هذا البروتوكول يحدد الصيانة الدورية والرعاية للحفاظ على الظروف المثلى لتربية اسماك الزرد. شريط الفيديو يوضح البروتوكول لصيانة النظام والإسكان العادية، والتغذية، والتربية، وتربية اليرقات الزرد.
يصف هذا البروتوكول الرعاية العادية وصيانة مختبر الزرد. الزرد تكتسب شعبية الآن في مجال علم الوراثة والبحوث الدوائية والسلوكية. كما من الفقاريات، تستخدم الزرد حصة كبيرة التشابه الجيني مع البشر تسلسل وكنموذج للحيوانات لمختلف الحالات المرضية البشرية. مزايا الزرد بالمقارنة مع غيرها من نماذج الفقارية شيوعا تشمل الخصوبة العالية، وانخفاض تكاليف الصيانة والأجنة شفافة، والتطور السريع. نظرا لحفز الاهتمام في البحوث الزرد، والحاجة إلى إنشاء والحفاظ على الإنتاجية مرفق الإسكان الزرد في تزايد أيضا. على الرغم من أن الأدب هو متاح لصيانة مختبر الزرد، وبروتوكول الفيديو موجزة غير متوفرة. هذا الفيديو يوضح البروتوكول العادية للسكن، تغذية، تربية اليرقات وتربية الزرد. هذه العملية سوف تساعد الباحثين على فهم السلوك الطبيعية والظروف المثلى لzebrafisح تربية، وبالتالي استكشاف الأخطاء وإصلاحها التجريبية التي تنشأ من ظروف تربية الأسماك. وهذا البروتوكول تكون عونا للباحثين تخطط لإنشاء مختبر الزرد، وكذلك لطلبة الدراسات العليا الذين يعتزمون استخدام الزرد ونموذج حيواني.
الزرد تنبع من نهر الجانج في شمال الهند وأصبحت شعبية في البحث في البالغين على حد سواء ومراحل اليرقات 2، التي استعرضها سبنس وآخرون. 3. الزرد تمتلك العديد من المزايا نماذج حيوانية أخرى مثل الخصوبة العالية، سهولة الصيانة، وإزالة البصرية الأجنة، التطور الجنيني السريع، وانخفاض تكاليف الصيانة. فهي قابلة للتلاعب الجيني 6 و مناسبة لفحص المخدرات عالية الإنتاجية 4،5. الإخصاب الخارجي الذي هو من هو مفيد للاستخدام من قبل علماء البيولوجيا التطورية. بسبب هذه الخصائص مواتية، الزرد تكتسب شعبية في مجال علم الوراثة 7، الدوائية 8، والبحوث السلوكية 9،10. هناك عدد من التحديات في الحفاظ على منشأة الزرد وتربية الزرد للحصول على الأجنة. هنا، نحن تصف تجاربنا والتوصيات في التصدي لهذه التحديات وسutline بروتوكول لصيانة النظام، والتغذية، وتربية وتربية اليرقات.
نظام الصيانة
للحفاظ على الزرد في حالة صحية جيدة، من المهم أن توفر لهم بيئة نظيفة في نظام الحوض يعمل بشكل صحيح. جزء مهم من هذا هو تغيير النظام بحيث الفلاتر بانتظام أن جميع الدبابات تلقي السليم تدفق المياه والمياه النظيفة. فمن الأهمية بمكان لتجنب فشل الدراجات إمدادات المياه إلى خزان كل ذلك بسبب أنابيب نظام المحظورة. يمكن تنظيفها باستخدام أنابيب تدفق أعلى من ضغط المياه العادية، وإذا لم يحدث انسداد. من الناحية المثالية، ينبغي الاستعاضة حوالي 10٪ من المياه يوميا للنظام جيد للحفاظ على نوعية المياه. وبدلا من ذلك، يمكن استبدال الماء أثناء تغيير علبة أو فلتر الكربون. وهذا يضمن أن تتم إزالة الأوساخ المودعة في الأنابيب التي تربط هذه الفلاتر. يجب فحص نوعية المياه على أساس منتظم. المعلمات مثل درجة الحموضة، القلوية، temperatوينبغي النظر لدى عودتهم، والصلابة، والأمونيا، والأكسجين الذائب، الملوحة، والتوصيل من العوامل الهامة في تمثيل نوعية المياه النظام (انظر الجدول 2 لمزيد من التفاصيل). في أقل تقدير النترات، ينبغي رصد درجة الحموضة، ودرجة الحرارة على أساس منتظم لضمان نوعية جيدة للمياه الزرد الإسكان. نترات المثالي (NO 3 -) مستويات <50 ملغ / L 11، وإذا كان يمكن تقليل ارتفاع هذه المستويات من خلال استبدال الماء في نظام تداول مع المياه العذبة نظام. في بعض الأحيان، فلاتر لا يتناسب تماما وتسرب ذلك فمن المستحسن للتحقق من أي تسرب بعد تغيير الفلتر. إذا تم حظر تدفق المياه من الخزان الرئيسي إما بعد تغيير مضخة المياه أو تغيير عامل تصفية، يمكن استعادة تدفق المياه من قبل أي من تخفيف أو إزالة عامل التصفية لبضع ثوان لإطلاق سراح أي فراغ يتم إنشاء في الأنابيب. يمكن الوقت المطلوب لتغيير الفلاتر تختلف تبعا لعوامل مختلفة مثل مجموع س تحميل البيولوجيةن تودع النظام والنظافة من الفلاتر الأخرى، والأوساخ في الأنابيب. وبالتالي، ينبغي على الفور المرشحات يمكن تغييره إذا تظهر قذرة أو إذا كانت كافة الدبابات لا يحصلون على إمدادات المياه الصحيح. ويوصى أيضا أن يتم تنظيف السمك الصافي مع الايثانول 70٪، وتشطف في ماء لتطهير لها، ويترك ليجف قبل إعادة استخدامها. التجفيف يضمن تبخر الإيثانول الذي هو على خلاف ذلك سامة للأسماك.
