एक<em> Vivo में</em> वयस्क के विच्छेदन<em> ड्रोसोफिला</em> उदर तंत्रिका कॉर्ड (VNC) का प्रदर्शन है. यह विशेष रूप से विच्छेदन विधि VNC के उच्च संकल्प इमेजिंग के लिए फ्लोरोसेंट रंजक के साथ विशाल फाइबर न्यूरॉन्स के बाद लेबलिंग की अनुमति के लिए थोड़ा नुकसान का कारण बनता है.
न्यूरॉन्स की axonal और वृक्ष के समान आकारिकी का विश्लेषण करने के लिए, यह आवश्यक है neuronal संरचनाओं के सटीक लेबलिंग प्राप्त है. कोई ऊतकों को नुकसान के लिए थोड़ा के साथ अच्छी तरह से लेबल के नमूने की तैयारी हमें सेल आकारिकी का विश्लेषण करने के लिए और एक दूसरे से व्यक्तिगत नमूनों की तुलना में सक्षम बनाता है, इसलिए उत्परिवर्ती विसंगतियों की पहचान की अनुमति.
प्रदर्शन विच्छेदन विधि में तंत्रिका तंत्र ज्यादातर वयस्क मक्खी के अंदर रहता है. चीरा के माध्यम से एक पृष्ठीय, पेट और छाती खोले जाते हैं और आंतरिक अंगों का सबसे को हटा रहे हैं. केवल उदर तंत्रिका कॉर्ड (VNC) और गर्भाशय ग्रीवा (सीवीसी) संयोजी विशाल (GFS) फाइबर 1 की बड़ी axons युक्त पृष्ठीय पक्ष उजागर, कर रहे हैं जबकि GF सेल शरीर और dendrites युक्त मस्तिष्क बरकरार सिर में 2 रहता है . और इस तैयारी में VNC के सबसे नसों अपनी मांसपेशियों को संलग्न रहना चाहिए.
विच्छेदन के बाद, एक फ्लोरोसेंट रंजक के साथ विशाल फाइबर (GF) के intracellular भरने का प्रदर्शन है. सीवीसी GF axons पृष्ठीय सतह पर स्थित हैं और इस प्रकार अंतर हस्तक्षेप विपरीत (डीआईसी) प्रकाशिकी के साथ एक खुर्दबीन के नीचे आसानी से देखे जा सकते हैं. यह इस साइट पर GF axons की डाई के साथ इंजेक्शन VNC और axons और उनके टर्मिनल सहित पूरे GF लेबल करने की अनुमति देता है. इस विधि GFS का विश्वसनीय और मजबूत धुंधला अनुमति न्यूरॉन्स एक epifluorescent खुर्दबीन के साथ भरने के बाद तुरंत imaged में परिणाम है. वैकल्पिक रूप से, फ्लोरोसेंट संकेत मानक immunohistochemistry 3 प्रक्रियाओं के उच्च संकल्प confocal माइक्रोस्कोपी के लिए उपयुक्त का उपयोग बढ़ाया जा सकता है है.
तंत्रिका तंत्र यह मक्खी के शरीर से निकालने के बिना dissected किया जा सकता है है. इससे दो फायदे है, पहली बार, विच्छेदन तंत्रिका तंत्र के लिए थोड़ा नुकसान का कारण बनता है, और दूसरा, सबसे नसों रहने के मांसपेशियों औ…
The authors have nothing to disclose.
वर्णित परियोजना अनुदान संख्या R01HD050725 द्वारा नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ बाल स्वास्थ्य और मानव विकास से समर्थित किया गया था करने के लिए टैग के लिए सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ बाल स्वास्थ्य और मानव विकास या की आधिकारिक विचार जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व करते हैं स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान. हम अपनी पांडुलिपि और वीडियो इनपुट के लिए Godenschwege के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रयोगशाला बारबरा Schreader के सदस्यों को धन्यवाद.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
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Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |