Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Viren-und Landwirtschaftsorganisation der Zoonose-Erreger
Summary
Glaswolle-Filter wurden verwendet, um auf Wasserbasis Viren durch eine Reihe von Forschergruppen auf der ganzen Welt zu konzentrieren. Hier zeigen wir einen einfachen Ansatz für den Bau von Glaswolle-Filter und demonstrieren die Filter sind auch wirksam bei der Konzentration des wässrigen virale, bakterielle und Protozoen Pathogene.
Abstract
Der erste wichtige Schritt bei der Bewertung Krankheitserreger im Verdacht verunreinigtes Wasser ist die Konzentration. Konzentration Methoden sind in der Regel spezifisch für einen bestimmten Erreger Gruppe, zum Beispiel US-Umweltbehörde EPA-Methode 1623 für Giardia und Cryptosporidium 1, die mehrere Methoden benötigt werden, wenn die Probenahme-Programm zielt auf mehr als einem Erreger-Gruppe bedeutet. Ein weiterer Nachteil der derzeitigen Methoden ist die Ausrüstung kann kompliziert und teuer sein, zum Beispiel die VIRADEL-Methode mit dem 1MDS Patronenfilter zum Konzentrieren Viren 2. In diesem Artikel beschreiben wir, wie Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Krankheitserreger zu konstruieren. Nach Filterelution, ist das Konzentrat zugänglich einer zweiten Konzentration Schritt, wie Zentrifugation, durch Pathogen Nachweis und zur Zählung von kulturellen oder molekularen Methoden gefolgt. Die Filter haben mehrere Vorteile. Die Konstruktion ist einfach und die Filter kann ein gebaut werdenny Größe für die Erfüllung spezifischer Anforderungen Probenahme. Die Filterteile sind kostengünstig, was es ermöglicht, eine große Anzahl von Proben ohne gravierende Auswirkungen auf ein Projektbudget zu sammeln. Große Volumina (einige 100 bis 1000 s L) können je nach der Höhe des Verstopfens von Probe Trübung konzentriert werden. Die Filter sind sehr portabel und mit minimaler Ausrüstung, wie eine Pumpe und Durchflussmesser, können sie im Bereich für die Probenahme fertigen Trinkwasser, Oberflächenwasser, Grundwasser und landwirtschaftliche Stichwahl durchgeführt werden. Schließlich ist Glaswolle effektive Filtration zum Konzentrieren einer Vielzahl von Erreger-Typen so nur eine Methode erforderlich ist. Hier berichten wir über Filter Wirksamkeit bei der Konzentration des wässrigen menschlichen Enteroviren, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum und Vogelgrippe-Virus.
Protocol
Discussion
Glaswolle-Filter wurden von verschiedenen Forscherteams 3,5,6 benutzt worden, um menschliche enteralen Viren aus einer Vielzahl von Wasser-Quellen wie fertig Trinkwasser 7, 8,9 Grundwasser, Oberflächenwasser 10, Meerwasser 11, 12 Abwasser konzentrieren, und 13 landwirtschaftliche Stichwahl. Hier berichten wir über die Filter sind auch wirksam bei der Konzentration des Vogelgrippevirus sowie die bakterielle und Protozoen Erreger Salmonella enterica (Serova…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken William T. Eckert für das Video erzählt. Die Entwicklung der Glaswolle-Protokoll war ein Teil des Wisconsin Wasser und Gesundheit Testversion für Enteric Risks (WAHTER Study), die von US EPA STAR Stipendium R831630 finanziert. Alaska-Proben wurden von A. Reeves, A. Ramey, und B. Meixell mit finanzieller Unterstützung von USGS gesammelt. Jede Nutzung der Handels-, Produkt-oder Firmennamen ist nur zu beschreibenden Zwecken und stellt keine Billigung durch die US-Regierung.
Materials
| Name of reagent or item | Company | Catalogue number |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | BP359-212 |
| Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic |
Fisher Scientific Fisher Scientific Fisher Scientific |
BP358-212 BP363-500 BP362-500 |
| Sodium hypochlorite i.e., household bleach | The Clorox Co. | |
| Sodium thiosulfate, anhydrous | Fisher Scientific | S 475-212 |
| Beef extract, desiccated | Becton, Dickinson and Company | 211520 |
| Glycine | Fisher Scientific | G46-500 |
| Oiled sodocalcic glass wool
Or R-11 unfaced fiberglass insulation |
Isover
Johns Manville |
Bourre 725 QN |
| Polypropylene mesh | Industrial Netting | xN4510 |
| 2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple | Grainger | 6MW35 |
| 2″ Sch 40 PVC cap | Grainger | 5WDW3 |
| Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) | US Plastic Corp. | 62178 |
| Sample bottles for eluate- 1 liter | Fisher Scientific | 03-313-4F |
| 60 mL syringe | Fisher Scientific | NC9661991 |
| pH strips | Whatman | 2614 991 |
| Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm | McMaster-Carr | 4411K75 |
| Prefilter housing | Cole-Parmer | S-29820-10 |
Referências
- US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
- Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
- Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
- Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
- Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , (2000).
- Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
- Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
- Powell, K. L., Sililo, O. . Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. , 813-816 (2000).
- Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
- van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
- Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
- Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
- Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. , (2011).
- Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
- Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).
