完全性脊髓损伤和脑解剖协议后续Wholemount<em>原位</em>杂交苗种海七鳃鳗

在哺乳动物脊髓损伤（SCI）是一种破坏性的条件，导致的损伤部位以下功能永久性丧失，因为受伤的轴突不需要通过创伤区再生和重新连接到适当的目标。相反，哺乳动物，七鳃鳗恢复完全性脊髓损伤后运动^。1有趣的是，七鳃鳗有一套36脊髓投射神经元是单独识别整个安装，因为他们的大尺寸^2,3（ 图1）脑准备。所有这些脊髓投射神经元是由一个高层次的脊髓完全横断金黄地鼠。我们的组和其他的以前的研究已经表明，即使在功能恢复脊髓损伤后某些神经元表现出非常低的再生能力的存在（它们被认为是“坏的蓄热室”），而其他通常通过损伤部位再生的轴突（他们被认为是“GOOD再生^“）。2,3这种特性使得七鳃鳗有趣脊椎动物模型来研究在好的和坏的再生脊髓投射神经元，这反过来会导致神经元的企图的固有再生能力的差异之间基因表达的差异再生的轴突在同一外在环境^。1

利用该模型，我们以前曾表明，脊髓投射神经元的轴突与导向分子受体如UNC5 ^4,5和^neogenin，6分别介导netrin诱导和RGM的抑制作用，低蓄热能力秀的表情。此外，通过使用这个方法，我们小组还表明，只有在良好的蓄热表明神经丝的表达的恢复的损伤后和在再生过程。最近，布希和摩根⁷表明，免疫荧光，坏再生器显示的increas突触核蛋白的表达主编受伤后，已经涉及了作者这一事实，即“坏再生”脊髓投射神经元脊髓完全横断^5,7,8后慢慢死去。因此，一个完整的脊髓损伤的七鳃鳗的模型已经成为一个非常有用的模型，以了解是什么造就了脊髓神经元投射一个“坏再生”切断后。

进行我们的研究，我们在期望的时间点执行一个完整的脊髓横断手术协议和后脑部解剖损伤后原位杂交执行wholemount。在本方法的文章中，我们提出了一个详细的协议为完全性脊髓损伤手术在七鳃鳗幼体的正常性能，后续维护动物和最终大脑解剖和准备的大脑原位杂交wholemount。一份详细的协议，PErform原位杂交的wholemount在幼虫七鳃鳗的大脑已经被报告过^。9另外，该协议用 ​​于脊髓损伤和脑解剖也可用于再加工的大脑用于免疫组化分析或其他组织学方法。