Summary

Filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici

Published: March 03, 2012
doi:

Summary

I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati per concentrare i virus acquosa da un certo numero di gruppi di ricerca in tutto il mondo. Qui mostriamo un metodo semplice per la costruzione di filtri di lana di vetro e di dimostrare i filtri sono anche efficaci in concentrazione acquosa virali e patogeni batterici e protozoi.

Abstract

Il primo passo fondamentale per la valutazione dei livelli di agenti patogeni in sospetto di acqua contaminata è la concentrazione. Metodi di concentrazione tendono a essere specifica per un gruppo particolare agente patogeno, per esempio gli Stati Uniti Metodo Environmental Protection Agency 1623 per Giardia e Cryptosporidium 1, il che significa che più metodi sono necessari se il programma di campionamento di mira più di un gruppo patogeno. Un altro svantaggio dei metodi attuali è l'apparecchiatura può essere complicato e costoso, per esempio il metodo VIRADEL con cartuccia filtrante per concentrare il virus 1MDS 2. In questo articolo abbiamo descritto come creare filtri in lana di vetro per concentrare gli agenti patogeni a base acquosa. Dopo eluizione filtro, il concentrato è suscettibile ad una fase di seconda concentrazione, come centrifugazione, seguita da patogeno rilevamento e conteggio con metodi culturali o molecolari. I filtri sono diversi vantaggi. La costruzione è semplice ed i filtri possono essere costruiti ad unadimensioni ny per soddisfare le esigenze specifiche di campionamento. Le parti del filtro sono poco costosi, che permettono di raccogliere un gran numero di campioni senza incidere negativamente un bilancio del progetto. Grandi volumi di campione (100s a 1.000 s L) può essere concentrata a seconda del tasso di intasamento di torbidità. I filtri sono facilmente trasportabili e con attrezzatura minima, come una pompa e misuratore di portata, possono essere attuate in campo per il campionamento dell'acqua finito di bere, acque superficiali, sotterranee e scarichi agricoli. Infine, filtrazione lana di vetro è efficace per concentrare una varietà di tipi di patogeni così solo metodo è necessario. Qui riportiamo l'efficacia del filtro di concentrazione acquosa enterovirus umani, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, e il virus dell'influenza aviaria.

Protocol

1. Preparare la lana di vetro Prima e dopo aver fatto ogni partita di filtri, sterilizzare l'area di lavoro con una soluzione di candeggina al 10%. Indossare guanti e camice. Sterilizzare un secchio in autoclave a 121 ° C e 15 psi per almeno 20 minuti. Posizionare la lana di vetro nel secchio sterile. Saturare la lana di vetro con acqua ad osmosi inversa e lasciare macerare per 15 minuti. Scolare l'acqua ad osmosi inversa dal secchio. Saturare la lana di vetro …

Discussion

I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati da vari gruppi di ricerca a concentrarsi 3,5,6 virus enterici umani da una varietà di fonti d'acqua, come acqua potabile finito 7, 8,9 acque sotterranee, acque di superficie 10, 11 di acqua di mare, acque reflue 12, e scarichi agricoli 13. Qui riportiamo i filtri sono efficaci anche a concentrare il virus dell'influenza aviaria così come i patogeni batterici e protozoi Salmonella enterica (sierotipo …

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ringraziamo William T. Eckert per raccontare il video. Sviluppo del protocollo di lana di vetro faceva parte del Water Wisconsin e Trial Salute per rischi enterica (WAHTER Study), finanziato dalla US EPA STAR di Grant R831630. Alaska campioni sono stati raccolti da A. Reeves, A. Ramey, e B. Meixell con il sostegno finanziario USGS. Qualsiasi uso di nomi commerciali, prodotto o azienda è per scopi descrittivi soltanto e non implica riconoscimento alcuno da parte del governo degli Stati Uniti.

Materials

Name of reagent or item Company Catalogue number
Hydrochloric acid Fisher Scientific A144-500
Sodium hydroxide Fisher Scientific BP359-212
Phosphate Buffered Saline
Sodium chloride
Potassium phosphate-dibasic
Potassium phosphate-monobasic

Fisher Scientific
Fisher Scientific
Fisher Scientific

BP358-212
BP363-500
BP362-500
Sodium hypochlorite i.e., household bleach The Clorox Co.  
Sodium thiosulfate, anhydrous Fisher Scientific S 475-212
Beef extract, desiccated Becton, Dickinson and Company 211520
Glycine Fisher Scientific G46-500
Oiled sodocalcic glass wool
Or
R-11 unfaced fiberglass insulation
Isover

Johns Manville
Bourre 725 QN


Polypropylene mesh Industrial Netting xN4510
2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple Grainger 6MW35
2″ Sch 40 PVC cap Grainger 5WDW3
Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) US Plastic Corp. 62178
Sample bottles for eluate- 1 liter Fisher Scientific 03-313-4F
60 mL syringe Fisher Scientific NC9661991
pH strips Whatman 2614 991
Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm McMaster-Carr 4411K75
Prefilter housing Cole-Parmer S-29820-10

Referências

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Citar este artigo
Millen, H. T., Gonnering, J. C., Berg, R. K., Spencer, S. K., Jokela, W. E., Pearce, J. M., Borchardt, J. S., Borchardt, M. A. Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens. J. Vis. Exp. (61), e3930, doi:10.3791/3930 (2012).

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