成人の全体のマウントの準備ショウジョウバエ腹神経索
Summary
アン<em> in vivoで</em成人の>解剖<em>ショウジョウバエ</em>腹神経索（VNC）が示されています。この特定の解剖法は、高分解能のイメージングのための蛍光染料と巨大な繊維の神経細胞のその後のラベル付けを可能にするVNCへのダメージが少ない。
Abstract
ニューロンの軸索と樹枝状形態を分析するために、それはニューロン構造の正確なラベル付けを得るために不可欠です。ない組織の損傷に少しでも標識サンプルを準備するので変異体異常の同定を可能にする、私たちは細胞の形態を分析し、お互いに個々のサンプルを比較することができます。
実証解剖の方法では神経系は成人フライの内側主に残ります。背側を切開して、腹部と胸部が開かれ、ほとんどの内臓のが削除されます。 GFの細胞体と樹状突起を含む脳がそのまま頭に2のまま腹神経索（VNC）と巨大な繊維（GFS）1の大きい軸索を含む子宮頸結合（CVC）の唯一の背側は、公開されています。この準備ではVNCのほとんどの神経はそれらの筋肉に接続されたままにしてください。
解剖の後、蛍光色素を持つ巨大な繊維（GF）の細胞内の充填が実証される。 CVCにGFの軸索は、背面に配置されていますので、微分干渉コントラスト（DIC）光学系と顕微鏡下で容易に可視化することができる。これは、このサイトでは染料とGFの軸索の注入は、VNCの軸索とその端子を含む全体のGFにラベルを付けることができます。ニューロンは、落射蛍光顕微鏡で充填した後、直ちに画像化できるようにGFSの信頼性と強力な染色では、このメソッドの結果。また、蛍光シグナルは高分解能共焦点顕微鏡に適した標準的な免疫組織化学の手順3を使用して拡張することができます。
Protocol
Discussion
神経系は、ハエの体からそれを抽出することなく解剖することができます。これは、最初、次の2つの利点が、解剖は神経系へのダメージが少ない、そして第二に、ほとんどの神経は、筋肉や感覚器官に付着したままでいる。解剖を行って、説明されているように、まっすぐ前方に色素標識GFSのためのサンプルを準備します。便利に、GFSにシナプス後ニューロンは、筋肉に付着したままでいる…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
プロジェクトは、もっぱら著者の責任であり、必ずしも母子保健と人間開発や国立研究所の公式見解を表していないコンテンツをタグ付けするために母子保健と人間開発の国立研究所からの助成金番号R01HD050725によってサポートされていました説明国立衛生研究所。私たちは、原稿とビデオへの入力のためGodenschwegeラボだけでなく、バーバラSchreaderのメンバーに感謝。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
| Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
| Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
| Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
| Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
| Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
| Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
| Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
| Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
| 3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
| Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |
Referências
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