시냅스 전달은 매우 신속하고 정확한 과정이다. 시냅스 터미널의 활동 전위 침공 릴리스 얼굴 막, 연접 칼슘의 결과 증가 ^{2 +} 소포 융합과 신경 전달 물질의 방출 ^하나의 트리거 역할에있는 VGCCs의 개방에 연결됩니다. 이러한 모든 단계는 ^{마이크로이} 수백 내에서 발생하고, 따라서 소포 융합 기계 ³ VGCCs의 꽉 공간 커플 링을 필요로한다. 시냅스 ^칼슘 이온 플럭스는 주로 ^칼슘에 민감한 염료 ^사를 사용하여 접근 방법 영상을 특징으로하고있다. 시냅스 전 뉴런에서 ^칼슘을 혼입 변조 ^칼슘 버퍼 간접적 시냅스 신경 전달 칼슘과 ³ 사이의 관계를 특성화하는 데 사용되어왔다. 또한, ^{칼슘 5} uncaging 또는 macroscopi을 기록하여 시냅스 무료 ^칼슘 농도를 조절칼슘 ^{2 +} c를 전류 소포 융합 및 / 또는 방출의 측정과 관련하여 사용되었다; 이러한 정전 용량을 측정으로 ⁶ 시냅스 응답은 같은 질문을 해결하기 위해 ^2. 시냅스 소포의 융합과 신경 전달 물질의 방출을 유발 ^{2 +} 전류 그러나, 릴리스 얼굴 ^{2 +} 전류를 직접 칼슘의 특성, 막 탈분극이 캘리포니아로 번역 된 시냅스 막의 전문 섹션은 칼슘의 정확한 측정을 얻기에 필수적이다 ^{2 +} 시냅스 소포의 융합에 대한 요구 사항. 게다가, 능력이 직접 활동 전위의 시간 경과 간의 타이밍 관계의 정확한 해명이 소포 융합 및 릴리스 정확한 동시 측정을 가능 결합 개별 시냅스 말단에 ^칼슘 이온 전류의 특성을, 연접 ^칼슘 전류 소포의 융합 및 릴리스. 릴리스 얼굴 막에 대한 액세스시냅스 돌기에 의해 동격를 닫 인해 시냅스 터미널의 대부분에서 사용할 수 없습니다. 그것은 개별 시냅스 터미널에서 전류의 직접 측정을 방지 때문에 어려움은 VGCCs의 특성에 큰 장애물이되고있다. 개별 시냅스 터미널에서 시냅스 ^칼슘 전류의 직접 특성은 지금까지 중앙 시냅스 가능되지 않았으므로 및이 calyceal 형 시냅스 터미널에서 달성되었습니다; 병아리 섬모 신경절 ^7-10 쥐 꽃받침 ^{11, 12의} 꽃받침 형 시냅스. 심고 척수 ¹³ 거 reticulospinal 시냅스 포함한 모든 다른 시냅스 단자에서 시냅스 전 방출면 막에 대한 액세스의 부족은 시냅스 ^칼슘 플럭스 공부 ^칼슘 촬상 간접 방식의 사용을 필요로했다.

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dorso – 복부 방향을 나타내는 칠성 장어의 척수의 그림 1 장어 거대한 reticulospinal 시냅스. () 단면. Reticulospinal 축삭 녹색 별표로 표시되어 있습니다. 시냅스 후 뉴런 ⁽¹³⁾ 상 (녹색 화살표로 표시) 시냅스 reticulospinal 축삭 옆모습 연락처 엔 수많은 결정을 보여주는 칠성 장어의 척수 reticulospinal 시냅스의 (b)는 3-D 재건. 시냅스 후 뉴런이 알렉사 플 루어 568 하이 드라 지드 (적색)로 가득하고있는 동안 시냅스 터미널, 알렉사 플 루어 488 하이 드라 지드 복합 phalloidin (녹색)으로 표시되어있다.

의 신경 세포에 옆모습 연접 엔 척추 주동이의 – 꼬리 축 그림 1a에 코드 병렬 형태의 다중의 복부 지역에 위치한 칠성 장어 거인 reticulospinal 축삭,척추 복부 혼 ⁽¹⁴⁾ 그림 1b ^13. 육안 전체 세포 ^칼슘 전류는 그대로 척수 ^{(13, 15)에} reticulospinal 축삭에서 기록되었다. 그러나, 칼슘의 직접 측정에서 이전 블라인드 시도는 세포 부착 패치 클램프 기술을 이용하여 그대로 심고 척수 reticulospinal 축삭에서 ^{2 +} 전류 인해 대향 시냅스 프로세스에 의해 시냅스 전 방출면 막 액세스 부족 ¹³ 실패 입증 그림 1b. 릴리스 얼굴 막은 이전에, 시냅스의 기계적 교란 전에 ^12를 기록, 기계적 해리 ^(16)와 결합 효소 처리 시냅스 후 뉴런 ^(11)의 제거에 의해 액세스 가능하게되었습니다. 척수의 복합 조직 감안할 때 시냅스 후 뉴런을 식별하고 그것을 기계적으로 후퇴 또는 일을 교란하는 것은 매우 어려울 것이다전자 시냅스. 따라서, 우리는 기계 해리 다음 효소 처리 ^(17)를 사용하기로 결정했다.

이 방법을 사용하여, 우리는 이에 개별 시냅스 터미널에 대한 무제한 액세스를 제공하는 시냅스 프로세스의없는 기능 시냅스 터미널 가능한 격리 reticulospinal 축색 돌기를 산출 칠성 장어의 척수의 급성 해리 준비를 개발했다. 표준 도립 현미경 및 형광 이미징과 결합에서, 세포 -을 사용하여 기록, ^칼슘 이온 전류도 4C 및도 4D를 분리하는 기록 액을 함유하는 패치 피펫, 식별 및 개별 형광 식별 된 시냅스 전 단말을 대상으로 미국있게 연결된 전압 클램프 기법. ^칼슘 전류는 개별 시냅스 터미널 그림 4 층의 시냅스 릴리스 얼굴 막에 직접 기록하고있다. 이 significa입니다그것이 중앙 시냅스에서 수행되는 최초의 기록이기 때문에 NT 시냅스 전달의 필드 돌파구.