معظم النظم استخدام الزرد دي المكلورة ماء الصنبور، ولكن بعض النظم استخدام الماء منزوع الأيونات. من المهم للحفاظ على التوصيل للمياه نظام ما بين 300 و 1500 ميكرو ثانية ~ وهذا يقلل من الطاقة للحفاظ على الأسماك يحتاج أملاح الجسم. لذلك، لا يمكن أن يوضع في الزرد المياه منزوع الأيونات ما لم تتم إضافة الأملاح للحفاظ على مستويات التوصيل الأمثل. هناك خطر من الممكن تركيزات عالية من النحاس في الماء إذا تم استخدام نظام مياه الحنفية لأن فلتر الكربون لا يزيل النحاس. ولذلك، شيجب التحقق من وجود تركيزات السرس النحاس والنحاس الأنابيب تجنب حيثما أمكن ذلك.
تغذية
لا ينبغي أبدا أن نفرط الزرد لأن هذا قد يزيد من مستوى النترات في المياه، مما يؤثر على تكاثرها وربما 11 أو جدوى، حيث أن بعض الأسماك قد يموتون بسبب الإفراط في تناول الطعام. لا نوصي توفير المزيد من الغذاء خلال أي من التغذية 1 دبابة من الأسماك يمكن أن تنتهي في غضون 10 دقيقة. من المهم جدا لإزالة الملح من الماء المالح الروبيان قبل إطعامهم إلى الزرد وزيادة تركيز الملح يسبب الموت. إذا كانت هناك حاجة البيض أكثر الزرد، يمكن تناول السمك ثلاث مرات في اليوم. تنظيف خزانات الأسماك المربي يوميا يحسن أيضا مستويات إنتاج البيض.
عندما يتغذى على أنظمة الموائل المائية ننتقل عادة قبالة مضخة مياه ومضخة الهواء للسماح للأسماك لتناول الطعام لمدة 10 دقيقة. هذا يقلل من كمية الطعام التي يتم غسلها في الفلاتر. ومع ذلك، يجب على المستخدمين توخي الحذر لعينييعيرها لتشغيل هذه المضخات بعد ذلك مرة أخرى.
تربية
وعادة ما تكون في الزرد حالة تربية الأمثل بين ~ 3 و 18 شهرا من العمر. لا ينبغي أن يؤديها تربية البشرى ليومين متتاليين 11؛ ومع ذلك، يمكن لا يمكن أن يؤديها في تربية اليومي للدبابات ودبابة عقد العديد من الأسماك مما يقلل من فرصة للزوج نفسه من الأسماك التي تربى لمدة يومين على التوالي. وينبغي الاضطلاع تربية على فترات منتظمة حتى لو لم يطلب البيض. وسوف تضمن هذه العملية هو الحفاظ على دورة تربية الأسماك. فمن المستحسن أن هناك أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء. ذكر الزرد تغيير شريكاتهم على أساس يومي لمدة 12 الذي يدعم المزيد من هذه التوصية. وعلاوة على ذلك، في غضون مختبرنا عانينا في البداية مشاكل مع تربية، ومع ذلك، باستخدام أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء ساعدت في حل المشكلة. وعلاوة على ذلك، والتغذية مع كونتي نسبة عالية من البروتينNT النظام الغذائي والأرتيميا 2-3 مرات في اليوم، والأسماك من الدبابات خلط مختلفة (من الآباء والأمهات مختلفة)، والحفاظ على درجة حرارة تربية انشاء ما بين 27 و 28 درجة مئوية، والضغط على البطون من الإناث مع أنابيب المبيض منعت استخدام تدليك لطيف زيادة تحسين إنتاج البيض. نوصي الاحتفاظ بسجل للخطوط الأسماك / أصول لتجنب في تربية بين الأشقاء. هذا يحسن من إنتاج الجنين. الاحتفاظ بسجل لعدد الأجنة التي وضعتها من كل خزان الأسماك ويوصى أيضا. هذا يساعد في الحفاظ على المسار من الدبابات تربية الأسماك أفضل واتخاذ تدابير لتحسين تربية الأسماك في وضع البيض لا.
تربية اليرقات
يجب تغذية اليرقات تبدأ في الفترة من 5 DPF (أيام الإخصاب آخر). ويمكن تغذية اليرقات الصغيرة مع الأغذية الجافة من ميكرون في الحجم 100 ~ (على سبيل المثال، ZM100) أو غذاء حي مثل المتناعلة والروتيفر (الذي يحفز النمو). يمكن ببطء حجم الطعام يمكن زيادةإلى 200 ميكرون (مثل ZM200) أو 300/400 ميكرون (مثل ZM300). وينبغي أن يكون من السكان البالغين الأسماك تكون حوالي 6-7 الأسماك لكل لتر من الماء. ويوصى هذه الممارسة لتحسين صيانة BOD (الطلب على الأكسجين البيولوجي) إلى الدبابات.
The authors have nothing to disclose.
فإن الكتاب أود أن أشكر تامي اسماعيلي لمساعدتها في إدارة المواد الاستهلاكية المختبرات. AA هو حاصل على منحة دراسية الدكتوراه من مركز التميز لأبحاث مرض الزهايمر والعناية، كلية العلوم الطبية، جامعة إديث كوان. MC يتلقى دكتوراه التمويل بدعم من نادي روتاري، بيرث. AM، وتمول GV، KT، وRNM من مؤسسة أبحاث الزهايمر في كوسكر.
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |