy Sciences FCF400-Cu Section 7.2
tweezers Dumont 0203-N5AC-PO Section 7.31
glow discharge system Quorum Technologies K100X Section 7.2
DNA Engine Tetrad 2 Peltier Thermal Cycler BIO-RAD PTC–0240G Section 3.3
Owl Easycast B2 Mini Gel Electrophoresis Systems ThermoScientific B2 Section 3.4.3
Seekam LE Agarose 500G Lonza 50004 Section 3.4.1
GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder, Ready-To-Use 75-20000bp ThermoScientific SM1333 Section 3.4.4
Nanodrop 2000c UV-vis Spectrophotometer ThermoScientific Section 3.7
0.2 um filter Corning Inc. 431219 Section 7.1.2

Referências

  1. Seeman, N. C. Nucleic acid junctions and lattices. J. Theor. Biol. 99 (2), 237-247 (1982).
  2. Fu, T. J., Seeman, N. C. DNA double-crossover molecules. Bioquímica. 32 (13), 3211-3220 (1993).
  3. Winfree, E., Liu, F., Wenzler, L. A., Seeman, N. C. Design and self-assembly of two-dimensional DNA crystals. Nature. 394 (6693), 539-544 (1998).
  4. Yan, H., Park, S. H., Finkelstein, G., Reif, J. H., LaBean, T. H. DNA-templated self-assembly of protein arrays and highly conductive nanowires. Science. 301 (5641), 1882-1884 (2003).
  5. Rothemund, P. W. K., Papadakis, N., Winfree, E. Algorithmic self-assembly of DNA Sierpinski triangles. PLoS Biol. 2 (12), e424 (2004).
  6. Shih, W., Quispe, J., Joyce, G. A 1.7-kilobase single-stranded DNA that folds into a nanoscale octahedron. Nature. 427 (6975), 618-621 (2004).
  7. Chworos, A., et al. Building programmable jigsaw puzzles with RNA. Science. 306 (5704), 2068-2072 (2004).
  8. Park, S. H., et al. Finite-size, fully-addressable DNA tile lattices formed by hierarchical assembly procedures. Angew. Chem. Int. Ed. 45 (5), 735-739 (2006).
  9. Rothemund, P. W. K. Folding DNA to create nanoscale shapes and patterns. Nature. 440 (7082), 297-302 (2006).
  10. Schulman, R., Winfree, E. Synthesis of crystals with a programmable kinetic barrier to nucleation. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 104 (39), 15236-15241 (2007).
  11. He, Y., et al. Hierarchical self-assembly of DNA into symmetric supramolecular polyhedra. Nature. 452 (7184), 198-201 (2008).
  12. Yin, P., et al. Programming DNA tube circumferences. Science. 321 (5890), 824-826 (2008).
  13. Sharma, J., et al. Control of self-assembly of DNA tubules through integration of gold nanoparticles. Science. 323 (5910), 112-116 (2009).
  14. Douglas, S. M., Dietz, H., Liedl, T., Högberg, B., Graf, F., Shih, W. M. Self-assembly of DNA into nanoscale three-dimensional shapes. Nature. 459 (7245), 414-418 (2009).
  15. Andersen, E. S., et al. Self-assembly of a nanoscale DNA box with a controllable lid. Nature. 459 (7243), 73-76 (2009).
  16. Dietz, H., Douglas, S. M., Shih, W. M. Folding DNA into twisted and curved nanoscale shapes. Science. 325 (5941), 725-730 (2009).
  17. Zheng, J. P., et al. From molecular to macroscopic via the rational design of self-assembled 3D. DNA crystal. Nature. 461 (7260), 74-77 (2009).
  18. Han, D., et al. DNA origami with complex curvatures in three-dimensional space. Science. 332 (6024), 342-346 (2011).
  19. Liu, W., Zhong, H., Wang, R., Seeman, N. C. Crystalline two-dimensional DNA origami arrays. Angew. Chem. Int. Ed. 50 (1), 264-267 (2011).
  20. Zhao, Z., Liu, Y., Yan, H. Organizing DNA origami tiles into larger structures using preformed scaffold frames. Nano Lett. 11 (7), 2997-3002 (2011).
  21. Woo, S., Rothemund, P. Programmable molecular recognition based on the geometry of DNA nanostructures. Nat. Chem. 3 (8), 620-627 (2011).
  22. Delebecque, C. J., Lindner, A. B., Silver, P. A., Aldaye, F. A. Organization of intracellular reactions with rationally designed RNA assemblies. Science. 333 (6041), 470-474 (2011).
  23. Lin, C., Liu, Y., Rinker, S., Yan, H. DNA tile based self-assembly: building complex nanoarchitectures. ChemPhysChem. 7 (8), 1641-1647 (2006).
  24. Seeman, N. C. Nanomaterials based on DNA. Annu. Rev. Biochem. 79 (1), 65-87 (2010).
  25. Voigt, N. V., Nangreave, J., Yan, H., Gothelf, K. V. DNA origami: a quantum leap for self-assembly of complex structures. Chem. Soc. Rev. 40 (12), 5636-5646 (2011).
  26. Wei, B., Dai, M., Yin, P. Complex Shapes self-assembled from single stranded DNA tiles. Nature. 485 (7400), 623-626 (2012).
  27. Wei, B., Wang, Z., Mi, Y. Uniquimer: software of de novo DNA sequence generation for DNA self-assembly: an introduction and the related applications in DNA self-assembly. J. Comput. Theor. Nanosci. 4 (1), 133-141 (2007).
  28. Seeman, N. C. De novo design of sequences for nucleic acid structural engineering. J. Biomol. Struct. Dyn. 8 (3), 573-581 (1990).
  29. Hansma, H. G., Laney, D. E. DNA binding to mica correlates with cationic radius: assay by atomic force microscopy. Biophys. J. 70 (4), 1933-1939 (1996).
  30. Seelig, G., Soloveichik, D., Zhang, D. Y., Winfree, E. Enzyme-free nucleic acid logic circuits. Science. 314 (5805), 1585-1588 (2006).
  31. Yin, P., Choi, H. M. T., Calvert, C. R., Pierce, N. A. Programming biomolecular self-assembly pathways. Nature. 451 (7176), 318-322 (2008).
check_url/pt/52486?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Wei, B., Vhudzijena, M. K., Robaszewski, J., Yin, P. Self-assembly of Complex Two-dimensional Shapes from Single-stranded DNA Tiles. J. Vis. Exp. (99), e52486, doi:10.3791/52486 (2015).

View Video