<em> В естественных условиях</em> Рассечение взрослых<em> Drosophila</em> Брюшной нервной цепочки (VNC) демонстрируется. Данный метод вскрытия причин незначительный ущерб VNC позволяет последующих маркировки гигантские нейроны волокна с флуоресцентным красителем для высоким разрешением.
Для анализа аксонального и дендритные морфологии нейронов, крайне важно получить точную маркировку нейронных структур. Подготовка и помечены образцы с практически нет повреждения тканей позволяет проанализировать морфологии клеток и сравнивать отдельные образцы друг с другом, следовательно, позволяющие идентификацию мутантных аномалий.
В методе вскрытия показали нервной системы остается главным образом внутри взрослой мухи. Через спинной разрез брюшной полости и грудной клетки открыты, и большинство внутренних органов удаляются. Только спинной стороне брюшной нервной цепочки (VNC) и соединительной шейки (CVC), содержащих большое аксоны гигантских волокон (GFS) 1 подвергаются, в то время как мозг с телом Ф. клетки и дендриты остается 2 в нетронутыми голову . В этот препарат наиболее нервы VNC должна оставаться привязаны к своим мышцам.
После вскрытия, внутриклеточные заполнение гигантского волокна (GF) с флуоресцентным красителем демонстрируется. В CVC GF аксонов расположены на спинной поверхности и тем самым могут быть легко визуализированы под микроскопом с дифференциалом интерференционного контраста (DIC) оптики. Это позволяет инъекции аксонов GF с красителем на этом сайте для обозначения всей GF включая аксонов и их терминалов в VNC. Этот метод приводит к надежным и сильным окрашивание GFs позволяет нейронам для включения в образ сразу же после заполнения epifluorescent микроскопом. Кроме того, флуоресцентный сигнал может быть усилен с помощью стандартных процедур иммуногистохимии 3 подходит для высокое разрешение конфокальной микроскопии.
Нервной системы можно разрезать, не извлекая его из летать тела. Это имеет два преимущества, во-первых, вскрытие причин незначительный ущерб нервной системе, во-вторых, большинство нервов пребывания придает мышц и органов чувств. Выполнение рассечение, как описано, готовит образец для ?…
The authors have nothing to disclose.
Проекта, описанного была поддержана грантом Количество R01HD050725 из Национального института детского здоровья и человеческого развития, TAG содержание несут их авторы и не обязательно отражает официальную точку зрения Национального института детского здоровья и человеческого развития или Национальный институт здоровья. Мы благодарим членов лаборатории Godenschwege а также Барбара Schreader к их участию в рукописи и видео.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
---|---|---|---|
Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |