성인 전체 마운트 준비 Drosophila 복부 신경 코드
Summary
<em> 생체내에</em성인> 해부<em> Drosophila</em> 복부 신경 코드 (VNC)이 증명됩니다. 이 특별한 절개 방법은 고해상도 이미징을위한 형광 염료와 함께 거대한 섬유 뉴런의 후속 라벨을 허용 VNC 거의 손상을 초래합니다.
Abstract
뉴런의 axonal와 돌기 형태를 분석하기 위해서는의 연결 구조의 정확한 라벨을 얻기 위해 필수적입니다. 노 조직 손상이 거의 잘 레이블 샘플을 준비하는 것은 그러므로 돌연변이 변이의 식별을 허용, 우리는 세포 형태를 분석하고 서로에게 개별 샘플을 비교할 수 있습니다.
시연 절개 방법에서 신경 시스템은 성인 플라이 내부에 대부분 남아있다. 지느러미 절개를 통해 복부와 흉부 열리고 있으며, 대부분의 내부 장기가 제거됩니다. GF 셀 본문과 dendrites을 포함하고있는 두뇌 손상 머리에이 남아있는 동안 복부 신경 코드 (VNC)와 거대한 섬유 (GFS) 1의 큰 axons를 포함하는 자궁 결합 (CVC)의 단지 등의 측면이 노출 . 이 준비에서 VNC 대부분의 신경들은 근육에 연결되어 유지됩니다.
해부 다음, 형광 염료와 함께 거대한 섬유 (GF)의 세포내 작성이 증명됩니다. CVC에서는 GF의 axons는 등의 표면에 위치하고 있으며 따라서 차등 간섭 대비 (DIC) 광학 장치와 현미경으로 쉽게 시각하실 수 있습니다. 이것은이 사이트에서 염료와 GF의 axons의 주입은 VNC에서 axons과 단말기를 포함한 전체 GF 레이블을 수 있습니다. 이 방법은 신경이 epifluorescent 현미경으로 기입 후 즉시 군데 수 있도록 GFS의 안정적이고 강력한 얼룩을 초래합니다. 또는 형광 신호는 높은 해상도 공촛점 현미경에 적합한 표준 immunohistochemistry 절차 3을 사용 강화 수 있습니다.
Protocol
Discussion
신경 계통은 플라이 본체에서 추출하지 않고 해부를하실 수 있습니다. 이 두 장점을 가지고 먼저, 해부 신경 시스템에 약간의 손상을 초래하고, 둘째, 대부분의 신경은 근육과 감각 기관에 붙어있어. 로 설명 절개를, 공연하는 것은 GFS의 정직 염료 라벨에 대한 샘플을 준비합니다. 편리, GFS에 postsynaptic motoneurons은 근육에 붙어있어. Axons 따라서, 더 이상 신경이 살아 유지 피해가 있습니다. 또한, 신?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
설명이 프로젝트는 내용이 전적으로 저자의 책임이며 반드시 아동 보건 인간 발달이나 국립 연구소의 공식 견해를 대변하지 않는 태그를 아동 보건 인간 발달의 국립 연구소에서 부여 번호 R01HD050725 지원했습니다 보건 국립 연구소. 우리는 원고와 동영상을 자신의 입력을위한 Godenschwege 실험실뿐만 아니라 바바라 Schreader의 회원 감사합니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
| Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
| Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
| Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
| Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
| Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
| Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
| Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
| Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
| 3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
| Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |
Referências
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