Cuidado y mantenimiento regulares de un pez cebra (<em> Danio rerio</em>) Laboratorio: Introducción

1. Sistema de Mantenimiento El pez cebra se mantienen en un sistema de circulación que continuamente filtros y airea el sistema de agua para mantener la calidad del agua requerida para un medio acuático sano. El sistema de circulación también ayuda a filtrar el exceso de comida y excrementos de peces. Diferentes empresas ofrecen sistemas de pez cebra, pero nosotros usamos sistemas de hábitats acuáticos, Estados Unidos en nuestro laboratorio. La temperatura ambiente o la temperatura del tanque se mantiene generalmente entre 26 a 28.5 ° C y las condiciones de iluminación son 14:10 h (luz: oscuridad). Un sistema de pez cebra de hábitats acuáticos (por ejemplo, sistema de sobremesa) Costos ~ 9.000 USD. Este sistema de mesa con dos estantes puede contener seis 10-litros, doce 3-litros, o veinte tanques 1,5-litros en cada estante. Múltiples líneas de los peces (por ejemplo, transgénico, de tipo mutante y salvaje) también pueden ser alojados en el mismo sistema. Un conjunto de diferentes tipos de filtros se utilizan en el sistema. En nuestro sistema, el agua de todos los tanques de paEPE a través de un 120-micras de bloque de filtro, 50-micras cartucho del filtro filtro, biológica, la absorción de filtro de carbón activo y filtro de desinfección UV antes de ser distribuido de nuevo en el tanque. De-chlorinated/aged agua se utiliza en el sistema de pez cebra. El agua puede ser de-clorado por el envejecimiento durante al menos 48 h. En condiciones ideales, el agua debe mantenerse en un depósito con una bomba de circulación del agua para mantener el calor, y acelerar el de-cloración. El pH del agua del sistema deberá ser comprobado diariamente y se mantiene entre 6,8 y 7,5. Cuando sea necesario, bicarbonato de sodio debe utilizarse para aumentar el pH. Los tanques de peces se debe limpiar con regularidad. Para limpiar un tanque de peces, cerrar el flujo de agua de este tanque, drenar el exceso de agua por la inclinación del tanque hacia atrás y extraer el depósito cuidadosamente del sistema. La suciedad y el crecimiento de algas será evidente en la parte inferior y los lados del tanque. Coloque el deflector en el tanque limpio, y llénelo con agua de cloro (también conocido como Sistema water). Transfiera cuidadosamente los peces en este acuario con una red de pesca. Cerrar la tapa y transferir la etiqueta de nombre del tanque. Coloque con cuidado el tanque limpio en el sistema y conectar el suministro de agua. Para descontaminar la red de pesca, rociar con un 70% de etanol, enjuague con agua y deje que se seque antes de volver a usarlo. Retire el deflector del tanque sucio y pulverizar las dos partes con 70% de etanol. Enjuague bien con agua corriente y deje que el depósito y el deflector se seque completamente antes de volver a usarlo. Los filtros del sistema de circulación tienen que ser revisados ​​y cambiados regularmente para asegurar su correcto funcionamiento. Estos filtros deben ser cambiados regularmente para asegurar un suministro de agua adecuado y limpio para todos los tanques de peces. La almohadilla 120 micras de filtro normalmente se vuelve a colocar o reemplazar diariamente; reposicionar hacia el flujo de agua para utilizar completamente antes de sustituir por uno nuevo. El filtro de cartucho se debe cambiar semanalmente. Para cambiar el filtro de cartucho, retire la unidad del filtro girando hormigaiclockwise con una llave o manos. Coloque una lámina de plástico o una toalla debajo para prevenir o absorber los derrames de agua. Reemplace el filtro de cartucho por uno nuevo y colocar la unidad de filtro de nuevo en el sistema, apriete con cuidado con las manos y una llave si es necesario. El filtro de carbón debe ser cambiado cada dos semanas (cada dos semanas). Para cambiar el filtro de carbón, retire la unidad del filtro de carbono cuidadosamente con una llave. Desechar el carbono activado usado y sustituirlo por nuevo carbono activado. Vuelva a colocar el soporte de carbono y colocarlo de nuevo en la unidad de filtro. Montar la unidad de filtro de nuevo en el sistema. Encender el sistema y comprobar que el agua fluye hacia el filtro. Si es necesario, lavar un poco de agua a través de las tuberías de limpiar la suciedad en las tuberías antes de colocar el filtro en el sistema. El filtro biológico debe limpiarse cada seis meses. Un filtro biológico se encuentra generalmente entre el bote y el filtro de carbono en el sistema de circulación. Para cambiar el filtro biológico, remove la unidad de filtro del sistema. Libere la presión del filtro presionando el botón de liberación