Summary

वयस्क के पूरा पर्वत तैयार ड्रोसोफिला Ventral तंत्रिका गर्भनाल विशालकाय फाइबर डाई के इंजेक्शन के लिए

Published: June 04, 2011
doi:

Summary

एक<em> Vivo में</em> वयस्क के विच्छेदन<em> ड्रोसोफिला</em> उदर तंत्रिका कॉर्ड (VNC) का प्रदर्शन है. यह विशेष रूप से विच्छेदन विधि VNC के उच्च संकल्प इमेजिंग के लिए फ्लोरोसेंट रंजक के साथ विशाल फाइबर न्यूरॉन्स के बाद लेबलिंग की अनुमति के लिए थोड़ा नुकसान का कारण बनता है.

Abstract

न्यूरॉन्स की axonal और वृक्ष के समान आकारिकी का विश्लेषण करने के लिए, यह आवश्यक है neuronal संरचनाओं के सटीक लेबलिंग प्राप्त है. कोई ऊतकों को नुकसान के लिए थोड़ा के साथ अच्छी तरह से लेबल के नमूने की तैयारी हमें सेल आकारिकी का विश्लेषण करने के लिए और एक दूसरे से व्यक्तिगत नमूनों की तुलना में सक्षम बनाता है, इसलिए उत्परिवर्ती विसंगतियों की पहचान की अनुमति.

प्रदर्शन विच्छेदन विधि में तंत्रिका तंत्र ज्यादातर वयस्क मक्खी के अंदर रहता है. चीरा के माध्यम से एक पृष्ठीय, पेट और छाती खोले जाते हैं और आंतरिक अंगों का सबसे को हटा रहे हैं. केवल उदर तंत्रिका कॉर्ड (VNC) और गर्भाशय ग्रीवा (सीवीसी) संयोजी विशाल (GFS) फाइबर 1 की बड़ी axons युक्त पृष्ठीय पक्ष उजागर, कर रहे हैं जबकि GF सेल शरीर और dendrites युक्त मस्तिष्क बरकरार सिर में 2 रहता है . और इस तैयारी में VNC के सबसे नसों अपनी मांसपेशियों को संलग्न रहना चाहिए.

विच्छेदन के बाद, एक फ्लोरोसेंट रंजक के साथ विशाल फाइबर (GF) के intracellular भरने का प्रदर्शन है. सीवीसी GF axons पृष्ठीय सतह पर स्थित हैं और इस प्रकार अंतर हस्तक्षेप विपरीत (डीआईसी) प्रकाशिकी के साथ एक खुर्दबीन के नीचे आसानी से देखे जा सकते हैं. यह इस साइट पर GF axons की डाई के साथ इंजेक्शन VNC और axons और उनके टर्मिनल सहित पूरे GF लेबल करने की अनुमति देता है. इस विधि GFS का विश्वसनीय और मजबूत धुंधला अनुमति न्यूरॉन्स एक epifluorescent खुर्दबीन के साथ भरने के बाद तुरंत imaged में परिणाम है. वैकल्पिक रूप से, फ्लोरोसेंट संकेत मानक immunohistochemistry 3 प्रक्रियाओं के उच्च संकल्प confocal माइक्रोस्कोपी के लिए उपयुक्त का उपयोग बढ़ाया जा सकता है है.

Protocol

1. उदर तंत्रिका कॉर्ड के विच्छेदन विच्छेदन और डाई GF के भरने कमरे के तापमान पर किया जा सकता है. सभी विच्छेदन ठंड कदम (4 डिग्री सेल्सियस) खारा नीचे सेल चयापचय धीमी और न्यूरॉन्स जीवित अब रख किया जान?…

Discussion

तंत्रिका तंत्र यह मक्खी के शरीर से निकालने के बिना dissected किया जा सकता है है. इससे दो फायदे है, पहली बार, विच्छेदन तंत्रिका तंत्र के लिए थोड़ा नुकसान का कारण बनता है, और दूसरा, सबसे नसों रहने के मांसपेशियों औ…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

वर्णित परियोजना अनुदान संख्या R01HD050725 द्वारा नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ बाल स्वास्थ्य और मानव विकास से समर्थित किया गया था करने के लिए टैग के लिए सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ बाल स्वास्थ्य और मानव विकास या की आधिकारिक विचार जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व करते हैं स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान. हम अपनी पांडुलिपि और वीडियो इनपुट के लिए Godenschwege के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रयोगशाला बारबरा Schreader के सदस्यों को धन्यवाद.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit Dow Corning    
Dissection Microscope AmScope SM-2TZ  
Vannas Scissors Superfine Academic Instruments VS1023  
Dumont Forceps Dumontstar 55 Fine Science Tools 11295-51  
Austerlitz Insect pins Fine Science Tools 26002-10 Ø 0.1mm
Borosilicate Glass Electrodes World Precision Instruments 1B100F-4  
Vertical Pipette Puller 700c David Kopf Instruments Model 700C  
Lucifer Yellow CH dilithium salt Sigma L0259 1% in H2O
Fixed Stage Upright Microscope & Camera Nikon FN-1 & DS-U2 Camera  
Plan Fluor 10X Air Objective Nikon CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm  
Fluor 40X water dipping Objective Nikon CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm  
3D hydraulic Micromanipulator Narishige International Model MW0-3  
Amplifier Getting Instruments, Inc. Model 5A  

Referências

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Citar este artigo
Boerner, J., Godenschwege, T. A. Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection. J. Vis. Exp. (52), e3080, doi:10.3791/3080 (2011).

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