機能 – スペーサー – 脂質(FSL)の構造は、生きた細胞とウイルス粒子の表面特性が活力を失うことなく変更することはできません。メソッドは、セル/ビリオンと自然と安定した表面の取り込みとFSL構造のソリューションの唯一の単純な接触が発生する必要があります。
変更/生体表面を可視化し、in vitroでの範囲および in vivo の環境で修飾された細胞/ビリオンを研究する能力は、特定の分子またはエンティティ全体の機能さらなる洞察を得ることが不可欠です。生物学的表面改質の研究は、一般的に生物の遺伝子工学や細胞表面の1,2の化学的部分の共有結合に制限されています。しかし、これらの伝統的な技法は、化学反応に細胞をさらす、またはそれらは重要な操作は、それらが煩雑、望ましい結果を達成するために必要、と彼らはまた、誤って修飾された細胞の生存能力/機能に影響を与える可能性があります。無害に細胞の表面を修正する簡単な方法が必要です。
最近、新しい技術、KODE Technologyは3つのコンポーネントからなる新規の構成要素の範囲を導入した:機能的な頭部基(F)、スペーサー(S)と脂質の尾部を(L)と機能 – スペーサー – 脂質またはFSLとして知られていますconstructs3。スペーサー(S)を水に分散可能な構造を提供するように選択され、まだ自発的に、安定して膜に組み込む予定。
FSLは、(F)これまでの血液型関連の決定、シアル酸、ヒアルロン酸多糖、蛍光色素、ビオチン、放射性標識、およびペプチド3-12の範囲を含む糖類の範囲を含む官能基を構築する。 FSLのコンストラクトは、上皮/子宮内膜細胞、赤血球、およびビリオンは、細胞接着/相互作用/分離/固定化を変更するには、品質管理システムと診断パネルを作成するには、ゼブラフィッシュ、精子、胚を変更することで使用され、in vitroおよびin のためにされている細胞/ビリオン3-12のin vivoイメージング。
細胞/ビリオンを変更するプロセスは一般的で非常に簡単です。最も一般的な手順は、37℃で1-2時間FSLの構造のためのソリューション℃で40から10を持つ細胞(脂質フリーメディア)のインキュベーションです。インキュベーションの間にFSLは、自発的に細胞膜に組み込む構築し、プロセスは完了です。洗浄はオプションです。ビリオンはkodevirions 10である間、FSLの構造によって改変された細胞は、kodecytes 6月9日として知られている。
直接注入とkodecytes / kodevirionsが実験動物モデル7,8,10で使用されているとしてFSLが構築されます。すべてkodecytes / kodevirionsはFの部分7,8,10,11の新しい機能を得ながら、通常の活力や機能を保持するように見える。
生体適合性メディア、細胞膜への自発的な組み込み、および見かけの低毒性の分散性の組み合わせは、FSLは、細胞とウイルス粒子の研究のために貴重な研究ツールを構築することができます。
FSLの構造と変更細胞とウイルス粒子は非常にシンプルで堅牢なテクニック3月11日です。変更されていない細胞から改変された細胞とウイルス粒子を構成FSLを記述し、区別するために、それらはそれぞれ60から10 kodecytesとkodevirionsと呼ばれているが、導入した官能基は、その膜上に存在することを示すことができるときだけ。 kodecytesのFSL構造の異なる濃度で加えられた場合、それらは、例えば15μgの/ mLのkodecytes、または複数のFSLを使用した場合は、combined term、その作成に使用FSL構造の溶液の濃度によって参照することができます+ビオチンkodecytes 7,8を例えば。異なる細胞が説明の細胞型を含む、比較される際には、推奨され、例えば、赤血球のビオチンkodecytesまたは子宮内膜ビオチンkodecytes 7,8。
挿入のプロセスは(異なるレートではあるが)非常に堅牢で挿入ですがと、4から大規模な温度範囲で行われます – 37℃、数分から数時間、接触時間、温度、FSLの濃度(の再現可能な挿入厳格な制御を取得する)希釈剤製剤を含めて、そしてより少ない程度の細胞濃度には必要です。これまでに、すべてのFSLの構造が同じ技法4月11日で細胞を変更するために使用できる、しかしそれは一定の条件を変更する作業の流れ及び/または細胞/ビリオンの最適な処理要件へのより有利になることが期待される。望ましい効果を達成するために正確なFSLの濃度は、ユーザ4によって決定される必要があります。結果FSLは、改変された細胞を構築/ビリオンは、通常、生物学的または分析システム4-11の変更されていないセル/ビリオンと同じ方法で使用することができます。 FSLの構造がときに脂質のソリューション7,8との接触で徐々に修正された表面から溶出される、またはアクティブセル11によって消費されるように、これらの問題は時間の期間にわたって得られる信号や活動のレベルに関して考慮する必要があります。挿入は、固定液は脂質溶出溶剤が含まれていないと官能基が固定と互換性が提供された後Kodecytes(例えば、グルタルアルデヒド/ホルマリン)に固定することができる。あるいは固定された細胞は、FSLの構文を使用して変更することができます。
細胞とウイルス粒子表面の改質に加えて、FSLの構造は、循環細胞のin vivoで修正7引き起こす実験動物の循環に直接注入することができるとウイルス12、毒素、12および抗体7を阻害する。 FLSの構文は、リポソームを飾るために使用されており、それらが固定化、紙の表面13上に印刷することができますし、診断アッセイに使用することができます。
簡単にFSLコンストラクトの増加範囲で生きている細胞を変更する機能は、細胞表面の生物学の研究のための有用な研究と開発ツールであることを証明する必要があります。
The authors have nothing to disclose.
著者らは、ビデオを提示するためのSigma – Aldrich社からダンベスに感謝。我々はまた、ドン支店、エブゲニイCherny、スコットChesla、エリザベスHadac、アマンダハリソン、ダミアンヒースコート、アニカハルト、チュアン – チンラン、スザンナマッキントッシュ、Sarvani Komarraju、エレナKorchagina、キャロラインオリバー、マーティンオルソン、スティーブンパーカー、イゴールRodinovを、感謝その結果、設計、FSLの構造の合成と生物活性を決定への貢献のためのアレクサンダーTuzikov、とエレノアウィリアムズ。
Sigma product number | Sigma name | Construct (KODE Biotech name) |
F9307 | FSL-A(tri) | FSL-A(GALNa3[Fa2]GALb)-SA1-L1 |
F9557 | FSL-B(tri) | FSL-B(GALa3[Fa2]GALb)-SA1-L1 |
F9807 | FSL-GB3 | FSL-GB3(GALa4GALb4GLCb)-SA1-L1 |
F9682 | FSL-Lea(tri) | FSL-LEA(GALb3[Fa4]GLCNb)-SA1-L1 |
F9182 | FSL-biotin | FSL-CONJ(1Biotin)-SC2-L1 |
F9432 | FSL-Galili | FSL-GALILI(GALa3GALb4GLCNb)-SA1-L1 |
F1058 | FSL-Fluorescein | FSL-FLRO4(fluorescein)-SA2-L1 |