de presión. Desenroscar el filtro con una llave. Generalmente se necesitan dos personas para este paso. Retirar la tapa de la unidad de filtro. Vaciar el contenido del filtro en un recipiente tamizaron para separar el siporax del agua. Nota: siporax es una multa de poro bio-filtro medio que tiene la capacidad de realizar tanto la nitrificación y de desnitrificación. Si el siporax es muy sucio reemplazarlo con uno nuevo. Llene el filtro con agua del sistema (de-agua clorada), cierre la tapa, devuelva la unidad al sistema de filtro y conecte el suministro de agua. Nota: En un acuario aclimatado, el siporax será el hogar de varias bacterias nitrificantes. Estos microorganismos son críticos para mantener el ciclo del nitrógeno en el acuario, y la eliminación de la carcasa primaria para el filtro biológico (el siporax sucio) podría dar lugar a un pico de amoniaco grave, seguido de un pico, mientras que el nitrito de new filtro biológico (con siporax nuevo) es el restablecimiento. Ambos de estos estados intermedios del ciclo del nitrógeno puede ser tóxico para los organismos acuáticos y puede matar el pez cebra si no respondieron de forma apropiada. Por lo tanto, es importante disponer de un filtro biológico secundario en otro lugar en el sistema de alojamiento pez cebra (por ejemplo, en el depósito de recogida en el sistema de hábitats acuáticos) para permitir la repoblación rápida de estos microorganismos importantes en la siporax nuevo. Filtros UV se usan para el control de contaminantes biológicos del sistema (como las bacterias) y debe ser reemplazado cada mes nueve-diez. Debe tenerse en cuenta que tipo de filtro UV dosis desinfección es de ~ 110 mJ / cm 2 en el comienzo de la vida de la lámpara y la tasa de dosis disminuye con el transcurso del tiempo, por lo que es necesario sustituir el globo incluso cuando parece ser aún funcional. 2. Alimentación El pez cebra puede ser alimentado con comida seca (tamaño de la comida de 100 micras para t larvaso 300/400 micras para peces adultos) o alimento vivo (artemias). Artemia (Artemia sp.) Huevos están disponibles en tiendas de animales locales y se puede rayar en el laboratorio, siguiendo los sencillos pasos que se describen a continuación. Disolver la sal del mar rojo en agua envejecido mediante la colocación de un vaso de precipitados con sal en un agitador magnético para una mejor solubilidad. Alternativamente, la sal se puede disolver en agua por aireación con el tubo de aireación. Sal Instant Ocean también se puede utilizar como una solución de eclosión si rojo sal marina no está disponible. Camarones de salmuera puede tolerar un amplio rango de salinidad, sin embargo, que eclosionan nuestro artemia (10-15 g) en 30-35 g / L de agua salada del mar rojo. Nota: En el caso de los huevos de artemia no están fácilmente disponibles en las tiendas locales de mascotas luego encapsulados camarones de salmuera también se puede utilizar después de "destapado" en lotes antes de su inclusión en el criadero de camarones. Esto también podría evitar viajes frecuentes a la tienda de mascotas. Llene la nacedora artemia con salt de agua y añadir los huevos de camarones en una concentración de 1,2 cucharadas / litro. Airear la nacedora vigorosamente con una bomba de aire y dejar los huevos de camarones en salmuera para salir del cascarón durante ~ 48 h. Nota: Cabe señalar que un-enriquecido camarón de salmuera perder valor nutricional cada hora después de la eclosión. Por lo tanto, puede ser apropiado para cualquiera de escotilla durante 24 hr o enriquecer más de 48 horas con el fin de obtener el máximo valor nutricional de la gamba de salmuera. Agua residual del sistema de eclosión se añade a los residuos de cuarentena a desinfectar con lejía y dispuesta más adelante. Para recoger los camarones de salmuera, retire el tubo de aire y permitir que la cultura que conformarse con 4-5 minutos pero no más de 10 min. Los camarones de salmuera eclosionados se reúnen en la parte inferior de la Hatcher. Recoger salmuera camarones utilizando el grifo en la parte inferior de la incubadora. Deseche el flujo inicial, que consiste en un-eclosionados los huevos de artemia. <li> Después de desechar los camarones de salmuera no-nacidos, recoger los camarones de salmuera nacidos que serán utilizados como alimento el pez cebra. Separe los camarones de salmuera del agua salada, utilizando una red de recolección de artemia (~ 350 micras de malla de nylon). Lavar los camarones de salmuera de la red en un recipiente con agua del sistema. Las artemias recogidos están generalmente presentes en concentración alta en la parte inferior del recipiente dándole un color más naranja. Pase los camarones de salmuera para el pez cebra con una pipeta o un gotero / squeezy. La cantidad de alimento dispensado depende del tamaño de la población de los tanques individuales. La relación comúnmente aceptado para el pez cebra es recibir 4% del peso corporal en los alimentos por día. Pez cebra nunca deben ser sobrealimentadas ya que esto puede aumentar el nivel de nitrato en el agua, posiblemente afectando su reproducción, o la viabilidad, ya que algunos peces pueden morir debido a comer en exceso. Al inyectar los alimentos en laagua, los peces hambrientos nadar para atrapar a los camarones de salmuera. Alimentación seca se puede realizar usando un ecosistema acuático del / hábitats acuáticos sencillo resorte basada dispensador de alimento para peces. Alternativamente, alimentación seca también se puede realizar utilizando una cuchara simple o cortando un cuentagotas de plástico diagonalmente con tijeras para dar una apariencia de una pequeña cuchara. 3. Cría Pez cebra iniciar la reproducción en el inicio de la luz. Los huevos fertilizados se puede obtener a través de la cría en el tanque de cría o por parejas. Mientras que en el tanque de cría es más mano de obra eficiente y se aplica para la recolección de embriones habitual en nuestro laboratorio, la cría de pares se prefiere cuando los genes o mutaciones deben ser examinados de cada pez. Para la cría en el tanque, instale el reproductor en el tanque y soltar lentamente en el tanque de peces después de la aparición de la luz. Por otra parte, en el tanque de cría de configuración se puede dejar toda la noche en la pecera. Lalero del obtentor en el tanque para alrededor de 15 min para permitir que el pescado para aparearse antes de retirar el criador de la cubeta y la recogida de los huevos. Cría por parejas normalmente se establece por la tarde después de comer. Montar el tanque de cría y llenarlo con agua del sistema envejecido. Transferir una hembra y un macho, a lados opuestos del tanque de cría. Las hembras se pueden distinguir de los hombres, debido a su bajo vientre más grande. Los hombres también se pueden distinguir de las hembras, ya que son más delgados y de color más oscuro que las hembras. Por otra parte, los machos tienen coloración más amarilla de la aleta anal en comparación con las mujeres (ver Figura 1). Cuando está en duda para el aspecto ovipositor en el pez cebra hembra (ver Figura 4). Eliminar el divisor de la mañana siguiente, poco después de la aparición de la luz. Permitir el acoplamiento a ocurrir en reposo durante 20 min o hasta que un número suficiente de embriones se colocan en la parte inferior del tanque. Después de la reproducción,volver a los peces a sus tanques. Recoge los huevos usando un colador. Lavar los embriones a fondo con agua del sistema. Transferir los embriones a una placa de Petri de un enjuague del filtro con medio de embrión; tcc EM3 (NaCl, 13,7 mM; KCl, 0,54 mM; MgSO 4, 1,0 mM; CaCl 2, 1,3 mM, Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM; NaHCO 3, 4,2 mM). Los embriones pueden ser observados bajo el microscopio. Los huevos fertilizados se separan entonces de los huevos no fertilizados utilizando una aguja y una pipeta (véase la Figura 3). 4. Cría de larvas Los huevos fertilizados se mantuvieron en un incubador (~ 28,5 ° C) durante 72 horas hasta que las larvas se incuban. Ahora son las larvas del corion y nadar libremente están listos para transferirse a una pecera principal. Las larvas necesitan ser alimentados de 5 días después de la fertilización (dpf) y se mantienen en medio de embriones (composición descrita en elParte 3, 10) o sistema de agua. Las larvas pueden mantenerse en placas redondas con ~ 50% o más de agua en el mismo cambia sobre una base diaria. El cambio de agua debe incluir la eliminación de larvas muertas o enfermas y cualquier otros desechos. Transferir las larvas suavemente en un tanque que contiene un deflector de tamaño pequeño (de alrededor de 300-400 micras). Larvas muertas y enfermas deberán ser retirados y unos pocos mililitros de agua se debe agregar lentamente sobre una base diaria. Después de 14 días, los tanques de larvas puede ser archivado en el sistema, y ​​se suministra con una pequeña corriente de agua ciclismo (1-2 gotas por segundo). Como las larvas crecen, el flujo de agua puede ser aumentado. Diferentes tamaños de deflectores se pueden utilizar dependiendo del tamaño de las larvas (por ejemplo, tamaño deflector 300-400, 500, 700-750, y micras 1000) y un deflector de plástico normal se debe utilizar para los peces adultos. Por lo general, tarda de 3 meses para que los embriones se conviertan en adultos sexualmente maduros.